公共文化服务平台

何祖勇: 作品数：72 被引量：99H指数：5; 供职机构：中山大学更多>>; 发文基金：国家科技重大专项广东省自然科学基金NSFC-广东联合基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>

合作作者

利用细胞透膜短肽提高Leptin减少脂肪沉积功能的研究: 引言瘦素(Leptin)作为一种由脂肪组织分泌的肽类激素,通过负反馈作用于下丘脑的体重调节中枢来减少食物摄入和增加能量消耗以减少体内脂肪沉积。体内注射Leptin具有治疗肥胖症的作用,但是血脑屏障却使外源; 李静何祖勇陈瑶生; 关键词：CPP LEPTIN 原核表达脂肪沉积

转基因猪细胞中CMV启动子区域甲基化的研究: 2015年; 为研究转基因猪外源基因表达与启动子区域甲基化的关系,利用流式细胞仪检测体外传代至第5、10和15代的转基因猪成纤维细胞中EGFP荧光强度的变化情况;采用亚硫酸盐测序的方法对这3代细胞CMV IE启动子区域30个Cp G岛的甲基化程度进行测定。结果显示细胞从第5代培养到第10代时荧光变弱,但是当继续培养到15代时EGFP荧光又渐渐变强,但EGFP阳性细胞的比例没有发生变化,均为100%。第5、10、15代细胞启动子区域的Cp G岛甲基化阳性率分别为3.64%±1.25、2.97%±1.03和1.65%±0.74,统计结果表明3代细胞间的甲基化阳性率差异不显著(P>0.05)。表明转基猪成纤维细胞中CMV启动子区域的甲基化程度随着体外培养时间的变化不明显,与EGFP的表达水平变化无明显相关。; 任广彩张英丛佩清陈瑶生何祖勇; 关键词：甲基化启动子 CPG岛转基因猪

两种信号肽引导木聚糖酶从毕赤酵母中分泌的效率差异研究: 木聚糖酶能够催化木聚糖的β-1.4-糖苷键水解生产木糖，在饲料中添加木聚糖酶能够增加饲料的黏度、提高饲料消化吸收利用率和减少排泄物对环境的污染。但是利用微生物自身产生的酶无法满足工业化应用需求，因此工业化水平的异源表达成...; 黄源凯陈瑶生刘海龙何祖勇; 关键词：木聚糖酶信号肽基因拷贝数毕赤酵母

利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因: 2014年; 锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.; 任广彩张英丛佩清陈瑶生何祖勇; 关键词：锌指核酸酶增强型绿色荧光蛋白转基因猪

利用锌指核酸酶对猪基因组进行定向遗传修饰: 2013年; 人工锌指核酸(zinc finger nucleases,ZFN)在植物和动物细胞中可以有效提高DNA修饰的效率和特异性使它很快就成为当前的一个研究热点。ZFN可使DNA双链断裂,然后依靠细胞中复杂的DNA修复机制修饰特定的基因。本文主要介绍ZFN在生产转基因猪研究中的应用及其未来的应用前景。目前采用传统的基因打靶和体细胞核移植的方法,科学家们已经获得了一批基因敲除猪。然而采用传统的基因打靶技术对哺乳动物体细胞进行遗传修效率较低,而且位点特异性和外源DNA整合效率都难以控制。ZFN能够结合到DNA特定位点上,并产生切割作用,使基因打靶的效率提高了几个数量级。本文将详细介绍目前应用ZFN技术获得基因敲除猪模型的几项研究,以及应用ZFN技术加快生产可用于农业生产和生物医药研究的转基因猪。文中还将讨论ZFN在猪的基因组遗传修饰中的安全性和有效性,以及ZFN技术在生猪产业中的创新性应用。; 张英何祖勇陈清森陈瑶生; 关键词：遗传修饰锌指核酸酶

华南地方猪肉品质及抗蓝耳病机制解析和种质资源创制: 2024年; 肉质与抗病力是猪的两个重要经济性状,解析其具体机制并创新种质是改良生猪的未来趋势.大量研究表明,肌内脂肪含量是影响猪肉品质最重要的因素之一.通过单细胞测序及成脂基因功能鉴定,中山大学育种团队成功解析了中国地方猪高肌内脂肪含量的成因,并通过单碱基突变创制出高瘦肉量、高肌内脂肪含量的基因编辑猪.猪蓝耳病曾经给我国生猪养殖业造成巨大损失,直到现在仍然是生猪养殖业两大重要传染病之一.本研究团队在蓝耳病病毒入侵、扩散、复制到释放各环节均有重要发现,并利用基因编辑技术将受体蛋白CD163中仅介导病毒脱壳的41个氨基酸精准删除,不仅获得了抗蓝耳病病毒的基因编辑猪,还最大限度地保留了CD163的生理功能.以上研究成果为猪的肉质改良以及抗病育种提供重要理论基础与新种质资源,并将推动我国生猪育种与养殖业快速发展.; 莫德林何祖勇彭欧阳童献王小宇刘小红曹永长陈瑶生; 关键词：种业肉品质蓝耳病

一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法: 本发明具体公开了一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法。本发明对骨髓来源的间充质干细胞进行了分子鉴定，建立了通过6通道流式技术利用少量细胞即可鉴定细胞纯度的方法；然后对猪骨髓间充质干细胞进行基因修饰，获得了表达多种重编程因...; 宋振威丛佩清冀倩倩赵海静何祖勇陈瑶生

一种利用ZFN在哺乳动物细胞中实现多个大片段DNA定点整合的方法: 本发明公开了一种利用ZFN在哺乳动物细胞中实现多个大片段DNA定点整合的方法，包括如下步骤：(1)构建靶向<I>CCR5</I>基因的单交换ZFN打靶系统：单交换ZFN打靶系统包括针对切割靶点的左、右ZFN表达载体和多个...; 何祖勇黄翔刘小凤刘小红陈瑶生

供体同源臂长度对ZFN介导的同源重组效率的影响被引量：6: 2016年; 应用锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease,ZFN)和序列同源的供体(Donor)作为模板,借助DNA的同源重组修复机制能够对动物基因组实现精确的遗传修饰。目前关于供体长度与ZFN介导的同源重组修复效率相关性的报道相对较少。本研究构建了一对靶向EGFP的ZFN并鉴定了活性,同时设计了一系列不同长度的供体,应用流式细胞分析术,在稳定整合了带有移码突变的EGFP基因的CHO细胞中系统分析了供体长度对ZFN介导的同源重组修复效率的影响。结果发现当同源臂单臂仅有50 bp时,即可有效支持ZFN介导的同源同组,随着同源臂长度的延伸,同源重组的效率有所提高,但要实现高效率的同源重组(较传统方法提高104倍),同源臂单臂长度需要延长至1 000 bp以上。这为今后如何设计合适的Donor,以提高ZFN等基因组编辑工具介导的同源重组效率提供了借鉴。; 聂宇乔艳乐陈瑶生何祖勇; 关键词：锌指核酸酶 DNA双链断裂同源重组供体

应用RGS双荧光替代性报告载体提高CRISPR/Cas9对猪BMP15基因的打靶效率被引量：4: 2017年; 我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。; 王敏石翾黄翔刘小凤覃玉凤刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：BMP15基因

何祖勇

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

何祖勇

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈