任丽伟
- 作品数：16 被引量：34H指数：4
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 聚乙烯亚胺介导NIH-3T3细胞体外转染pEGFP-N1系统优化
- 2010年
- 目的优化聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的细胞转染以提高目的基因在细胞中的表达强度。方法根据PEI/DNA不同的质量比(0:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1)利用凝胶阻滞分析结合的情况;不同质量比PEI/DNA形成的复合物对NIH-3T3细胞的转染通过细胞表达强度获得最佳PEI/DNA质量比;比较实验组1(PEI/DNA质量比2:1)、实验组2(重复PEI/DNA质量比2:1)及实验组3(PEI/DNA质量比4:2)3种转染方案,探讨重复转染的方法是否提高细胞表达强度。结果①通过凝胶阻滞分析PEI/DNA能够稳定结合的质量比是1:1～10:1;②PEI/DNA复合物对NIH-3T3细胞进行转染,其荧光表达强度当PEI/DNA(质量比)≤2时随着PEI的增加而提高,当PEI/DNA(质量比)>2时,荧光表达强度反而降低;③采用重复转染的方法实验组2细胞荧光表达强度(24.08±0.28)%明显高于实验组1(8.97±4.02)%和实验组3(14.24±2.68)%(P<0.05)。结论在PEI/DNA(质量比)=2的条件下,PEI/DNA复合物转化NIH-3T3细胞的效果比较理想,重复转染可以提高细胞转染后荧光表达强度。
- 丁爱军任丽伟许峰秦玉蓉傅德智李碧春
- 关键词：聚乙烯亚胺细胞转染
- 鸡抗病毒Mx蛋白基因在毕赤酵母GS115中的表达
- 2010年
- 为了利用酵母表达技术制备鸡抗病毒Mx蛋白,试验采用基因工程技术,将编码鸡抗病毒Mx蛋白基因亚克隆至含有分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-Mx;用电转化法将线性化的pPIC9K-Mx转化至毕赤酵母菌株GS115中,G418梯度筛选转化菌;再经MM与MD平板对比生长试验筛选,PCR鉴定目的片段,筛选出高拷贝重组子,该高拷贝菌株分别经0.5%、1%甲醇诱导,表达产物再经SDS-PAGE检测。结果表明:成功构建了鸡抗病毒Mx蛋白基因的毕赤酵母表达载体,经G418抗性筛选得到高拷贝菌株;在甲醇含量维持在1%时,鸡抗病毒Mx蛋白在毕赤酵母GS115中获得良好表达,表达产物大小约为75ku;表达蛋白约占表达上清液的39.2%。
- 田智泉杨海燕徐琪孙敏许峰任丽伟丁爱军秦玉蓉李碧春
- 关键词：毕赤酵母MX蛋白
- 体外重组神经氨酸酶的表达及其亚细胞定位研究
- 2011年
- 研究神经氨酸酶(NA)基因在体外培养NIH-3T3细胞中的表达定位。实验构建了真核表达载体pcDNA3.0/EGFP-NA与pcDNA3.0-NA,采用聚乙烯亚胺介导基因转染法,分别转染NIH-3T3细胞,转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察,并分别用RT-PCR与间接免疫荧光(IFA)进一步检测。结果表明:成功构建了EGFP-NA融合蛋白的表达载体;RT-PCR检测到EGFP-NA融合蛋白的表达;NIH-3T3细胞EGFP标记观察显示绿色荧光分布在胞质近胞膜,细胞核内无绿色荧光;间接免疫荧光鉴定显示,绿色荧光分布在细胞膜内外,表达的重组NA蛋白定位在细胞膜上。
- 任丽伟丁爱军傅德智李碧春
- 关键词：绿色荧光蛋白重组质粒
- 鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养比较初探被引量：11
- 2010年
- 为比较鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养效果,对鸡Ⅹ期胚盘细胞分别进行分散培养和整胚培养并进行传代,观察细胞生长情况,通过碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定计算阳性克隆率;结果,分散培养的细胞生长状态良好,整胚培养的细胞贴壁能力较差,培养过程中细胞易分化;传代后两种方法培养的细胞AKP阳性克隆率差异显著(P<0.01)。表明鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养效果较为理想。
- 杨海燕孙敏田智泉秦玉蓉任丽伟许峰李碧春
- 禽流感H5N1型神经氨酸酶在细胞中的表达
- 2010年
- 利用表达载体pIRES-NA研究H5N1型神经氨酸酶(neuramidinase,NA)基因在NIH-3T3细胞中表达,为今后转基因家禽的培育提供证据。通过构建重组表达载体转染细胞经G418筛选后,利用PCR方法检测NA基因在细胞基因组中整合,利用RT-PCR和Western Blotting的方法分别在RNA及蛋白质水平上检测NA基因在细胞中表达。结果表明细胞转染经筛选后,提取细胞基因组进行PCR,能扩增出NA基因片段,约1.4kb;同时RT-PCR能检测到NA基因mRNA,Western Blotting能检测到细胞表达约55ku NA蛋白,构建重组载体能整合到NIH-3T3细胞基因组中,NA基因能在细胞中表达。
- 丁爱军任丽伟傅德智李碧春
- 关键词：H5N1神经氨酸酶
- 鸡X期胚盘细胞电转染外源基因条件的探索被引量：4
- 2010年
- 以EGFP为报告基因体外电穿孔转染鸡X期胚盘细胞,探讨适宜电转染条件以及影响鸡ES细胞存活率和转染率因素。分离鸡X期胚盘细胞进行培养、传代及鉴定,二代细胞设定不同的电压、脉冲时间、质粒浓度、细胞密度及孵育温度等条件转染。电击后10 min,0.4%台盼蓝染色,血细胞计数板计数,计算存活率。48 h后在荧光显微镜下计绿色荧光细胞数和总细胞数,计算转染率。结果表明:电转染鸡ES细胞的最优化电压为280 v,脉冲时间为75μs,质粒浓度为20μg/mL,转染前4℃、转染后25℃(室温)或4℃各静置10 min,细胞密度调整在1×105个/mL×106个/mL,尽量使细胞处于对数生长期。电穿孔法转染鸡ES细胞是简便有效的方法,利用优化条件转染ES细胞,可以满足进一步实验的要求。
- 杨海燕孙敏田智泉任丽伟秦玉蓉许峰李碧春
- 关键词：电穿孔PEGFP-N1
- EGFP基因在不同细胞中的转染效率
- 2010年
- 目的旨在比较EGFP基因不同细胞中的转染效率。方法本试验使用阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)介导质粒pEGFP-N1转染AAV-293、NIH-3T3、CEF3种细胞,转染48h后在荧光倒置显微镜下观察,并分析转染效率。结果 3种细胞系都能够观察到绿色荧光。结论 EGFP基因在NIH-3T3细胞中的转染效率最高,其次是AAV-293细胞,而在CEF细胞中转染效率较低。
- 徐贵江张明任丽伟洪菊生李国庆
- 关键词：基因细胞转染效率
- 禽流感病毒神经氨酸酶的研究进展被引量：6
- 2009年
- 神经氨酸酶是禽流感病毒的两种表面糖蛋白之一,是一种由AIV基因组第6节段编码的Ⅱ型糖蛋白。宿主细胞膜上的唾液酸(SA.又名神经氨酸)是流感病毒的主要受体。流感病毒与宿主细胞膜上SA受体结合后,才能进入细胞。而神经氨酸酶可以降解AIV识别的宿主细胞膜上的受体,抑制病毒进入细胞。神经氨酸酶的这一独特功能特点使其成为国内外抗禽流感病毒研究的热点之一,同时也为制备抗禽流感转基因家禽提供了理论依据。本文简要综述了禽流感病毒的背景知识,着重介绍了神经氨酸酶的结构与功能以及目前国内外神经氨酸酶的研究状况,并对其今后的研究和应用进行展望。
- 任丽伟陈强徐贵江李碧春
- 关键词：神经氨酸酶禽流感病毒抑制剂
- 鸡Mx-EGFP融合表达蛋白的细胞亚定位及其抗病毒活性研究被引量：1
- 2010年
- 为探索鸡Mx基因在细胞中表达的位置,以及Mx-EGFP融合表达时的抗病活性。构建了真核表达载体pcDNA3.0/EGFP-Mx,转染NIH-3T3细胞,通过报告基因EGFP的表达来定位Mx基因在细胞中表达的位置;通过抗VSV病毒试验来研究Mx-EGFP融合蛋白的抗病毒活性。结果显示,融合蛋白大部分在细胞质中表达,而细胞核中也有一部分表达;转染有质粒pcDNA3.0/EGFP-Mx的NIH-3T3细胞感染VSV病毒48h内,细胞没有发生病变;而只转染pcDNA3.0空载体的阴性对照组中,NIH-3T3细胞48h内已经发生病变。研究结果表明,Mx-EGFP融合蛋白主要分布在细胞质中,具有抗VSV病毒活性,能够延缓病毒感染病变时间。
- 田智泉倪黎纲吴晓伟任丽伟杨海燕孙敏丁爱军李碧春
- 关键词：MX基因VSV
- 用PCR扩增兔SRY基因的研究被引量：1
- 2010年
- 用家兔外周血提取基因组DNA,根据欧洲家兔SRY基因的cDNA序列中开放性阅读框部分设计引物,采用PCR技术对基因组DNA进行了SRY基因检测。结果显示,SRY基因(+)是雄性决定基因,这对于幼兔的性别鉴定、性别选择及在胚胎时期诊断性连锁疾病有重要意义。
- 徐贵江吴添文任丽伟潘雨来朱满兴吴信生
- 关键词：DNAPCRSRY基因
