黄奔
- 作品数：55 被引量：31H指数：4
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的研究被引量：6
- 2005年
- 研究主要探讨在制备小鼠胎儿成纤维饲养层中,不同处理条件对小鼠胎儿成纤维细胞分裂与存活的影响.结果表明:小鼠胎儿成纤维细胞用适当处理浓度的丝裂霉素-C或适当强度的γ-射线处理一定的时间(10 μg/mL 1～4 h,20 μg/mL 1～2.5 h或21 Gy和28 Gy各处理1 h),能有效地抑制其分裂,且不影响其活力.
- 黄奔蒙超衡石德顺黎强杨素芳
- 关键词：小鼠胚胎干细胞成纤维细胞饲养层细胞分裂细胞活力
- 一种体外高效诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法
- 本发明提供了一种体外高效诱导人体细胞重编程为神经元细胞的方法，通过小分子化合物、基因干扰、基因敲除抑制ALK2、ALK3位点的表达。本专利诱导小分子化合物单一和安全，诱导时间短、诱导效率高、诱导作用位点和基因明确以及分子...
- 黄奔王国栋张丹丹刘权辉吴玉莲吕丹薇胡吉刚谢小莲
- 一种山羊一胎多羔的高效繁殖方法
- 本发明提供了一种山羊一胎多羔的高效繁殖方法，包括以下步骤：(1)同期发情调控，采用CDIR+PMSG的方法(2)超数排卵调控，采用FSH递减法配合PG和促黄体素释放激素A3的方法；(3)种公羊配种；(4)营养调控，每只山...
- 黄奔陈出石德顺李梦梅唐维
- 文献传递
- 用单层分化法进行胚胎干细胞神经分化的研究
- 2004年
- 用单层分化法研究了 ES细胞从 0～ 316 h(第 14天 )的神经分化过程。无饲养层培养的 ES细胞在无血清的N2 B2 7培养基中开始神经分化。从 72 h开始 ,神经外胚层的特异性转录因子 Sox1表达 ,在克隆的边缘逐渐出现向外迁移的细胞 ,形状呈圆形或椭圆形 ,有 1～ 2个细胞突起。在 191h(第 8天 )之后 ,细胞可迁移至克隆边缘的 2 0 0 μm之外 ,这些有细长突起的细胞表达神经元特异性蛋白 Tau。以后 ,迁移细胞的突起开始交叠成网状。 316 h(第 14天 )时 ,细长的纤维可跨越在不同的克隆之间 ,长达上千微米。此时 ,免疫染色的结果表明 ,在克隆的中央有较多的圆形 Nestin阳性细胞 ,而克隆的边缘有大量的 β- tubulin 阳性细胞 ,它们交织成复杂的网状图像。阶段性表达基因的表达时序研究表明 ,ES细胞的特异性转录因子 Oct4开始减弱时 ,Sox1表达开始 ,此时细胞由全能状态进入早期神经分化状态 ;Tau的表达是 Sox1表达的下游事件。这一时序与胚胎发育中神经发生的时序相符。单层分化法能直观地展示 ES细胞的神经分化过程 ,可作为研究细胞分化。
- 蒙超衡韦精卫黄奔韦力石德顺
- 关键词：胚胎干细胞神经分化胚胎发育
- 一种完全小分子化合物诱导山羊多能干细胞的制备方法
- 本发明提供了一种完全小分子化合物诱导山羊多能干细胞的制备方法，包括以下步骤：山羊耳缘成纤维细胞及小鼠胎儿成纤维细胞的分离、饲养层的制备、细胞培养基配制、山羊诱导多能干细胞样克隆的生产、山羊诱导多能干细胞样克隆形态特征的识...
- 黄奔李兰玉石德顺张丹丹郑贝贝任颜颜叶升刘树林
- 文献传递
- 抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响被引量：1
- 2023年
- 【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(chemical induced mammary epithelial cells,CiMECs)体外泌乳功能的调节作用,旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及“培养皿奶”的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为研究材料,经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂(RepSox)诱导8 d后,分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物(miR-142-3p inhibitor)及抑制物对照(inhibitor-NC),不转染的细胞作为空白对照(BC),转染24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖率,Western blotting检测β-酪蛋白(β-casein)的表达量,甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集;免疫荧光染色结果显示,诱导后的GEFs表达乳腺上皮细胞(MECs)的特异性标记物细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的GEFs细胞质内弥散分布着大小不等被染上红色的脂滴,表明成功获得了具有泌乳功能的奶山羊CiMECs。奶山羊CiMECs转染试验结果显示,与空白对照组相比,miR-142-3p inhibitor组miR-142-3p的相对表达量显著降低(P<0.05),inhibitor-NC组miR-142-3p表达量无显著差异(P>0.05);miR-142-3p inhibitor组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均显著增加(P<0.05),inhibitor-NC组奶山羊CiMECs的增殖率、β-casein表达量及甘油三酯分泌量均无显著差异(P>0.05)。【结论】GEFs经RepSox诱导8 d可成功转变为具有泌乳功能的奶山羊CiMECs,抑制miR-142-3p可显著促进奶山羊CiMECs的增殖并增加β-casein表达量及甘油三酯的分泌量,从而影响泌乳功能。
- 潘思尧张丹丹刘权辉王国栋吕丹薇黄奔
- 关键词：奶山羊
- 马山黑山羊MAPK8基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建
- 2025年
- [目的]克隆马山黑山羊丝裂原活化蛋白激酶8(mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)基因序列,并对该基因进行生物信息学分析,构建其真核表达载体,为山羊乳腺发育及MAPK8基因在转分化过程中的研究提供试验材料。[方法]参考山羊MAPK8基因序列(GenBank登录号:XM_018042429.1)设计引物,利用PCR扩增马山黑山羊MAPK8基因CDS序列并克隆;分别使用DNAStar和Mega 11.0软件进行序列比对及系统进化树构建,并利用ProtParam、ProtScale等软件进行生物信息学分析;构建真核表达载体并进行慢病毒包装后收集病毒液上清,感染马山黑山羊成纤维细胞,并通过实时荧光定量PCR检测感染病毒组和对照组MAPK8基因表达水平。[结果]马山黑山羊MAPK8基因CDS区全长1 155 bp,编码384个氨基酸,蛋白分子质量为43.98 ku,分子式为C_(1968)H_(3114)N_(528)O_(569)S_(22),等电点(pI)为7.13。相似性比对结果显示,马山黑山羊与不同物种间MAPK8基因氨基酸序列相似性均高于85%,表明MAPK8氨基酸序列较为保守。系统进化树显示,马山黑山羊MAPK8基因氨基酸序列与牛的亲缘关系最近,与斑马鱼的亲缘关系最远。马山黑山羊MAPK8蛋白为亲水性,不属于跨膜蛋白,主要分布在细胞质(52.2%)、线粒体(26.1%)、细胞核(17.4%)和细胞膜(4.3%)中,含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(第26―321位氨基酸处)。MAPK8蛋白二级结构包括无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和延伸链。互作蛋白预测显示,MAPK8蛋白可能与MAPK9、JUN、TP53、FOS、JUNB、MAP2K4、MAP2K7、MAPK8IP1和NFATC3蛋白存在互作。试验成功构建MAPK8基因慢病毒真核表达载体pCDH-CMV-MAPK8-mchery-Puro,转染马山黑山羊成纤维细胞后产生红色荧光信号,试验组细胞内MAPK8基因表达量极显著高于对照组(P<0.01)。[结论]本研究成功克隆了马山黑山羊MAPK8基因CDS序列,并构建了pCDH-CMV-MAPK8-mchery-Puro真核表达载体,为山羊MAPK8基因功能及应用�
- 雷志刚潘宏张丹丹刘权辉孙哲邓珊黄奔
- 关键词：生物信息学真核表达
- 山羊GATA3基因克隆及其真核表达载体构建被引量：1
- 2021年
- 本研究旨在克隆山羊GATA3(GATA binding protein 3)基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊GATA3基因编码区为种子序列(GenBank登录号:XM_018056969.1),通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增山羊GATA3基因完整编码区序列,测序鉴定后基于其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1慢病毒重组质粒。利用脂质体转染方法将慢病毒重组质粒pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1与病毒包膜质粒pCMV-VSVG、包装质粒pNRF共转染HEK-293T细胞,进行慢病毒包装后收集病毒上清液,成功感染山羊耳尖成纤维细胞。结果显示,山羊GATA3基因编码区序列全长1335 bp,编码444个氨基酸,分子质量为47.94 ku,分子式为C2093H3234N626O625S24,等电点为9.47,其中丝氨酸含量最高(13.3%),色氨酸含量最低(1.1%)。山羊GATA3基因核苷酸序列与牛、猪、驴、马、小鼠及人的相似性分别为97.7%、94.2%、92.2%、92.4%、88.0%和90.1%,不同物种间相似性较高,进化过程中具有高度保守性。系统进化树分析表明,山羊与牛、猪、驴、马及人聚为一支,亲缘关系较近,与非洲蟾蜍、斑马鱼亲缘关系较远。跨膜结构域及亲/疏水性预测结果显示,山羊GATA3蛋白不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白定位于细胞质中。通过构建山羊GATA3基因慢病毒真核表达载体pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1,细胞水平上转染HEK-293T和山羊耳尖成纤维细胞,过表达GATA3基因,产生绿色荧光信号。本研究结果为山羊GATA3基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究GATA3基因在山羊泌乳中的作用奠定了基础。
- 吴玉莲叶升王国栋刘权辉黄奔
- 关键词：山羊克隆乳腺发育
- 猪卵母细胞成熟相关的LncRNA筛选及验证研究
- 焦亚飞高邦君石德顺黄奔
- 一种利用转分化乳腺上皮细胞制备转基因乳腺生物反应器的方法
- 本发明提供了一种利用转分化乳腺上皮细胞制备转基因乳腺生物反应器的方法，包括如下步骤，1)制备携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞；2)将步骤1)制备的携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞注射到去除了乳腺芽的乳腺脂肪垫，注射细胞量...
- 黄奔张丹丹刘权辉朱少倩叶升覃梁珊李梦梅胡吉刚谢小莲
