张伟伟
- 作品数：16 被引量：19H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 利用CRISPR/Cas9技术制备敲除Myostatin基因牛胎儿成纤维细胞株
- 2015年
- CRISPR/Cas9系统作为第3代人工核酸内切酶,是一种具有广阔应用前景的基因定点修饰工具。肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节肌肉的生长,影响动物的产肉量。为了获得MSTN基因敲除的细胞株,给转基因动物的制备提供材料,试验利用CRISPR/Cas9系统的不同类型的表达载体对牛MSTN基因外显子序列随机设计靶位点,利用T7核酸内切酶I(T7EI)从中挑选出敲除效率最高的靶位点的表达载体,在无筛选标记条件下对牛胎儿成纤维细胞进行基因敲除。结果表明:经过长时间培养获得了基因敲除的细胞株。说明CRISPR/Cas9技术用于基因敲除方面的研究应用前景广阔。
- 杨宇张伟伟胡倩佟慧丽严云勤
- 关键词：细胞株
- miR-103在牛骨骼肌卫星细胞中的分化调节作用被引量：3
- 2015年
- 为了阐明miR-103对牛骨骼肌卫星细胞的分化调节作用,试验将miR-103的过表达载体和miR-103抑制剂分别转染到分离培养的卫星细胞中,利用EDU功能检测试验、Real-time PCR和免疫荧光试验来分析miR-103对卫星细胞增殖和分化的调控作用,并用Western-blot和实时定量PCR检测miR-103对靶基因CCNE1的蛋白和mRNA水平表达情况的影响。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,miR-103能促进卫星细胞的分化并抑制细胞的增殖。说明miR-103是牛骨骼肌卫星细胞分化的一种重要的调控因子。
- 孙晓峰张伟伟王阳佟慧丽严云勤
- 关键词：骨骼肌卫星细胞细胞分化
- 不同肌肉特异性启动子IGF2表达载体构建及对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响被引量：4
- 2015年
- 旨在获得带有高效特异性启动子的IGF2表达载体,研究其对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响。本研究将构建的3种含有IGF2肌肉特异性启动子的真核表达载体转染牛骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,RT-PCR检测IGF2的相对表达量,从而筛选高效特异性的载体,并进行EdU试验及细胞周期相关基因RT-PCR检测。结果,成功构建了不同启动子desminpro、CMV-MyoGpro和MyoGpro-double表达IGF2的载体。RT-PCR检测结果表明,pGL3-desminpro-IGF2是较高效的并具有特异性的载体。载体转染体外培养细胞提高了细胞增殖速度,并上调了细胞周期相关基因CDK6和IGF2的表达。这为转基因肉牛的生产奠定了重要基础。
- 孙晓丽李树峰佟慧丽张伟伟殷红艳严云勤
- 关键词：IGF2骨骼肌卫星细胞细胞增殖
- 一个牛α-actin基因的启动子及其应用
- 一个牛α-actin基因的启动子及其应用，属于遗传工程技术领域，其特征在于牛α-actin基因262bp启动子片段内部一段含有3个SRE正调控元件的170bp的核酸序列，将其使用不同引物进行PCR扩增，得到2个170bp...
- 严云勤佟慧丽李树峰胡倩赵丹丹李光鹏张伟伟
- 文献传递
- 牛骨骼肌α-actin基因5′上游调控元件及内含子功能的初步分析被引量：2
- 2015年
- 采用PCR定点突变分析法确定牛骨骼肌α-actin启动子-361^-462bp区域的调控元件Sp1/KLFs、ZF5F和Pax3结合位点的功能;利用基因重组技术,将内含子Ⅰ和内含子Ⅱ分别连在启动子缺失片段的上游和下游,构建双荧光素酶表达载体,使其转染牛骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,进行活性检测。结果显示,Sp1/KLFs降低牛骨骼肌α-actin基因启动子活性,ZF5F和Pax3均能增强启动子活性。内含子在启动子上游增强了启动子活性,在其下游降低了启动子活性,且顺式调控元件和内含子均具有肌肉特异性。结果表明,初步确定了参与牛骨骼肌α-actin基因转录调控的负顺式调控元件Sp1/KLFs,正顺式调控元件ZF5F和Pax3,发现了内含子插入启动子的位置很重要,为以后构建牛骨骼肌α-actin高活性的启动子奠定了基础。
- 胡倩曹允考佟慧丽张伟伟赵丹丹王彬高朋严云勤
- 关键词：启动子活性调控元件内含子
- 具有显著促进牛前脂肪细胞增殖生物功能的miRNA-2400
- 具有显著促进牛前脂肪细胞增殖生物功能的miRNA-2400，属于细胞生物学技术领域，通过对牛前脂肪细胞进行体外分离培养，采用免疫荧光染色法鉴定牛脂肪前体细胞，采用茎环荧光定量RT-PCR检测miRNA-2400的表达量，...
- 严云勤佟慧丽李树峰魏瑶张伟伟
- 文献传递
- miR-2400显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖的生物功能
- miR-2400显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖的生物功能，属于细胞生物学技术领域，其特征在于：通过对牛骨骼肌卫星细胞进行体外分离培养，采用含2％马血清的分化培养基诱导牛骨骼肌卫星细胞分化，在诱导分化3天后，荧光显微镜下观察...
- 严云勤张伟伟佟慧丽李树峰
- miR-2400和EGR1对牛骨骼肌卫星细胞分化过程中MyoG基因表达调控
- 肌肉的生长主要依赖骨骼肌卫星细胞的增殖分化，使肌纤维长度增加，周径增粗。肌细胞生成素(Myogenin，MyoG)是生肌调节因子(myogenic regulatory factors，MRFs)家族的成员之一，是骨骼肌...
- 张伟伟
- 关键词：骨骼肌卫星细胞MYOG基因
- MyoG转基因小鼠模型制作、鉴定及组织学分析
- 2014年
- 为了研究MyoG基因对小鼠肌肉形成的影响,研究构建了MogG转基因小鼠并采用荧光定量RT-PCR方法检测转基因小鼠中外源基因拷贝数;H.E.染色后统计了转MyoG基因小鼠肌纤维数目以及直径。结果表明:转MyoG基因小鼠比目鱼肌的肌纤维直径相对于对照组明显增大(P<0.05)。说明MyoG基因对慢肌纤维数目无影响而对直径有影响。
- 王阳孙晓峰李树峰张伟伟王彬佟慧丽严云勤
- 关键词：转基因小鼠MYOG拷贝数肌纤维骨骼肌
- mir-133b对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响被引量：4
- 2014年
- 为了探讨mir-133b对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响,试验将分离培养的牛骨骼肌卫星细胞接种在6孔板中,待细胞汇合度为70%时,用Lipofectamine 2000转染mir-133b的过表达载体进入牛骨骼肌卫星细胞,48 h后实时定量检测RNA表达水平,并用EDU试剂盒检测细胞增殖状况,实时定量PCR检测mir-133b的靶基因sp1的RNA表达情况。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,作EDU增殖过表达mir-133b以后细胞增殖数量显著增多。说明mir-133b对牛骨骼肌卫星细胞增殖具有促进作用。
- 王亚辉王阳严云勤张伟伟魏瑶
- 关键词：SP1EDU靶基因
