邓宛明
- 作品数：12 被引量：24H指数：4
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程轻工技术与工程生物学更多>>
- 重组人干扰素βser17工程菌发酵培养条件的优化研究被引量：3
- 2005年
- 实验对重组人干扰素βser17(rhIFNβser17)工程菌的发酵培养条件进行了研究,通过实验优化确定了适宜rhIFNβser17表达的培养基、诱导剂使用浓度、诱导时期和诱导后的收获时间等,建立了发酵培养工艺,并在50L发酵罐进行了中试发酵,菌体收获量湿重达13.08g/L,rhIFNβser17表达量占菌体总蛋白的20.2%,纯化后比活性达2×107IU/mg蛋白以上,为进一步的下游开发奠定了基础。
- 张振龙刘建源邓宛明郭秀梅郭鹏扬云凯
- 关键词：发酵
- 重组人干扰素-β在大肠杆菌中的表达与活性分析被引量：5
- 2001年
- 利用定点突变技术将人干扰素 β第 17位半胱氨酸编码序列突变为丝氨酸 (IFN βser17) ,DNA序列分析证明了其核苷酸序列的正确性 ,并在大肠杆菌TAP10 6中获得高效表达 ,IFN βser17表达量达 2 0 % ,用Westernblot得到单一条带 ,细胞病变抑制法测定其比活性达 (2～ 3)× 10 7U mg。INF βser17的比活性和稳定性均超过天然人IFN β。
- 张振龙刘建源杨云凯邓宛明黄颖
- 关键词：点突变基因表达大肠杆菌活性分析
- 重组人干扰素-β的中试研究被引量：1
- 2001年
- 从大肠杆菌中大规模纯化新型干扰素 β(IFN βser17)。首先建立IFN βser17发酵和纯化工艺 ,连续大量纯化三批 ,并对纯化终产品进行全面鉴定。建立了稳定的发酵和纯化工艺流程 ,中试三批菌产量平均为 4.33g L ,IFN βser17的表达量平均为 2 0 % ,经破碎、粗提、精制后IFN βser17的比活达 2× 10 7IU mg以上 ,纯度超过 96 % 。
- 刘建源张振龙杨云凯张琰平邓宛明樊晓翔
- 关键词：干扰素Β发酵纯化工程菌中试
- 抗rhTNF-α单克隆抗体F(ab′)_2片段的制备
- 1997年
- 采用胃酶消化抗ｒｈＴＮＦ－αＭｃＡｂ制备了其Ｆ（ａｂ′）２片段。对胃酶消化的时间，酶／抗体的比例及片段回收率等条件做了比较。结果显示，胃酶在ｐＨ４．２于３７℃消化１８ｈ，可制备出完整的Ｆ（ａｂ′）２片段；非还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ发现，有９０％以上的ＩｇＧ被降解为Ｆ（ａｂ′）２片段；Ｓ－２００层析柱纯化Ｆ（ａｂ′）２片段的回收率达４５％；双抗体夹心竞争抑制ＥＬＩＳＡ法测定Ｆ（ａｂ′）２片段的竞争抑制效价为２．６×１０７。中和Ｌ９２９细胞毒活性试验的结果表明，１４８ｎｇ的Ｆ（ａｂ′）２片段可中和１个单位ｒｈＴＮＦ－α的细胞毒作用。
- 汤燕文邓宛明张振龙
- 关键词：单克隆抗体
- pRL-hTNF/JM103工程菌发酵和rhTNFα表达的研究被引量：4
- 1998年
- 为便于下游中试规模生产，采用温度敏感型启动子PRPL构建rhTNFα工程菌，并对影响工程菌发酵培养和表达的因素进行了初步研究。结果显示，采用RTB培养基，50℃热水快速升温，诱导培养4～4．5h，湿菌体收获率和表达量均达到较高水平；50L发酵罐连续发酵3批，14000r／min连续离心，菌体收获率湿重达16．gg／L培养物，rhTNFα表达量占菌体总蛋白的10.5％，活性达1．35×107U／mg蛋白。.
- 张振龙许丽峰张琰平刘德郁邓宛明樊晓翔陈梅娣窦金福宋比天倪道明李昌本
- 关键词：人肿瘤坏死因子发酵工程菌
- 重组人干扰素βSer^(17)的结构及活性分析被引量：1
- 2005年
- 目的分析大肠杆菌表达的重组人干扰素βSer17(rhIFN-Ser17)的分子结构及其生物学活性。方法通过West-ernblot、氨基酸末端测序、质谱及生物学活性分析等,对大肠杆菌表达的rhIFN-Ser17分子进行鉴定。结果大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17的N末端20个氨基酸及C端2个氨基酸序列与文献报道一致,产物的相对分子质量为19877·9,比活性超过2×107IU/mg蛋白。结论大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17分子结构与理论推测值完全一致。
- 杨云凯张振龙刘建源邓宛明崔春青
- 关键词：分子结构生物学活性质谱分析
- 重组人干扰素βSer^(17)的制备及其对SARS病毒的抑制作用被引量：4
- 2005年
- 目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用。方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用。结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用。结论已成功制备rhIFN-βSer17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用。
- 张振龙刘建源杨云凯邓宛明崔春青王淑芳汤燕文赵建英
- 关键词：SARS病毒非典型性肺炎
- 生长速度对β干扰素工程菌稳定性和产物表达的影响研究被引量：2
- 2004年
- 为了研究发酵培养阶段生长速度对重组人干扰素 β(hIFN β)工程菌稳定性、菌体密度和干扰素表达的影响 ,采用日本LE .MarubishiMSJ 5 0L发酵罐 ,在发酵过程中于诱导后通过控制不同的补料速度 ,检测低和高生长速度及发酵结束后菌体密度、稳定性和重组人干扰素 β的表达量。诱导后维持低生长速度 ,发酵结束后平均密度A60 0 值为7.5 2 ,表达量达 2 0 .7% ,质粒稳定率好 ,达到 91% ,粗制干扰素收获 2 .37克 ;维持高生长速度 ,发酵结束后平均密度A60 0 值达 2 0 .5 7,而表达量降为 4 .13% ,质粒稳定率降为 2 7% ,粗制干扰素收获仅为 0 .5 9克。
- 张振龙黄颖郭秀梅郭鹏邓宛明王淑芳刘建源
- 关键词：干扰素Β稳定性
- 血小板生成素功能区段的构建、表达和生物学活性评价
- 1999年
- 以全长人ＴＰＯｃＤＮＡ为模板，采用ＰＣＲ方法扩增出ＴＰＯ功能区段基因，克隆入ＰＵＣ１８中，经筛选鉴定后，插入原核表达载体中进行表达，结果ｒｈＴＰＯ功能区片段在原核细胞中获得高效表达，表达量约占菌体总蛋白的４１５％，表达产物经初步纯化后测活，具有明显促进体外培养巨核细胞集落形成的作用。
- 张振龙邓宛明汤燕文
- 关键词：血小板生成素功能区基因表达
- 注射用重组人干扰素βser17的分离纯化及鉴定被引量：1
- 2005年
- 重组人干扰素βser17(rhIFN βser17)工程菌经发酵培养后,采用高压匀浆破菌、离心分离包涵体、有机抽提、酸沉淀、SephacrylS -200、SephadexG -75等进行分离纯化,通过各种方法对终产品进行鉴定。结果显示,纯化的rhIFN- βser17比活性超过 2×107IU/mg,纯度超过 99%,其它各项质量指标均符合质量标准。通过研究建立了大规模制备rhIFN- βser17的纯化工艺,研制出了符合规程要求的注射用rhIFN -βser17纯品,为临床研究奠定了基础。
- 张振龙刘建源杨云凯崔春青邓宛明汤燕文赵建英郭秀梅郭鹏
- 关键词：纯化
