陈施蓓
- 作品数：14 被引量：15H指数：2
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- 水牛胚胎生殖干细胞饲养层体系的建立被引量：1
- 2012年
- 本试验对水牛胚胎生殖干细胞饲养层体系建立进行了研究。首先比较了组织块法和酶消化法培养水牛胎儿成纤维细胞的差异;其次探讨丝裂霉素处理水牛胎儿成纤维细胞的有效时间;最后以建立的饲养层体系培养水牛胚胎生殖干细胞。结果表明:(1)组织块法培养的细胞状态优于酶消化法,组织块培养法更适于水牛胎儿成纤维细胞的分离培养;(2)第三代的水牛胎儿成纤维细胞核型正常,状态良好,可用于饲养层的制备;(3)通过MTT和Br-du法检测,确定10 mg/L的丝裂霉素C处理水牛胎儿成纤维细胞3.5 h能有效抑制成纤维细胞增殖且细胞形态良好;(4)在本试验条件下制备的饲养层能有效维持水牛胚胎生殖干细胞至8代。
- 汪彩珠杨素芳罗婵陈施蓓石德顺
- 关键词：成纤维细胞丝裂霉素C饲养层
- 利用锌指核酸酶对水牛SSC细胞进行BMP15打靶的初步研究
- 精原干细胞(Spermatogonial stem cell,SSC)具有传递遗传信息和干细胞自我更新、分化的特性,最新报道显示以其作为靶细胞进行定向遗传修饰效率较高。目前将富集的SSC注入不育受体的睾丸,通过自然交配或...
- 冯万有刘庆友陈施蓓罗婵石德顺
- 关键词：水牛BMP15精原干细胞锌指核酸酶
- 水牛生精上皮细胞分离纯化及体外培养的初步研究
- 精原干绌胞是位于睾丸曲细精管生精上皮内的生精干细胞,是一类定向干细胞。因此,分离培养精原干绌胞将有助于人们深入了解精子发生的过程,也为转基因动物的制作提供了一种新的途径。本研究以3～5月龄本地水牛睾丸为材料,采用胶原酶、...
- 陈施蓓刘庆友邓彦飞罗婵李湘平陆风花石德顺
- 关键词：水牛精原干细胞体外培养
- 文献传递
- 水牛类精原干细胞体外分离培养的初步研究
- 为优化水牛类精原干细胞的分离、培养体系，本研究对水牛A型精原细胞分离纯化方法，体外增殖的影响因素及其生物学特性进行了探讨。
(1)对3-7月龄本地水牛生精上皮细胞类型进行了研究。结果发现，该时期的睾丸生精上皮主要存...
- 陈施蓓
- 关键词：水牛分离纯化
- 电转染水牛胎儿成纤维细胞方法的建立
- 电转染法获得转基因动物绌胞是转基因克隆动物研究的重要技术环节。本研究探讨了利用电转染法制备水牛转基因体细胞作为供体,生产转基因克隆胚胎的可行性。采用组织块贴壁法分离培养得到水牛胎儿成纤维细胞,经核型分析表明得到的细胞具有...
- 罗婵陆凤花陈施蓓李楠任艳萍李辉刘庆友石德顺
- 关键词：转基因细胞克隆
- 文献传递
- 利用锌指核酸酶对水牛SSC细胞进行BMP15打靶的初步研究
- 精原干细胞(Spermatogonial stemcell,SSC)具有传递遗传信息和干细胞自我更新、分化的特性,最新报道显示以其作为靶细胞进行定向遗传修饰效率较高。目前将富集的SSC注入不育受体的睾丸,通过自然交配或I...
- 冯万有刘庆友陈施蓓罗婵石德顺
- 关键词：水牛BMP15精原干细胞锌指核酸酶
- 文献传递
- 水牛抑制素α亚基基因RNAi载体构建与检测被引量：7
- 2011年
- 抑制素通过反馈抑制促卵泡素的合成与分泌影响动物的生殖功能,将动物的繁殖力控制在种属特有的水平。为探讨通过抑制素基因沉默提高水牛繁殖力的可行性,本文构建并筛选了水牛抑制素α亚基基因的RNAi载体。根据实验室克隆的水牛INH-α基因序列,设计合成了5对特异性单链siRNA序列,经退火形成双链,连入pSilenc-er4.1-CMV neo载体。重组质粒经酶切及测序正确后转染水牛卵泡颗粒细胞。48h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测不同组转染细胞中INH-α基因的相对表达水平,再选择沉默效率高的载体分别检测转染后24、48、72和96h抑制效率的变化。结果显示,经酶切和测序验证成功构建pSilencer4.1-145、pSilencer4.1-308、pSilencer4.1-769、pSilencer4.1-1013和pSilencer4.1-1053共5个重组RNAi表达载体,其中pSilencer4.1-308、pSi-lencer4.1-769、pSilencer4.1-1013和pSilencer4.1-1053具有抑制效果,抑制效率分别为58.8%、44.9%、67.4%和43.9%。选择pSilencer4.1-1013载体转染颗粒细胞24、48、72和96h后的抑制效率分别为27.1%、61.0%、57.0%、41.2%,转染48h后抑制效率最高。本研究成功构建了有效抑制的水牛INH-α基因表达的RNAi载体,为研制INH-α沉默的转基因水牛新品系奠定了基础。
- 谢琴蒋建荣王丹石德顺谢体三陈施蓓刘庆友
- 关键词：水牛RNAI
- 水牛生精上皮细胞分离纯化及体外培养的初步研究
- 精原干细胞是位于睾丸曲绌精管生精上皮内的生精干细胞,是一类定向干细胞.因此,分离培养精原干细胞将有助于人们深入了解精子发生的过程,也为转基因动物的制作提供了一种新的途径.本研究以3～5月龄本地水牛睾丸为材料,采用胶原酶、...
- 陈施蓓刘庆友邓彦飞罗婵李湘平陆风花石德顺
- 关键词：水牛精原干细胞体外培养
- 水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定被引量：3
- 2012年
- 研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24h后开始零星增殖,3～5d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。
- 高亚可陆凤花马帆乔树叶陈施蓓石德顺
- 关键词：水牛卵巢颗粒细胞原代培养增殖凋亡
- 水牛特异性转录因子诱导水牛成纤维细胞重编程为多能干细胞
- 大动物胚胎干细胞的建系虽然研究多年,但是迄今也没有真正的建系成功。因此,利用新的方法获得大动物干细胞有待进一步探索。诱导多能干细胞(iPSCs)的诞生将干细胞的研究带入了一个新的时代,也可能为大动物干细胞的建系培养提供了...
- 邓彦飞刘庆友陈施蓓罗婵李湘平陆风花石德顺
- 关键词：水牛成纤维细胞转录因子诱导多能干细胞
