张亚前
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 类HRG的七鳃鳗Lj-RGD3全RGD缺失突变体Lj-112在抗肿瘤药物中的应用
- “类HRG的七鳃鳗Lj-RGD3全RGD缺失突变体Lj-112在抗肿瘤药物中的应用”属于生物技术领域，涉及到日本七鳃鳗口腔腺中RGD模体蛋白Lj-RGD3的三个RGD(Arg-Gly-Asp)模体缺失突变基因的人工合成、...
- 李庆伟王继红吕莉张亚前于凤
- 文献传递
- 重组日本七鳃鳗rLj-RGD3与其五种突变体蛋白抗血管新生活性的比较
- Lj—RGD3为来自于七鳃鳗口腔腺的含有三个RGD模体的毒素蛋白，其除具有RGD模体这一典型RGD毒素蛋白特征外，还与富含组氨酸糖蛋白HRG具有序列同源性。由于RGD毒素蛋白及HRG都具有抑制血管新生的活性，但作用靶点不...
- 张亚前
- 关键词：七鳃鳗RGD模体去整合素血管新生
- 文献传递
- 日本七鳃鳗Lj-RGD3缺失突变体Lj-113人工合成序列的基因克隆与蛋白表达被引量：3
- 2011年
- 目的获得突变体Lj-113的基因重组蛋白,为其与野生型活性比较打下物质基础。方法对日本七鳃鳗RGD缺失突变体Lj-113进行基因全序列人工合成,并以NdeI与HindIII为酶切位点构建于pET23b载体上,获得阳性基因重组质粒pET23b-Lj113。CaC l2法将重组质粒转化入大肠杆菌BL21表达菌中,对其进行终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达,并对表达蛋白进行组氨酸亲和层析纯化蛋白。结果成功获得七鳃鳗RGD缺失突变体的基因重组蛋白的可溶性表达。结论人工合成基因序列可通过分子克隆方法获得其蛋白的表达。
- 张亚前李庆伟吕莉刘欣王继红
- 关键词：七鳃鳗缺失突变体基因克隆蛋白表达
- 类HRG的七鳃鳗Lj-RGD3全RGD缺失突变体Lj-112在抗肿瘤药物中的应用
- 类HRG的七鳃鳗Lj-RGD3全RGD缺失突变体Lj-112在抗肿瘤药物中的应用属于生物技术领域，涉及到日本七鳃鳗口腔腺中RGD模体蛋白Lj-RGD3的三个RGD(Arg-Gly-Asp)模体缺失突变基因的人工合成、突变...
- 李庆伟王继红吕莉张亚前于凤
- 日本七鳃鳗Arg-Gly-Asp毒素蛋白Lj-RGD3野生型与RGD全缺失突变体Lj-112的抗血管新生作用被引量：7
- 2011年
- 七鳃鳗Arg-Gly-Asp(RGD)毒素肽Lj-RGD3与富含组氨酸糖蛋白HRG具有序列同源性,而RGD毒素蛋白及HRG都具有抑制血管新生的活性,但作用靶点不同。为研究Lj-RGD3结构与功能的关系,对野生型Lj-RGD3及其RGD全缺失突变体Lj-112进行了抗血管新生功能研究。将3个RGD模体的全缺失突变体基因Lj-112全序列合成后构建于pET-23b载体,对野生型Lj-RGD3及突变体Lj-112蛋白进行IPTG诱导表达,重组蛋白经组氨酸亲和层析纯化;采用MTT法测定野生型和突变体蛋白对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖的抑制作用;采用Transwell细胞培养板及人工基质膜Matrigel模仿体内环境研究rLj-RGD3与rLj-112对ECV304细胞迁移及浸润的抑制作用;运用鸡绒毛尿囊膜(CAM)模型检测rLj-RGD3与rLj-112对血管新生的抑制作用;ELISA法检测两种蛋白对整合素连接激酶ILK-1表达的影响。经组氨酸亲和层析获得了分子量约为15 kDa的rLj-RGD3及rLj-112纯化蛋白。MTT实验表明,rLj-RGD3与rLj-112均以剂量依赖方式抑制bFGF诱导的ECV304细胞增殖,rLj-RGD3的IC50为0.889μmol/L,rLj-112的IC50为0.160μmol/L。迁移及浸润结果表明,Lj-RGD3与Lj-112均能抑制ECV304细胞的迁移,抑制率分别为50%和63%;而以bFGF为趋化剂的ECV304细胞穿透Matrigel的浸润行为均明显受到抑制,且Lj-112的抑制功能强于Lj-RGD3。CAM血管新生实验结果表明,rLj-RGD3与rLj-112均能抑制CAM的血管新生,且同等剂量条件下rLj-112的作用强于rLj-RGD3。ILK-1的ELISA实验结果表明,rLj-RGD3与rLj-112均能下调ECV304细胞ILK-1的表达。野生型rLj-RGD3与其RGD全缺失突变体蛋白rLj-112均具有抑制血管新生功能,且突变体Lj-112的活性高于野生型Lj-RGD3,这说明Lj-112为HRG功能蛋白,而野生型Lj-RGD毒素蛋白与HRG序列的同源性并未使白其抗血管新生功能得到协同加强,二者的抗血管新生功能涉及了不同的信号通路。
- 王继红张亚前吕莉刘欣李庆伟
- 关键词：突变体血管新生
