雷白时
- 作品数：60 被引量：137H指数：7
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金保定市科技局科学技术研究与发展指导计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 嵌合口蹄疫病毒VP1抗原基因的重组脑心肌炎病毒的构建及鉴定
- 2022年
- 将口蹄疫病毒(FMDV)VP1全长、VP1 B细胞表位(135~160、198~213aa)和T细胞表位(20~40aa)组合为不同长度分别插入脑心肌炎病毒(EMCV),构建嵌合FMDV VP1重组EMCV。通过融合PCR及酶切的方法,将外源片段插入EMCV L蛋白第5、6位aa之间,得到重组质粒pWSK-EMCV-FMDV VP1、pWSK-EMCV-FMDV VP1(TB)和pWSK-EMCV-FMDV VP1(2TB),将其转染至BSR T7/5细胞拯救重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB),并在BHK-21细胞传代分析重组病毒的生物学特性。结果显示,PCR扩增得到1344 bp、909 bp和1155 bp的外源基因融合片段,表明成功构建了3种重组质粒;3株重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1、EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)和EMCV/RvBD_(2)W-VP1(2TB)在BHK-21细胞传至F5代,病毒滴度分别为1×10^(7.85)TCID_(50)/mL、1×10^(8.06)TCID_(50)/mL、1×10^(7.76)TCID_(50)/mL;通过RT-PCR、IFA等方法对F5代重组病毒进行鉴定,显示重组病毒EMCV/RvBD_(2)W-VP1(TB)可以稳定遗传,且病毒复制水平与亲本病毒相一致,而其他2株重组病毒在传代过程中缺失。结果表明,本研究构建了3个重组EMCV质粒,转染细胞后携带FMDV VP1抗原表位的重组病毒稳定遗传,为后续以EMCV为骨架构建活载体疫苗奠定了理论基础。
- 王露露张武超雷白时包银莉王志刚赵款袁万哲
- 关键词：口蹄疫病毒脑心肌炎病毒感染性克隆VP1
- 对有害生物椰心叶甲风险性及对云南省棕榈植物潜在危险性分析被引量：3
- 2007年
- 参照国际上有害生物危险性分析(Pest Risk Analysis,PRA)方法,从定性分析和定量评估2个层面对椰心叶甲的危险性作出综合评价。结果表明,椰心叶甲在我国属于高度危险性的有害生物。进一步分析了椰心叶甲对云南省棕榈植物的潜在危险性,认为,虽然目前云南还未发现椰心叶甲,但已具备了该虫害暴发流行成灾的所有条件。
- 泽桑梓刘宏屏李浩然雷白时
- 关键词：椰心叶甲有害生物危险性棕榈植物
- 重组猪干扰素α的原核表达及抗病毒活性
- 2023年
- 为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性,利用pET-32a载体系统,构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外,MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性,并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的活性,同时测定了重组蛋白作用PK-15细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平;之后通过小鼠攻毒保护试验,测定了rPoIFN-α治疗后各组织器官的病毒载量,ELISA测定了小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的动态变化,并对整个试验期间小鼠出现的临床症状进行打分。结果显示,成功获得了原核表达的特异性重组蛋白rPoIFN-α,在细胞上抗病毒比活性达到1.67×10^(6)IU,对细胞没有损害作用,且显著上调了Mx1、OAS等因子的转录水平;在小鼠体内能明显拮抗EMCV和PRV的增殖,减少促炎因子的产生,延缓临床症状的出现。结果表明,原核表达重组蛋白rPoIFN-α在体内外均具有抗病毒活性,为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础。
- 李秀丽韩颖韩颖张武超梁飞杨欢雷白时袁万哲
- 关键词：大肠杆菌表达细胞毒性抗病毒活性
- 白菜黑斑病拮抗细菌8-59的筛选及鉴定被引量：2
- 2010年
- [目的]筛选对白菜黑斑病病原菌具有拮抗作用的细菌。[方法]从各地的土壤中分离到200多株拮抗细菌,进行初筛、复筛,再对筛选到的菌株进行菌体形态、菌落特征的观察及一系列生理生化试验。[结果]200多株拮抗细菌中菌株8-59有显著的抑菌活性,根据8-59菌株的形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断其为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。[结论]该研究可为细菌拮抗机理研究及后续的生产与田间应用奠定基础。
- 邢祎博王全李术娜李朝玉李红亚雷白时王树香朱宝成
- 关键词：白菜黑斑病拮抗细菌初筛
- 抗羔羊腹泻活性菌的筛选与应用
- 郝庆红刘月琴郭云霞吴国江朱宝成张英杰姜军坡王世英谷子林郭晓军雷白时孙志颖藏金萍魏萌程高峰
- 以羔羊肠道常见腹泻病原菌为指示菌，以产消化酶特性为指标，以产抗菌肽和耐受85℃、pH2~4的酸环境、0.3%胆酸盐为筛选标准对菌株进行筛选得到Y5-39菌株，经鉴定为地衣芽孢杆菌；通过发酵液高速离心与喷雾干燥后处理新工艺...
- 关键词：
- 关键词：羔羊腹泻
- 种子粒度对棉花苗期生长的影响被引量：2
- 2008年
- [目的]进一步探明种子粒度对棉花苗期生长发育的影响。[方法]以转Bt基因棉33B种子为试验材料,设置大粒饱满、大粒不饱满和小粒种子3个不同种子粒度处理,研究各处理对棉花苗期生长发育的影响。[结果]结果表明,3个处理的发芽势以小粒种子较高;大而饱满种子的叶面积和干物重最大,幼苗初期生长和整齐度都优于大而不饱满的种子和小粒种子。各粒度棉苗的株高无明显差异。大而饱满的种子净光合速率与大而不饱满的种子无明显差异,小种子的稍低。主茎叶可溶性蛋白、淀粉和糖含量无明显差异。[结论]作物种子饱满程度对植株的生长有巨大影响。
- 王笑颖雷白时李瑞奇
- 关键词：棉花转BT基因苗期
- 西瓜枯萎病拮抗芽孢杆菌HD-5菌株的筛选与发酵工艺
- 西瓜枯萎病又叫蔓割病,是一种世界性分布的土传病害,是由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的。西瓜枯萎病的田间发病率一般为10%-30%,特别是重茬瓜田的发病率尤为严重,减产20%-50%,甚至绝收,造...
- 雷白时
- 关键词：西瓜枯萎病拮抗细菌解淀粉芽孢杆菌发酵
- 文献传递
- 牛源肠道益生菌的筛选与3株芽孢杆菌益生菌株的鉴定被引量：2
- 2009年
- [目的]从健康牛的粪便中筛选出对大肠杆菌(Escherichia coli)有较强抑制作用的芽孢杆菌,并对其进行鉴定。[方法]以大肠杆菌为指示菌进行初筛和复筛,采用SPSS软件对复筛结果进行显著性分析,以选择抑制大肠杆菌活性较强的菌株,经过形态观察、生理生化试验和16S rDNA全序列分析鉴定其种属;采用稀释活菌计数法测绘这些菌株的生长曲线,利用SPSS软件结合修正的Gompertz方程和Logistic方程对生长曲线进行拟合,以获得这些菌株的生长动力学参数。[结果]经过鉴定,筛选得到的对大肠杆菌有较强抑制作用的3株牛源芽孢杆菌均属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);采用SPSS软件拟合得到的生长曲线的相关系数(R)在0.985以上。[结论]筛选并鉴定了3株牛源肠道益生菌;采用SPSS软件可以较准确地预测这些菌株的生长动力学参数。
- 姜军坡范会兰张冬冬雷白时王世英朱宝成
- 关键词：芽孢杆菌益生菌SPSS
- 中国木薯醇腈酶在汉逊酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- α-醇腈酶(α-hydroxynitrilelyase,HNL)是手性醇腈化合物生物合成十分有用的工具,能够催化羰基化合物和HCN立体选择性的加工形成手性醇腈化合物。应用PCR扩增得到HNL基因,连接到pMD18-T中进行测序,然后通过EcoRⅠ和NotⅠ将其连接到汉逊酵母表达载体pHMOXGαA中。通过在含有4mg/mL的G418的YPD培养基上进行筛选获得阳性重组子,用0.5%的甲醇诱导96h。酶活测定和SDS-PAGE分析显示HNL在汉逊酵母NCYC495(leu1.1)中得到正确表达,每毫升发酵液中获得2.015U的醇腈酶。
- 张冬冬雷白时姜军坡牛振东邱并生朱宝成
- 关键词：汉逊酵母RDNA
- 血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2024年
- 为获得血清11型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 11,FAdV-11)纤突(Fiber)蛋白的多克隆抗体,并研究其对不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应特性,本研究利用同源重组技术将FAdV-11Fiber蛋白的编码基因克隆至原核表达载体pET-32a上,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达后,将纯化的重组蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体,并通过Western blot和IFA鉴定该多克隆抗体与不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应性。结果表明,His-FAdV-11-Fiber重组蛋白主要以包涵体形式表达且表达良好,Western blot和IFA结果均显示,制备的多克隆抗体能与FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白反应,而不能与FAdV-4的2个Fiber(Fiber 1和Fiber 2)蛋白反应。综上所述,本研究成功制备兔抗FAdV-11Fiber的多克隆抗体,并验证其能特异性识别FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白,为进一步建立FAdV-11的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。
- 刘帅峰马一凡王相芹郭笑然刘小娜雷白时袁万哲陈福星陈福星
- 关键词：多克隆抗体
