马雪青
- 作品数：114 被引量：120H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 一种过表达HS3ST5基因的试剂在促进病毒感染中的应用及重组CHO-K1细胞系
- 本发明提供了一种过表达HS3ST5基因的试剂在促进病毒感染中的应用及其构建的重组CHO‑K1细胞系，属于基因工程技术领域。本发明提供通过将HS3ST5片段克隆到慢病毒载体中构建出重组慢病毒质粒，再经病毒拯救包装出的慢病毒...
- 白兴文卢曾军袁红黄磊宫晓华刘在新包慧芳李平花孙普李冬马雪青陈应理曹轶梅付元芳张婧邓欣雨焦云娟王利豪杨宇轩
- 口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型广谱中和性猪源单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型广谱中和性猪源单克隆抗体pOA‑6、pOA‑13和pOA‑20。pOA‑6重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；pOA‑...
- 李坤卢曾军 李凤娟包慧芳曹轶梅李平花孙普白兴文马雪青付元芳袁红赵志荀张婧 王健李冬张强
- 一种通用型的口蹄疫病毒结构蛋白抗体及其阻断ELISA检测试剂盒
- 本发明提供了通用型的口蹄疫病毒结构蛋白抗体及其阻断ELISA检测试剂盒，属于病毒检测技术领域。通用型口蹄疫病毒结构蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒，包括以下组成：包被抗原的酶标板、浓缩生物素标记单抗；浓缩生物素标记单抗中...
- 付元芳李坤卢曾军曹轶梅刘在新王省包慧芳李平花白兴文孙普马雪青张婧李志勇李冬陈应理
- 文献传递
- 马铃薯α-淀粉酶基因的克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2010年
- 利用RT-PCR方法从马铃薯(Solanum tuberosum)茎段总RNA中扩增、克隆amyA1基因(NCBI登录号GQ406048.1)。采用半定量RT-PCR方法检测amyA1基因在马铃薯茎、叶等不同组织中的表达强度,表明在茎组织中的表达丰度略高。利用生物信息学软件分析amyA1密码子的偏好性;同时对AmyA1氨基酸的理化性质、细胞内定位、保守结构及高级结构进行预测。基于NCBI数据库中有物种代表性的29种α-淀粉酶基因序列构建了基因进化树。amyA1基因全长1224bp,可编码一条理论分子质量为46.40kD、407个氨基酸残基组成的、可能为亲水性的胞外酶。与NCBI已登记的马铃薯α-淀粉酶基因(登录号M79328.1)核苷酸及氨基酸序列同源性达98%。第20～348位点范围内的氨基酸残基含有与淀粉酶13家族及亚家族相似的催化活性域(PF00128、SM00624),第349～407位点范围内的氨基酸残基含有α-淀粉酶C-末端β折叠区域(PF07821)。蛋白质结构预测表明氨基酸残基序列有维持淀粉酶活性的(β/α)8桶状结构以及其他几个功能域结构。所构建的基因进化树表明,两个马铃薯α-淀粉酶基因与木薯、苹果的序列同源性较高,与菜豆的次之,与水稻、大麦、玉米等单子叶植物的序列同源性较低。
- 王永刚马建忠马雪青周贤婧李昆鹏赵虎彪
- 关键词：马铃薯Α-淀粉酶基因克隆生物信息学
- 响应面法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制被引量：11
- 2013年
- 试验研究了各组分磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250在考马斯亮蓝G-250溶液中的作用及其对测定蛋白质浓度灵敏度和准确度的影响,结合全波长扫描光谱法分析了溶液配制过程中的变色机理。在此基础上,以一系列牛血清白蛋白溶液标准浓度和测定值之间的差值平方和的均方(S值)为响应值,采用单因素试验和响应面分析法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制条件。结果表明,乙醇是用来降低水溶液的极性环境,促进考马斯亮蓝G-250的溶解;磷酸是为考马斯亮蓝G-250表面电荷发生变化的促进剂;两者构成了影响变色灵敏度的主要因素,考马斯亮蓝G-250分子在溶液中不同的存在形式使反应体系呈现出从蓝色→绿色→棕红色等颜色变化;响应面优化配制条件为:60 mg/L考马斯亮蓝G-250、50 mL/L 95%乙醇、130 mL/L 85%磷酸时,S值最小值为2.07,即在此配制条件下的牛血清白蛋白测定值与标准值最接近。同时以不同标准蛋白质为试样对所配制的溶液进行准确度和灵敏度试验,结果表明对牛血红蛋白、γ-球蛋白测定准确度和灵敏度较好,对胰蛋白酶、胃蛋白酶灵敏度较差,主要原因是由于蛋白质组成差异所引起的。
- 王永刚马建忠马雪青王玉丽苏移
- 关键词：磷酸乙醇响应面
- 猪波形蛋白的原核表达及其对口蹄疫病毒浸染PK-15细胞的作用
- 2019年
- 为研究波形蛋白在病毒侵染过程中发挥的作用,原核表达猪波形蛋白与病毒互感后检测其复制能力。根据GenBank中已发表的波形蛋白序列,设计特异性引物,从PK-15细胞中扩增波形蛋白基因,并将其克隆至pET-28a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21进行原核表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,进行目的蛋白的纯化及复性,并利用病毒抑制试验,检测其在病毒感染过程中的作用。结果表明,成功地克隆了猪波形蛋白基因,并克隆至pET-28a(+)载体,经诱导后高效表达,经纯化复性获得的波形蛋白抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵染Marc-145细胞,然而并不抑制口蹄疫(FMDV)侵染PK-15细胞。随后借助细胞流式术检测PK-15细胞中波形蛋白的分布,显示其主要存在于细胞膜内的基质中。猪源波形蛋白的克隆表达,为进一步研究猪源波形蛋白与口蹄疫病毒蛋白之间的相互作用奠定了基础。
- 令瑛马雪青李平花张婧李坤付元芳冯若飞马忠仁卢曾军刘在新
- 关键词：原核表达口蹄疫病毒PK-15细胞
- 口蹄疫病毒O型和A型广谱中和性猪源单克隆抗体pOA-2及其应用
- 本发明公开了一种口蹄疫病毒O型和A型广谱中和性猪源单克隆抗体及其应用。本发明公开了口蹄疫病毒O型和A型广谱中和性猪源单克隆抗体pOA‑2，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SE...
- 李坤卢曾军李凤娟包慧芳曹轶梅李平花孙普白兴文马雪青付元芳袁红赵志荀张婧王健李冬张强
- 2020—2023年甘肃猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因遗传变异分析
- 2024年
- 为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及遗传变异情况,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对2020-2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序,通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传变异分析。结果显示,共检测了52份猪临床样品,PRRSV核酸阳性率为61.5%(32/52),成功获得了32条ORF5、15条NSP2和14条ORF3基因序列。ORF5基因遗传进化分析表明,2020—2023年甘肃地区猪群中PRRSV流行毒株中存在美洲型1.5谱系(4株)、1.8谱系(24株)、5.1谱系(2株)、8.7谱系(2株);NSP2基因遗传进化分析表明,获得的15条NSP2序列均为1.8谱系;ORF3基因遗传进化分析表明,获得的14条ORF3序列包括1.5谱系(2株)、1.8谱系(11株)、3.5谱系(1株)。基因核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF582.3%~99.7%、NSP285.9%~90.0%和ORF389.8%~95.7%;基因编码氨基酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF579.6%~99.0%、NSP283.4%~87.7%和ORF385.1%~94.5%。ORF5基因编码的GP5蛋白的信号肽区、高变区、细胞表位区等区域均存在不同程度的变异,其中5株毒株的第33位氨基酸出现了缺失;15株NSP2蛋白氨基酸序列的缺失模式与NADC30株一致。上述结果表明,当前甘肃地区猪群中PRRSV呈现以1.8谱系毒株为优势的美洲型多谱系共循环流行,这对甘肃地区防控PRRSV提供了重要的流行病学数据。
- 焦守德张婧李平花李平花韩庆彦张雨星韩庆彦王方洲白兴文卢曾军白兴文孙普
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5NSP2ORF3
- 一种口蹄疫灭活疫苗中3AB和/或3ABC非结构蛋白定量检测试剂盒和应用
- 本发明提供了一种口蹄疫灭活疫苗中3AB和/或3ABC非结构蛋白定量检测试剂盒和应用，属于疫苗检测技术领域。本发明基于双抗体夹心ELISA原理和生物素‑亲和素检测系统，利用FMDVNSP3A单克隆抗体、生物素标记的3B单克...
- 付元芳卢曾军孙普曹轶梅李冬白兴文李坤包慧芳赵志荀李平花王健马雪青张婧袁红张强刘在新
- 一种口蹄疫病毒A型广谱中和性猪源单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种口蹄疫病毒A型广谱中和性猪源单克隆抗体及其应用。抗体PAF56，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.12所示，重链CDR1序列：GFGFSNTY，重链CDR2序列：VFTGGGAT，重链CDR3...
- 李坤卢曾军曹轶梅 杨佳欣包慧芳李平花付元芳袁红孙普白兴文马雪青赵志荀张婧 王健李冬张强
