叶凯
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：武汉大学药学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 庚型肝炎病毒E2区cDNA在毕赤酵母中的表达及抗原性鉴定被引量：4
- 2002年
- 利用PCR技术 ,从含有庚型肝炎病毒 (GBV C HGV)包膜蛋白E2cDNA(5 5 9bp)的质粒pGEX E2中 ,扩增得到能够编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶 (GST)和GBV C HGV包膜蛋白E2的融合基因片段。将此长度为 132 4bp的DNA片段插入到酵母表达载体pPIC9K中 ,使之位于α 因子信号肽下游 ,且与之同框。通过电激转化将构建的重组表达质粒pPIC9K GST E2插入到PichiapastorisGS115菌株染色体中。筛选His+Muts 表型的转化子 ,震荡培养 ,用0 5 %甲醇诱导表达 5d后 ,在培养液中得到表达的GST E2融合蛋白。经过表达条件的优化 ,GST E2蛋白可占培养液中总蛋白的 5 0 %。通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化 ,GST E2融合蛋白的纯度可达 95 %左右。以庚型肝炎病人血清为探针 ,进行免疫印迹及ELISA实验 。
- 王卓华叶凯徐洪马辉文童立恒彭习亮
- 关键词：庚型肝炎病毒抗原性
- 含庚型肝炎病毒E2基因片段质粒DNA能诱发相当强烈的体液免疫应答(英文)
- 2004年
- 研究了庚型肝炎病毒E2 (HGVE2 )基因片段作为DNA疫苗的可行性。将来自于质粒pThioHis E2编码HGVE2的基因片段 (5 5 9bp)亚克隆到质粒pCMV S中 ,使之和HBsAg基因位于同一阅读框 ,形成重组质粒pCMV S E2。用纯化的质粒pCMV S E2DNA注射到昆明小鼠后腿四头肌中来免疫小鼠 ,同时用pCMV S作为对照。间隔 14天再加强一次免疫。在加强免疫后的第 8天眼眶取血。用E2 GST融合蛋白作为固定化抗原 ,通过ELISA检测受试小鼠的体液免疫应答。结果表明 ,用质粒pCMV S
- Fethia Ben YebdriAbderrahmane AAZAZ叶凯马辉文童立恒
- 关键词：DNA疫苗庚型肝炎病毒E2基因片段质粒DNA体液免疫
- 人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体活性部位基因在毕赤酵母中的表达被引量：4
- 2003年
- 探讨了人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体 (TRAIL)生物活性部分在巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)中的分泌表达。由于TRAIL活性部位区第 149 15 0氨基酸含有一个Kex2位点 ,根据Pichiapastoris分泌表达的特点 ,对 149位氨基酸进行了改造 ,使其编码的氨基酸由Arg突变为Lys。这样使TRAIL在分泌的过程中不被Kex2切割 ,保证了片段的完整。序列分析正确后 ,将编码TRAIL的可溶区的基因片段插入到酵母表达载体pPIC9K中 ,使之位于α 因子信号肽下游 ,且与之同框 ,构建分泌型表达载体pPIC9K TRAIL。采用原生质体法将重组质粒转化Pichiapastoris菌株GS115 ,获基因工程菌株Pichiapastoris(pPIC9K TRAIL)。将工程菌用甲醇诱导培养 3～ 4d ,对摇瓶发酵的培养上清进行SDS PAGE、Westernblot分析和体外生物活性检测 ,结果发现发酵液中分子量约为 19kD和 38kD的蛋白质能被TRAIL多克隆抗体特异性识别 ,且具有在体外诱导肿瘤细胞凋亡的活性。通过薄层扫描分析显示目的蛋白最高可占可溶性总蛋白的 36 %。上述实验结果表明 ,在Pichiapastoris中表达的TRAIL能以寡聚体的形式存在并且具有生物学活性。
- 徐红赖心田叶凯马辉文洪葵
- 关键词：巴斯德毕赤酵母
- 含恶性疟原虫Pf70基因片段表达载体DNA的免疫学特性
- 2003年
- 目的 研究恶性疟原虫Pf70DNA片段作为DNA疫苗候选抗原基因的可能性。方法 应用PCR方法从含有恶性疟原虫Pf70基因DNA片段的质粒pGEX Pf70中扩增出包含Pf70DNA片段的长度为 95 7bp的PCR产物。将其插入带有乙肝表面抗原基因的真核表达载体pCMV S中 ,构建出重组质粒pCMV S Pf70。用提纯的重组质粒pCMV S Pf70作为DNA免疫制剂 ,以质粒pCMV SDNA和经过谷胱甘肽亲和层析法纯化的融合蛋白GST Pf70作为对照 ,免疫昆明种小白鼠。每隔 14d加强免疫1次 ,加强免疫 2次后第 7天采小鼠全血 ,用流式细胞仪检测CD8+ T淋巴细胞和CD4 + T淋巴细胞的水平 ,以检测体液免疫和细胞免疫状况。结果 接种了重组质粒pCMV S Pf70小鼠CD8+ T淋巴细胞的绝对量增加 ,其百分比含量增加了 39% ;CD4 + T淋巴细胞的相对含量保持恒定 ,绝对量稍有增加。用ELISA法分别检测经重组质粒pCMV S Pf70免疫的小鼠和经融合蛋白GST Pf70免疫的小鼠血清中抗Pf70蛋白质的抗体滴度 ,发现前者抗体滴度约为 1∶80 0 ,远远低于后者的滴度 (1∶5 0 0 0 )。研究结果证明 ,重组质粒pCMV S Pf70DNA可以诱导小鼠产生很强的细胞免疫和相对于蛋白质免疫而言较弱的体液免疫 ;Pf70蛋白质可以诱导小鼠产生很强的体液免疫。
- 叶凯李其岚徐洪Kironde FredAlexander S马辉文
- 关键词：疟疾恶性疟原虫DNA疫苗
- 含庚型肝炎病毒E2基因片段质粒DNA能诱发相当强烈的体液免疫应答
- 2005年
- 叶凯
