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李向茸: 作品数：67 被引量：90H指数：4; 供职机构：西北民族大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金长江学者和创新团队发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学金属学及工艺更多>>

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白细胞介素-7基因慢病毒表达载体的构建及在CHO-K1细胞中的稳定表达被引量：2: 2017年; 目的构建白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)基因慢病毒表达载体,并在CHO-K1细胞中稳定表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。方法参照Gen Bank中公布的人IL-7基因核苷酸序列(J04156.1),人工合成该条基因,亚克隆至表达载体pLV-CMV-EF1-GP上,构建重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7,在HEK293T细胞中进行病毒包装,检测病毒滴度后,收获细胞毒液,感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达IL-7的CHO-K1-r IL-7细胞。荧光显微镜观察感染细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法检测IL-7基因m RNA的转录;ELISA法检测IL-7的含量;Western blot法检测IL-7的表达。结果重组慢病毒表达质粒pLV-CMV-EF1-GP-r IL-7经双酶切及测序结果证明构建正确。慢病毒的滴度为3×10~8 TU/ml。慢病毒感染CHO-K1细胞24、48和72 h后,均可见特异性绿色荧光蛋白表达,且随着培养时间的延长,荧光强度明显增强;CHO-K1-r IL-7细胞可扩增出约540 bp的IL-7基因片段;经ELISA检测,样品中IL-7含量为0.6 ng/ml;表达产物主要存在于CHO-K1-r IL-7细胞上清中,且具有良好的反应原性。结论成功构建了IL-7基因慢病毒重组表达质粒,并实现了IL-7在CHO-K1细胞上的稳定表达。; 李向茸令瑛徐雷包晓婧马玉梅车敏娜张海霞冯若飞; 关键词：白细胞介素-7 慢病毒 CHO-K1细胞

人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重组与表达: 2018年; 为了实现人源化胰岛素样生长因子Ⅰ(human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因在大肠杆菌中的高效表达,了解IGF-Ⅰ基因结构与功能的关系,探索人工制备的hIGF-Ⅰ在临床治疗疾病上的应用,实验参照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并进行密码子优化,然后人工合成这条基因并将克隆至pUC57载体上.构建重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,转化大肠杆菌BL21菌株,进行不同诱导条件的优化,SDS-PAGE电泳确定最佳诱导条件,并利用建立hIGF-Ⅰ的间接ELISA检测方法分析表达产物活性.结果表明,获得重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大肠杆菌中实现与GST蛋白的融合可溶性表达.最佳诱导条件OD600值为0.8、IPTG浓度为0.5 mmol/L,表达蛋白的浓度为2.811 mg/mL,且产物具有抗原活性.说明人工制备的hIGF-Ⅰ与天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基础研究和药物开发方面可作为替代物进行研究.; 李向茸王兴陇李倩邓盈盈邓盈盈周飚冯若飞; 关键词：重组质粒克隆 ELISA检测

鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4: 2018年; 为建立一种鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为鼠源VCAM-1基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中登录的鼠源VCAM-1基因序列,设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测鼠源VCAM-1基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数r2为0.998;灵敏性、重复性及特异性均较高。可用于鼠源细胞中VCAM-1基因的定性鉴别和含量测定。结果表明,成功建立了一种快速准确检测鼠源VCAM-1基因的TaqMan实时荧光定量PCR法。; 王兴陇包晓婧张海霞李向茸李向茸; 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量PCR

脑心肌炎病毒抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：3: 2012年; 目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)抗体双抗原夹心ELISA检测方法,用于EMCV血清学调查及临床检测。方法采用EMCV基因重组蛋白VP1、VP2和2C作为包被抗原,HRP标记EMCV作为酶标抗原,建立EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法;用内部参考血清对建立的方法进行评价,并与间接ELISA法进行比较;采用所建立的方法对1 475份人血清和1 309份猪血清进行检测。结果建立的双抗原夹心ELISA法的最佳抗原包被浓度为7.5μg/ml,封闭液为10%马血清或2%鱼蛋白胨,酶标抗原稀释度为1∶400。该方法的批内和批间变异系数均小于10%;热稳定性较好;与间接ELISA法检测结果的符合率为93.5%。应用建立的方法检测人血清和猪血清中的EMCV抗体阳性率分别为16.8%和63.4%。结论已建立了EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法,该方法可靠、稳定、特异、敏感、操作简便,为EMCV抗体的临床检测提供了有效的技术手段。; 樊得英冯若飞李向茸张海霞凡静静沈心亮马忠仁; 关键词：脑心肌炎病毒抗体酶联免疫吸附测定

重组小鼠碱性成纤维细胞生长因子在CHO-K1-SFS细胞中的表达: 2015年; 目的构建小鼠碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF,亦称FGF-2)的真核表达质粒,并于无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中进行表达。方法以小鼠垂体组织总RNA为模板,PCR扩增b FGF基因,并克隆至真核表达载体p EGFP-C1,构建重组表达质粒p EGFP-C1-b FGF,经Lipofectamine 2000介导转染无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞,荧光显微镜观察CHO-K1-SFS细胞中EGFP的表达情况,普通光学显微镜观察CHO-K1-SFS细胞的生长状况和细胞形态,RT-PCR法检测CHO-K1-SFS细胞中b FGF基因的转录,Western blot法检测CHOK1-SFS细胞中b FGF蛋白的表达。结果重组表达质粒p EGFP-C1-b FGF经双酶切(BglⅡ/SalⅠ)鉴定证明构建正确;重组质粒p EGFP-C1-b FGF转染后24、48、72及96 h的CHO-K1-SFS细胞均可见特异性绿色荧光蛋白表达,重组质粒p EGFP-C1-b FGF转染对CHO-K1-SFS细胞形态和增殖速率不产生影响;p EGFP-C1-b FGF转染组CHO-K1-SFS细胞可扩增出510 bp的目的条带;p EGFP-C1-b FGF转染组可见相对分子质量约44 000的特异性条带,表达产物可与兔抗b FGF多克隆抗体发生特异性结合。结论构建的真核表达质粒p EGFP-C1-b FGF在无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中成功的表达,为进一步实现小鼠b FGF在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定了基础。; 李向茸冯若飞包晓婧张海霞谢晶莹徐雷马忠仁; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子真核细胞基因表达

LGP2参与抗病毒天然免疫应答的研究进展被引量：3: 2019年; RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是天然免疫系统中一类重要模式识别受体,在细胞天然免疫应答中发挥重要的作用,LGP2是RLRs家族成员之一,对RLRs信号转导有正向和负向调控的双重作用。LGP2依据感染病毒种类的不同发挥着不同的调控作用,但详细作用机制不明确。随着研究的深入,LGP2在天然免疫应答中的作用愈发重要。本文就近年来对LGP2参与RLRs介导的抗病毒天然免疫应答的调控及在不同病毒感染宿主中所起的作用作一综述,以期为LGP2深入研究提供参考。; 李倩李向茸冯若飞

脑心肌炎多抗原表位重组蛋白及其在制备脑心肌炎疫苗中的应用: 本发明属于疫苗技术领域，涉及脑心肌炎多抗原表位重组蛋白，所述脑心肌炎多抗原表位重组蛋白包括8个B细胞抗原表位和1个信号肽。本发明还提供该重组蛋白在制备脑心肌炎疫苗中的应用。本发明以开发安全有效的疫苗为目标，筛选出EMCV...; 冯若飞李向茸李洪珊莫荣纤杨妍梅岳佳宇

脑心肌炎病毒VP2基因真核表达质粒的构建: 2019年; 目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。; 张海霞王兴陇王丹李倩韩玉梅韩玉梅梁浩勤邓盈盈邓盈盈李向茸李琼毅; 关键词：脑心肌炎病毒 VP2基因基因重组真核表达 CHO细胞

脑心肌炎病毒的体外细胞增殖培养及其冻干保存试验被引量：3: 2012年; 为了解脑心肌炎病毒在Vero细胞不同培养方式下的增殖效果和用不同冻干保护剂的冻干效果,分别采用方瓶、转瓶来培养Vero细胞并接种脑心肌炎病毒,测定收获病毒毒液的效价,比较病毒的增殖效果;配制了10组冻干保护剂,分别与病毒混合后真空冻干,通过测定冻干前后的病毒效价,以期筛选最佳的保护剂配方。结果显示,脑心肌炎病毒在Vero细胞转瓶培养中增殖效果较好,第Ⅷ组保护剂对脑心肌炎病毒的冻干保护效果最好,冻干后效价下降低于1.5(lg)TCID50/mL。表明Vero细胞转瓶培养方式可用于脑心肌炎病毒的体外大规模培养;含有50g/L蔗糖、2.2g/L牛血清白蛋白、5.0g/L明胶和6.0g/L谷氨酰胺的保护剂对脑心肌炎病毒冻干具有较好的保护作用。; 张海霞冯若飞王丹凡静静李向茸杨妍梅马忠仁冯玉萍; 关键词：脑心肌炎病毒增殖培养效价冻干保护剂

乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达: 2012年; 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV，旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况，为进一步深入研究提供基础资料。方法通过liT—PCR扩增目的基因，酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGrP—C1-JEV重组表达载体，利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞，观察绿色荧光标记蛋白表达情况，同时提取细胞RNA，检查目的基因转录表达情况，并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGrP—C1-JEV构建成功，转染至BHK-21细胞中，绿色荧光标记蛋白正常表达，表达率较高，RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达，表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中，且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达，且对细胞生长和形态不产生影响，真核表达抗原具有良好的抗原性，本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料。; 冯若飞张晓媛林贵鸿乔自林凡静静李向茸张海霞樊得英马忠仁; 关键词：乙型脑炎病毒绿色荧光蛋白真核表达

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