冯尔玲
- 作品数：104 被引量：248H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因突变体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体,以进行后续ArgT功能研究。方法:根据福氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用λ-Red重组系统对argT基因进行缺失,并经PCR验证;采用定点突变的方法构建ArgT非降解株,并经SDS-PAGE验证;对野生株、argT缺失突变株和ArgT非降解突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究。结果:构建了2457T的argT缺失突变株和ArgT非降解突变株;2种突变株初始生长均较慢,但最终和野生株状态一致;2种突变株利用甘露醇的能力都比野生株强,而利用葡萄糖的能力降低。结论:获得了福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体。
- 赵格曹晓玉朱力刘先凯冯尔玲陈惠鹏王恒樑
- 关键词：缺失突变体定点突变
- 弗氏2a志贺菌CobB和GtrⅡ蛋白水平及毒力相关性的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究翻译后修饰基因cobB和gtrⅡ对志贺菌致病能力的影响。方法采用λ-Red重组系统构建福氏2a志贺菌2457T的cobB,gtrⅡ缺失突变株,进行初步的毒力评价,随后制备野生株,cobB,gtrⅡ缺失突变株的全菌蛋白样品,并进行双向电泳比较野生株和缺失株在蛋白表达谱上的差异。结果成功构建cobB、gtrⅡ基因的缺失突变株,豚鼠角膜实验发现cobB、gtrⅡ缺失株症状稍弱于野生株,但在全菌蛋白表达谱中野生株和突变株并无明显差异。结论双向电泳难以有效地呈现CobB和GtrⅡ的翻译后修饰能力。
- 刘小青朱力冯尔玲马姗姗魏华王恒樑
- 伤寒糖蛋白的生物制备方法及其应用
- 本发明公开了一种伤寒糖蛋白的生物制备方法及其应用。本发明公开一种细菌多糖修饰的蛋白的制备方法，包括将脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL的底物蛋白与脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL在O-抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表...
- 王恒樑朱力彭哲慧潘超冯尔玲刘先凯吴军孙鹏曾明王斌
- 炭疽芽孢杆菌A16R株lysA基因缺失突变株的构建
- 2013年
- 目的构建炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)A16R株lysA基因缺失突变株,为后续的定量蛋白质组学研究奠定基础。方法以炭疽杆菌活疫苗A16R株lysA基因为目的缺失基因,利用软件设计上下游同源臂以及抗性基因的引物,用同源重组酶将3个片段连入质粒中,构建重组质粒,并将重组质粒导入炭疽杆菌A16R感受态细胞中,筛选炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,对其进行验证。最后绘制缺失突变株和野生株生长曲线并进行生理生化分析。结果成功构建了重组质粒,经同源重组后获得lysA基因缺失突变株。鉴定表明目的基因已经丢失。结论成功获得炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,为定量蛋白质组学研究奠定了基础,也为炭疽杆菌重要基因功能的研究建立了良好的技术平台。
- 高飞王东澍冯尔玲朱力王恒樑廖祥儒刘先凯
- 关键词：同源重组
- 应用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌体内表达基因被引量：17
- 2005年
- 为寻找新型抗结核药物靶标 ,采用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌的体内诱导基因。首先构建了结核分枝杆菌基因组质粒表达文库 ,库容量为 1 0 2× 1 0 5CFU。再用经过结核分枝杆菌和大肠杆菌的裂解产物吸附过的结核病人血清 ,通过原位免疫印迹来筛选基因组表达文库 ,共获得 1 6个阳性克隆。对阳性克隆进行测序和生物信息学分析 ,发现该 1 6个阳性克隆可能包含 2 2个开放阅读框 (ORF)。按照功能将其分为 7类基因 :脂类代谢 2个、信号途径 5个、PE/PPE蛋白家族 2个、中间产物与能量代谢 6个、细胞壁与细胞处理 1个、假想蛋白 4个和与牛型分枝杆菌定向进化同源的 2个 ,其中部分基因可能与毒力相关 。
- 李霆高志勇王恒冯尔玲陈宗德李新月黄留玉黄翠芬
- 关键词：结核分枝杆菌药物靶标毒力
- 炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点被引量：5
- 2014年
- 【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。
- 高志奇王东澍冯尔玲王秉翔惠一鸣韩少波焦磊刘先凯王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌分子分型
- 一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法
- 本发明公开了一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法。本发明提供了一种DNA分子，其核苷酸序列为序列表中的序列1。含有所述DNA分子的重组载体、转基因细胞系或重组菌。所述重组载体为将所述的DNA分子插入穿梭...
- 王恒樑刘先凯王东澍王华贵冯尔玲
- 文献传递
- MM3工程菌的大规模发酵培养工艺研究
- 1997年
- 首先在50L发酵罐上研究了MM3工程菌的发酵培养工艺。确定了接种量、搅拌转速、pH和补料速率等参数,活菌数可达每毫升211亿。以溶氧为放大准则可成功地将该工艺在200L国产发酵罐上再现。说明该工艺具有可放大性,可在全国各药厂推广应用。
- 王叙甫方宏清陈明王焕金谢妍阎明凡张群伟冯尔玲于公义
- 关键词：疫苗大肠杆菌发酵
- 一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用
- 本发明公开了一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用。该方法包括如下步骤：灭活甲型副伤寒沙门氏菌的O抗原链长控制酶基因cld，得到O‑抗原链长控制酶基因cld缺陷的甲型副伤寒沙门氏菌；使鼠伤寒沙门氏菌O抗原链长控制...
- 吴军孙鹏刘波唱韶红巩新王恒樑朱力潘超冯尔玲
- 文献传递
- 炭疽芽胞杆菌A16R株FtsE蛋白的可溶性表达和纯化
- 2014年
- 目的:构建炭疽芽胞杆菌FtsE蛋白的原核表达载体,实现其在原核表达系统中的可溶性表达,并纯化融合蛋白。方法:用PCR方法从炭疽芽胞杆菌A16R株扩增得到ftsE基因片段,酶切后连接到pET28a原核表达载体,构建重组表达质粒pET28a-ftsE,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,筛选可溶性诱导表达与纯化融合蛋白的条件,以获得高纯度融合蛋白。结果:构建了FtsE蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;在20℃下,经0.1 mmol/L IPTG诱导3 h表达的产物主要是可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化获得了高纯度的FtsE融合蛋白,经Western印迹检测,目的蛋白表达正确。结论:实现了炭疽芽胞杆菌FtsE蛋白原核表达系统的可溶性表达并获得了高纯度融合蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 李强刘先凯冯尔玲朱力王沛王红杨新华赵美玲姜永强王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌
