王东方
- 作品数：139 被引量：222H指数：8
- 供职机构：河南省动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省高等学校创新人才培养工程国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒检测试剂盒
- 本发明提供猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒检测试剂盒。本发明提供的用于猪δ冠状病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒二重实时荧光定量PCR检测的引物和探针(SEQ ID NO:1‑6)，以及基于所述引物和探针建立的二重实时荧...
- 闫若潜班付国谢彩华王东方刘影马震原郭育培杨海波王淑娟王华俊柴茂刘梅芬赵雪丽刘敏赵美雪
- 猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应被引量：9
- 2014年
- 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Th)和细胞毒性T细胞(Tc)亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性ELISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3.1/ORF2质粒;在rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒或rpcDNA3.1/ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒为下一步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。
- 闫若潜王东方吴志明李桂喜刘淑敏刘梅芬赵明军王淑娟赵雪丽
- 关键词：猪圆环病毒2型猪白细胞介素2
- 复合RT-PCR检测猪乙脑病毒和猪流感病毒方法的建立被引量：10
- 2008年
- 根据GenBank上已发表的猪乙脑病毒(JEV)的E基因序列和猪流感病毒(SIV)的NP基因序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了JEV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了JEV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,利用一次RT-PCR反应,即可同时扩增JEV的349 bp和SIV 155 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)核酸扩增结果为阴性,对JEV和SIV的最低检出量分别为100和10 pg的cDNA.该方法适合对JEV和SIV的联合检测和鉴别诊断.
- 吕晓丽崔保安陈红英魏战勇王东方郭小参
- 关键词：复合RT-PCR猪流感病毒
- 猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立
- 建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法.根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV) DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧...
- 王东方拜廷阳吴志明闫若潜赵明军李文山赵雪丽王淑娟刘梅
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 塞内卡病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：9
- 2019年
- 为建立塞内卡病毒(SVA)荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)检测方法,本研究根据GenBank中SVA 3D基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以SVA cDNA为模板,经优化反应条件,建立了SVA FQ-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对28份临床疑似SVA感染样品进行了检测,并与本实验室建立的SVA RT-PCR方法检测结果及测序结果比较分析。结果显示,该方法仅对SVA出现阳性扩增信号,对BHK-21正常细胞对照和口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒等5种病原均未出现扩增,特异性较强;该方法最低检测限为10.4拷贝/μL质粒标准品,比常规RT-PCR敏感性高10倍,敏感性较高;该方法批内及批间变异系数均小于4%,重复性好。利用该方法对28份疑似SVA感染样品检测显示,检出9份阳性样品,与测序结果一致,而常规RT-PCR仅检出6份阳性样品,其敏感性高于常规RT-PCR方法,两种方法的符合率为89.3%。本研究为SVA的早期检测提供了特异、敏感、快速的方法。
- 王淑娟王东方赵月龙谢彩华赵雪丽马震原王华俊杨朋霞闫若潜
- 关键词：荧光定量RT-PCR
- 重组猪α干扰素-白细胞介素-2复合蛋白在猪体内抗高致病性PRRSV活性的研究被引量：5
- 2013年
- 为了评价猪α干扰素-白细胞介素-2重组复合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)在猪体内抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP PRRSV)的效果,采用重组猪α干扰素(rPoIFN-α)-重组猪白细胞介素-2(rPoIL-2)等量混合物、单一rPoIFN-α蛋白、单一rPoIL-2蛋白、rPoIFN-α-linker-PoIL-2复合蛋白等以注射方式进行HP PRRSV的攻毒保护试验,通过分析试验猪体温变化、HP PRRS典型症状维持时间、死亡率、月增重率、病毒血症维持时间等指标,采用RT-PCR和间接ELISA检测攻毒后带毒及抗体产生情况,以评价这些制剂对攻毒猪的保护效果。结果显示,rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白、rPoIFN-α-rPoIL-2蛋白等量混合物、rPoIFN-α蛋白均可有效抑制HP PRRSV在猪体内的增殖和持续性感染,明显降低发病猪体温,缩短HP PRRS典型症状维持时间,减缓发病症状,降低死亡率;rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白对HP PRRSV的抑制作用优于单一rPoIFN-α蛋白,稍优于rPoIFN-α-rPoIL-2蛋白等量混合物,显著优于单一rPoIL-2蛋白。上述结果为进一步选取以rPoIFN-α-linker-PoIL-2复合蛋白为主要成分的猪基因工程复合抗病毒制剂研究奠定了基础。
- 刘淑敏闫若潜吴志明李桂喜王东方刘梅芬安春霞赵明军
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗病毒活性
- 高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用
- 当前对HP-PRRS缺乏有效的病原学检测和诊断方法，因此，建立HP-PRRS和LP-PRRS的病原学鉴别诊断方法对于PRRS的快速确诊具有重要意义。对25份临床疑似PRRSV感染猪样品检测结果表明:PRRSV阳性率为75...
- 吴志明闫若潜安春霞赵明军王东方谢彩华刘梅芬
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病原学
- 文献传递
- 猪圆环病毒PCR诊断方法建立及标准制订
- 猪2型圆环病毒/(Porcine circovirus 2, PCV2/)与近年来世界各国普遍发生的断奶仔猪多系统衰竭综合征/(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PM...
- 王东方
- 关键词：猪圆环病毒猪伪狂犬病毒猪细小病毒PCR复合PCR
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用
- 以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV2间接ELISA诊断方法;对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;...
- 张志凌闫若潜吴志明谢彩华王东方王英华贾松涛
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白间接ELISA试剂盒
- 文献传递
- 鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究被引量：1
- 2024年
- 建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。
- 赵雪丽闫若潜王华俊王淑娟马震原谢彩华柴茂杨海波王翠刘影王东方
- 关键词：猪圆环病毒2型
