唐源 作品数:17 被引量:38 H指数:4 供职机构: 贵州大学动物科学学院 更多>> 发文基金: 贵州省自然科学基金 贵州省“十一五”农业科技攻关项目 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
产气荚膜梭菌cpe^+菌株的筛选与鉴定 被引量:1 2009年 参考相关资料,针对产气荚膜梭菌肠毒素基因(cpe)设计合成1对特异性引物,对34株贵州分离株进行PCR扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序和分析。结果在34株产气荚膜梭菌贵州分离株中有1株C型菌株扩增出与预期大小相一致的目的片段,经克隆测序后,该片段大小为233 bp,其与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99.6%~100%,推导氨基酸同源性为98.7%~100%,表明所扩增产物为产气荚膜梭菌的肠毒素基因片段。本试验筛选鉴定出1株产气荚膜梭菌cpe+菌株,为今后进一步探讨产气荚膜梭菌性食物中毒机制奠定了基础。 唐源 杨鹤峰 王开功 周碧君 罗阿东 文明关键词:产气荚膜梭菌 肠毒素基因 克隆 贵阳市鸡群中禽流感不同亚型抗体的检测与分析 被引量:2 2008年 罗阿东 唐源 文明 周碧君 汪德生 岳筠 周思旋关键词:禽流感 抗体监测 鸡群 产气荚膜梭菌肠毒素基因原核表达载体的构建 2009年 以含C型产气荚膜梭菌分离株(CP2)肠毒素基因的克隆载体pMD18-T-cpe为材料,根据产气荚膜梭菌开放阅读框设计合成一对特异性引物,采用PCR技术对其进行扩增,经BamHI和EcoRI双酶切后,从胶上回收目的基因,与经过相同两种内切酶处理的原核表达载体pET32a连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞后,提取质粒进行PCR和BamHI/EcoRI双酶切鉴定后测序。结果表明,肠毒素基因已成功地克隆到原核表达载体上(重组质粒命名为pET32a-cpe),从而构建了产气荚膜梭菌肠毒素基因的原核表达质粒。 唐源 赵健湖 罗阿东 王开功 周碧君 文明关键词:产气荚膜梭菌 肠毒素基因 原核表达载体 C型产气荚膜梭菌贵州株肠毒素基因克隆与序列分析 采用用多重PCR方法对34株产气荚膜梭菌贵州分离株进行鉴定,获得1株肠毒素(CPE)阳性C型产气荚膜梭菌(CP2株)。参照国外发表的cpe全基因序列,设计合成一对特异性引物,采用PCR技术对CP2株进行扩增,将扩增产物连... 唐源 文明 罗阿东 鲍娟 周碧君 王开功关键词:产气荚膜梭菌 肠毒素 特异性引物 文献传递 产气荚膜梭菌PCR分型与肠毒素基因的克隆及序列分析 产气荚膜梭菌为一类革兰氏阳性产芽孢的厌氧梭菌,是一种重要的人畜共患病病原体,本试验对产气荚膜梭菌的研究包括四个方面: 1.羊源产气荚膜梭菌贵州分离株多重 PCR分型研究根据产气荚膜梭菌α、β、ε和ι毒素基因分别合成4对... 唐源关键词:肠毒素基因 生物学特性 致病机理 文献传递 猪支气管败血波氏杆菌FlaA基因克隆与序列分析 2008年 参考相关资料,针对支气管败血波氏杆菌Bordetella bronchiseptica FlaA基因上游序列选择合成1对特异性引物,对贵州分离株(B8株和B27株)进行PCR扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体上,并转化到DI-L5a感受态细胞中,提取重组质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果获得分子长为237bp的特异性DNA片段;核苷酸同源性分析表明,贵州分离株间的同源性高达99.1%,与Bb参考株的同源性为97.8%~99.6%,与Bpp参考株的同源性为95.6%-97.4%;系统进化树分析表明,贵州分离株与Bb参考株亲缘关系较近,而与Bpp参考株亲缘关系远。 袁翠霞 伍祥龙 唐源 文明 周碧君 汪德生关键词:支气管败血波氏杆菌 基因克隆 C型产气荚膜梭菌肠毒素基因的克隆与序列分析 被引量:1 2009年 研究参照国外发表的产气荚膜梭菌肠毒素全基因序列设计合成1对特异性引物,采用PCR技术对C型产气荚膜梭菌贵州分离株(CP2株)肠毒素基因进行扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体,并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果:获得的基因序列全长960bp,编码319个氨基酸。同源性分析结果表明贵州分离株CP2株与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99.4%99.8%,推导氨基酸同源性为99.1%~99.7%。 唐源 杨鹤峰 王开功 周碧君 邓志爱 罗阿东 文明关键词:产气荚膜梭菌 肠毒素基因 克隆 支气管败血波氏杆菌的鉴定及药敏试验 被引量:1 2008年 从猪萎缩性鼻炎(AR)临床症状猪群分离出34株疑似支气管败血波氏杆菌(Bb),对分离菌进行形态结构、染色特性、培养性状和生化特性等方面的测定,结果这些分离菌均符合Bb的生物学特征;对BbFlaA基因进行PCR扩增,所有分离菌均能扩增出特异性DNA条带,与传统方法的鉴定结果完全一致,且最小检出量为0.64pg;而猪鼻腔和肺组织中常见的多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌及枯草芽孢杆菌均未出现任何DNA条带。药敏试验显示,这些分离物对多黏霉素B、丙氟哌酸、氟哌酸、卡那霉素和庆大霉素均表现高度敏感。 袁翠霞 袁翠连 罗阿东 徐景峨 唐源 文明 周碧君 汪德生关键词:猪萎缩性鼻炎 支气管败血波氏杆菌 PCR 药敏试验 鸵鸟源新城疫病毒TN株F基因的克隆与序列分析 被引量:3 2007年 应用PCR技术对1株鸵鸟源新城疫病毒TN株融合蛋白基因(F基因)进行扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定,并与国内外NDV毒株对应序列进行比较分析.结果表明,TN株F基因的长度为1 662 bp,可编码553个氨基酸,其裂解位点的氨基酸序列为112G-R-Q-G-R-L117,为1株新城疫弱毒株;与贵州省其他禽源(包括肉鸡、蛋鸡、越南斗鸡、七彩山鸡和鸽子等)毒株间的核苷酸同源性为84.0%~89.6%,氨基酸同源性为87.5%~92.1%;与国内外NDV代表株(Lasota株、B1株、F48E9株、CH2000株和TW2000株)的核苷酸同源性为84.4%~98.6%,氨基酸同源性为88.3%~98.0%.经系统发生树分析,TN株与NDV弱毒株Lasota株和B1株在同一分支上,属于基因II型NDV. 文明 伍祥龙 唐源 温贵兰 汪德生 周碧君关键词:鸵鸟 新城疫病毒 融合蛋白基因 山羊痘病毒SYBR Green I荧光PCR检测方法的建立 被引量:7 2008年 为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green I荧光PCR方法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物。以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立并优化SYBR Green I模式荧光PCR检测GPV的ITR基因的方法,并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green I荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速。 罗阿东 唐源 文明 岳筠 程振涛 徐春志关键词:山羊痘病毒 实时定量PCR 熔解曲线