刘方欣
- 作品数：32 被引量：87H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程文化科学更多>>
- 靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒的构建和序列分析
- 2006年
- [目的]利用RNA干扰技术,以Bcl-2为靶基因,设计构建重组体,并进行序列分析,探索肿瘤基因治疗的新途径。[方法]设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体Pgenesil-1上构建重组体,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。[结果]将合成的DNA片段退火后克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列,靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒构建成功。[结论]靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒的成功构建,为下一步利用该重组体干扰肿瘤细胞中Bcl-2的mRNA转录,探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础。
- 周琦张玉诺刘方欣龚旭
- 关键词：基因BCL-2重组质粒
- ^(99)Tc^m-EC-ASODN反义探针的合成和标记被引量：8
- 2005年
- 报道反义探针99Tcm-EC-ASODN的合成和标记。将次乙酰双半胱氨酸(L,L-ethylenedicysteine,EC)与反义寡脱氧核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)进行偶联,形成复合物EC-ASODN,通过核磁共振图谱(1H-NMR)、红外图谱(IR)、紫外(A260)吸收和电泳,鉴定EC-ASODN复合物的结构。用锝(99Tcm)标记EC-ASODN,通过薄层层析评价99Tcm-EC-ASODN的标记率、放化纯和稳定性。结果显示,1H-NMR、IR谱图、紫外吸收和电泳都证实EC与ASODN联结形成EC-ASODN,99Tcm-EC-ASODN的标记率为77.28%,放化纯为97.52%,Rf=0.95—1,4h内具有很好的稳定性。结论:EC与ASODN能形成稳定的复合物EC-ASODN,用99Tcm标记,方法简便,能得到标记率高和稳定性好的反义探针。
- 谢娟刘方欣王颖李少林
- 关键词：核磁共振光谱红外光谱
- 与表皮生长因子结合的c－erbB2癌基因的反义短核苷酸及其应用
- 本发明提供了一种c－erbB2癌基因的反义短核苷酸，其序列为：SEQID NO 1。该反义短核苷酸经多聚赖氨酸与表皮生长因子结合后的结合物注入体内存在的肿瘤细胞，利用EGFR受体与c－erbB2同属表皮生长因子受体家族，...
- 李少林吴永中季平段红王颖彭志平杜铭庞华谢娟黄家君李兵傣家富刘方欣
- 文献传递
- Bcl-2基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞株药物敏感性的影响被引量：3
- 2004年
- 目的:探讨bcl-2基因反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的bcl-2蛋白的表达和药物敏感性的影响。方法:用人工合成bcl-2基因反义寡核苷酸预培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以免疫组化法检测细胞bcl-2蛋白的表达水平;以MTT法检测bcl-2反义寡核苷酸、阿霉素单独及联合应用对MCF-7细胞生长的抑制情况,比较bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞药物敏感性之间的相关性。结果:联合应用bcl-2反义寡核苷酸与阿霉素能够明显增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,细胞存活率明显下降。免疫组化结果显示MCF-7细胞bcl-2表达水平与细胞药物敏感性有相关性。结论:bcl-2反义寡核苷酸能够抑制MCF-7乳腺癌细胞bcl-2基因的表达,提高MCF-7细胞对阿霉素的敏感性。
- 刘方欣李晓愚张玉诺
- 关键词：BCL-2基因反义寡核苷酸乳腺癌药物敏感性
- ^(99m)Tc-ASODN-EGF的小鼠体内分布和兔药动学被引量：1
- 2005年
- 目的:研究c-erbB2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针99mTc-ASODN-EGF的体内分布和药动学特性。方法:小鼠尾静脉注射99mTc-ASODN-EGF 370 kBq(10μC i).150μL-1,于0.5,1,2,4,8,24 h取血、肝、脾、肾等组织器官,测定每分钟放射性计数(cpm),并准确称重,计算每克组织百分注射剂量率(%ID.g-1)。兔经左侧耳缘静脉注射99mTc-ASODN-EGF 1110 kBq(30μC i).2 mL-1,于1,3,5,10,15,20,25,30,40,60,120,240,360 m in从右侧耳缘静脉采血约0.2 mL,测定cpm,准确称重,计算每克血液每分钟放射性计数,用3P97软件计算药动学参数。结果:99mTc-ASODN-EGF在小鼠肝、肾、脾和肺的放射性分布较高,1 h的%ID.g-1分别为22±8,7.4±2.0,46±28和13±7。在心、脑、骨和肌肉的放射性分布很低。兔药动学参数符合二室模型,t12α为(0.32±0.07)h,t12β为(9±3)h,Vc为(1.2±0.8)cpm.kg-1,Cl为(0.061±0.023)cpm.h-1。结论:99mTc-ASODN-EGF的组织器官分布和药动学特性能满足临床显像的要求,可用于肿瘤靶基因的显像。
- 谢娟李少林张玉诺刘方欣
- 关键词：药动学
- 低氧诱导因子1α对小鼠宫颈癌放射敏感性的影响
- 2007年
- 目的:探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)对小鼠宫颈癌皮下移植瘤放射敏感性的影响,探讨其可能的机制。方法:建立宫颈癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组、单次γ射线大剂量照射组、小剂量分次照射组、大剂量照射联合高压氧组、小剂量分次照射联合高压氧组,采用不同的方案进行体外放射治疗。免疫组化法测定放射治疗后移植瘤内的HIF-1α、bcl-2的表达水平,观察各γ射线处理组照射后移植瘤的抑瘤率,并对HIF-1α与bcl-2的表达及抑瘤率进行相关性分析。结果:HIF-1α的表达与移植瘤抑瘤率呈负相关(r=-0.514,P<0.05);与Bcl-2表达无明显相关关系。结论:抑制HIF-1α的表达可提高肿瘤对放射治疗的敏感性,该效应可能与Bcl-2表达无关。
- 刘方欣张玉诺李晓愚任庆兰彭志平李少林
- 关键词：低氧诱导因子1Α宫颈癌
- 胸腺素α1与复合α干扰素融合蛋白的表达及其生物学活性被引量：3
- 2008年
- 实验旨在获得具有双重生物学活性的重组胸腺素α1(Thymosin alpha1,TM-α1)与复合α干扰素(IFNα-con)融合蛋白。选择大肠杆菌偏爱的密码子,将合成的TM-α1与IFNα-con编码序列构成的融和基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-22b(+)、在宿主菌BL21(DE3)-Codon plus-RP-X中成功表达了可溶性融合蛋白(TM-α1-IFN-con)。表达量占总蛋白的20%以上。通过硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、分子筛层析后,产品纯度达到96%以上。采用细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性,采用细胞增殖实验检测融合蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明,融合蛋白的抗病毒活性优于市售的IFNα1b和IFNα2a。对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响与市售的合成胸腺素α1相同。已有研究证实,该融合蛋白具有良好的体外抗HBV作用,其体外抗HBV活性比联合应用TM-α1和干扰素α强,且细胞毒性明显低于联合应用TM-α1和干扰素α。以上结果表明,通过大肠杆菌表达的可溶性融合蛋白(TM-α1-IFN-con),既具有良好的干扰素α抗病毒作用,也具有胸腺素α1促淋巴细胞增殖作用。
- 刘先俊刘方欣黎波周辉云王琴琴
- 关键词：胸腺素Α1融合蛋白活性
- 蔗蜡高级烷酸和高级烷醇分离与降胆固醇的作用(英文)被引量：3
- 2007年
- 背景:甘蔗蜡作为制糖工业的副产品,在非医药方面已有广泛的用途。有实验证实,甘蔗蜡在降低血胆固醇方面具有良好的作用,但其效应及适用于医药应用的甘蔗蜡的分离手段有待进一步研究。目的:从国产甘蔗蜡中分离适合医药用途的高级烷酸混合物、高级烷醇混合物,并观察其对高脂血症模型大鼠的降胆固醇作用。设计:随机对照动物实验。单位:重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所。材料:实验于2005-04/2006-01在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所完成。选用65只成年Wistar雌性大白鼠,体质量180～220 g,鼠龄3～6个月,SPF级,由重庆中药研究院实验动物中心提供。粗甘蔗蜡购自北京嘉德鸿盛生物化学科技有限公司。26C醇、28C醇、30C醇、32C醇和28C酸、30C酸、32C酸、34C酸为Sigma产品(气相色谱标准品)。其余试剂为国产分析纯级。方法:①将粗甘蔗蜡通过乙醇等有机溶剂反复提取后成为精制甘蔗蜡,进一步通过皂化、加钙等,将高级烷酸混合物与高级烷醇混合物分离。用气相色谱分析其主要成分,高级烷醇混合物主要分析C26、C28、C30和C32,高级烷酸混合物主要分析C26、C28、C30和C32。②按照参考文献叙述的方法,将大白鼠适应性饲养3d后,随机摸球法分为空白组(n=10)和实验组(n=55),断尾采血,自动生化分析仪测定所有大鼠三酰甘油、总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇。空白组给予普通颗粒饲料,实验组给予高脂饲料(猪油质量分数0.1、蛋黄粉质量分数0.1、胆固醇质量分数0.01、猪胆盐质量分数0.002、普通饲料质量分数0.788)[3],自由摄食与饮水。7 d后尾尖再次采血测定三酰甘油、总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇。按血清三酰甘油的高低随机将实验组大白鼠分为5个亚组:阴性对照组、高级烷醇低剂量组、高级烷醇高剂量组、高级烷酸低剂量组、高级烷酸高剂量组,每组1
- 刘方欣张玉诺李晓愚谢娟王敏刘先俊
- 关键词：胆固醇
- EGF受体介导c-erbB2癌基因反义寡核苷酸对p185蛋白表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的 研究c-erbB2癌基因反义寡核苷酸探针99mTc-ASODN-EGF对SK-Br-3乳腺癌细胞c-erbB2蛋白表达的影响。方法 将反义寡脱氧核苷酸与次乙酰双半胱氨酸偶联,用锝(99mTc)标记,再与表皮生长因子联合,形成分子复合物99mTc-ASODN-EGF。将该复合物给予SK-Br-3乳腺癌细胞,用免疫组化方法测定细胞膜c-erbB2蛋白的表达。结果99mTc-ASODN-EGF明显抑制c-erbB2蛋白表达,免疫组化的平均光密度值最低,对照正义和无义组对蛋白表达的影响较小。结论c-erbB2反义寡脱氧核苷酸明显抑制目的基因表达,使p185蛋白减少,细胞活力减弱。
- 刘方欣谢娟李少林张玉诺
- 关键词：EGFASODNC-ERBB2蛋白P185蛋白反义寡核苷酸受体介导
- 蔗蜡长链脂肪酸、长链脂肪醇的分离及其降血脂作用被引量：2
- 2007年
- 甘蔗蜡（Sugar cane wax）主要来源于制糖工业的副产品——淤泥。将粗甘蔗蜡通过乙醇等有机溶剂反复提取后成为精制甘蔗蜡，进一步通过皂化、加钙等，将长链脂肪酸混合物与长链脂肪醇混合物分离。气相色谱分析表明，长链脂肪醇混合物中以26C、28C、30C和32C醇四种含量最多（占90．2％）；长链脂肪酸混合物以28C、30C、32C和34C酸四种含量最多（占79．3％）。在高血脂模型大鼠中应用30d的实验结果证实，长链脂肪醇混合物在低剂量（5mg／kg·d）、高剂量（50mg／kg·d）组均有显著的降低血总胆固醇作用（与对照组比较P〈0．01），对升高血高密度脂蛋白也有一定作用，但对降低血甘油三酯的作用不明显；长链脂肪酸混合物在低剂量（20mg／kg·d）、高剂量（200mg／kg·d）组的结果与长链脂肪醇混合物相似。进一步证实了甘蔗蜡中长链脂肪醇混合物、长链脂肪酸混合物均有明显的降低血总胆固醇作用。
- 刘先俊刘方欣王敏
- 关键词：血脂
