郑滨
- 作品数：21 被引量：36H指数：3
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- 相关领域：医药卫生理学生物学更多>>
- 抗Caspase-3核酶M1RNA的制备与体内外活性鉴定
- 2003年
- 为评价抗caspase 3核酶在阻抑细胞凋亡发生中的潜在价值 ,以RNaseP催化亚基M1RNA为模板 ,设计合成 3个特异性针对人caspase 3的核酶pM1 GS716、pM1 GS337和pM1 GS2 35 ,并对它们的体内外切割活性进行探讨 .3 2 P标记的caspase 3基因片段体外转录物作为靶RNA ,体外切割实验表明 ,pM1 GS716和pM1 GS337均有切割活性 ,其中pM1 GS716的切割效率可达到 93% .3个核酶转染HeLa细胞 ,评价其在体内的切割活性 .在TNF α作用下 ,转染pM1 GS716的HeLa细胞内caspase 3mRNA下降了 75 % ,蛋白含量下降了 6 9% ,caspase 3蛋白酶活性下降了 5 2 % .Hoechst 332 5 8染色表明 ,细胞凋亡率较对照明显下降 (分别为 2 1 6± 0 7%和 4 9 4± 0 2 % ,P <0 0 1) .提示体外制备的pM1 GS716具有良好的特异催化切割活性 ,有望通过切割caspase 3而抑制细胞凋亡 .
- 肖娟邹萍范华骅高峰郑滨高砾陆华中
- 关键词：核酶活性鉴定细胞凋亡
- 利用白细胞层制备树突细胞被引量：2
- 2002年
- 郑滨陆华中范华骅王黎高跞顾莉华周文清沈志祥李军民王振义高峰
- 关键词：树突细胞肿瘤治疗学体外制备
- 人外周血Vα24 NKT细胞抗肿瘤免疫机制的初步研究被引量：4
- 2007年
- 目的进一步认识Vα24 NKT细胞在抗肿瘤免疫中的作用。方法从正常人外周血中扩增并纯化得到Vα24 NKT细胞,通过流式细胞术检测其表型、活化后的细胞因子、细胞坏死相关因子的表达情况,采用DIOC18染色及流式细胞术测定Vα24 NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤率,并利用不同的阻断剂进行阻断实验。结果Vα24 NKT细胞分泌高水平的IFN-γ和IL-4,并表达TNF-α、穿孔素(perforin)、FasL、TRAIL等细胞坏死相关因子。Vα24 NKT细胞对表面表达CD1d分子的肿瘤细胞株的杀伤率高于不表达CD1d分子的肿瘤细胞株,同时在α-GalCer存在时,Vα24 NKT细胞的杀伤活性增强。对Perforin、FasL、TNF-α、TRAIL进行阻断后,ConA对Vα24 NKT细胞的杀伤作用的阻断效果最为明显。结论Vα24 NKT对肿瘤的杀伤作用是CD1d分子限制性和抗原特异性的。Vα24 NKT通过穿孔素途径和TNF家族成员发挥其细胞毒作用,而穿孔素途径是其肿瘤杀伤的最主要途径。
- 杨洁范华骅聂晓绚郑滨高跞刘嬿高峰
- 关键词：T淋巴细胞亚群
- 脐血造血干细胞库建立及其临床应用被引量：2
- 2003年
- 目的 建立脐血造血干细胞库,用于治疗白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等疾病。方法 采集新生儿脐血,用6％HES离心法分离脐血有核细胞以缩小脐血体积,样本以10％DMSO保存,检测有核细胞数、CD_(34)^+、CFU-GM及HLA,并作病原学捡测。结果 收集590份脐血,合格230份(合格率39％),平均脐血体积(89±20)ml,平均有核细胞数(1.48+0.36)×10~9,分离后有核细胞数(1.25±0.28)×10~9,有核细胞回收率(91+7)％,脐血CD_(34)^+细胞的百分率为(0.37±0.26)％,复苏后CFU-GM回收率为84％,平均每份脐血含CFU-GM(0.9±0.4)×10~6个集落,14％的样本CMV抗体阳性。73人查询,HLA 4个抗原以上相合率为95.7％。至2001年7月,提供3份脐血用于非亲缘脐血移植,1份用于亲缘脐血移植,3例植入,1例排斥。结论 建立脐血库有良好的应用前景。
- 仇志根范华骅陈亮袁纪军郑滨唐瑞峰马庆
- CⅡTA反义cDNA抑制Hela细胞表面MHCⅡ类抗原的表达被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨Ⅱ类主要组织相容性复合物 (MHCⅡ )激活因子 (CⅡTA)的反义cDNA对细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制。方法 克隆 3条CⅡTA反义片段 (arⅡ 1、arⅡ 2、arⅡ 3) ,并稳定转染Hela细胞。免疫组化、流式细胞术检测细胞核内CⅡTA蛋白及其调控的经典MHCⅡ (HLA DR、 DP、 DQ)类抗原表达 ,RT PCR法检测CⅡTA、经典MHCⅡ及恒定链的mRNA水平。结果 三种反义片段中arⅡ 2效果最佳。在重组人IFN γ诱导下 ,arⅡ 2阳性Hela细胞与正义链组比较 ,CⅡTA蛋白抑制率达87.2 3% ,HLA DR、 DP及 DQ抗原诱导型表达分别降低了 79.2 1%、90 .31%及 4 8.30 % ;同时CⅡTA、经典的MHCⅡ及恒定链的mRNA含量明显减少 (P <0 .0 5 )。结论 CⅡTA反义片段抑制了自身mRNA含量 ,从而阻止其调控的MHCⅡ分子的表达 ,为预防移植物抗宿主病提供了一种新思路。
- 郭荣邹萍范华骅崔磊曹谊林郑滨高跞高峰陆华中
- 人外周血NKT细胞体外扩增及其分泌细胞因子的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 建立人外周血自然杀伤T细胞 (NKT)体外扩增及检测NKT细胞所分泌的细胞因子的方法。方法 分别采用单加α 半乳糖神经酰胺 (α Galcer组 ) ,单加树突状细胞 (DC组 )以及同时加α Galcer、DC(α Galcer、DC组 )的方法从人外周血单个核细胞 (PBMC)和纯化T淋巴细胞中扩增TCRVα2 4+ /TCRVβ1 1 + NKT细胞。采用细胞内细胞因子流式细胞术检测手段测定NKT细胞中IL 4 ,IFN γ、TNF α阳性细胞比例。结果 PBMC中的α Galcer组 ,DC、α Galcer组和纯化T淋巴细胞中的DC、α Galcer组 ,NKT细胞扩增 1 9d后分别占淋巴细胞的 (2 5 .5± 7.2 ) %、(1 8.2± 8.2 ) %和 (2 4 .8± 5 .5 ) % ,NKT细胞分别扩增了 (1 5 .1± 9.1 )× 1 0 3 倍、(2 1 .8± 1 7.3)× 1 0 3 倍和 (2 3.0± 1 6 .7)× 1 0 3 倍 ,与其它各组差异有显著性意义 (P <0 .0 1 )。扩增过程TCRVβ1 1+ NKT细胞中分泌IL 4 ,IFN γ和TNF α的细胞比例均高于TCRVβ1 1 T淋巴细胞 (P <0 .0 5 )。结论 α Galcer具有体外大量扩增NKT细胞的能力 ,同时α Galcer的激活能力受CD1d分子的限制。由于PBMC中的单核系细胞也表达CD1d分子 。
- 范华骅郑滨刘嬿高跞高峰陆华中
- 关键词：细胞因子
- 人外周血自然杀伤T细胞体外扩增及其功能的初步研究被引量：5
- 2005年
- 为了建立人自然杀伤T(NKT)细胞在体外扩增的方法并对其功能进行初步的研究,通过不同的方法从人外周血单个核细胞(MNC)和纯化T淋巴细胞中扩增TCRVα24+/Vβ11+NKT细胞,并采用流式细胞术测定NKT细胞中IL-4、IFN-γ、TNF-α分泌水平。采用CD4/CD8免疫磁珠去除CD4+和CD8+细胞进一步纯化NKT细胞,并用DIOC18染色及流式细胞术测定NKT细胞杀伤活性。α半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2可以使NKT细胞在体外扩增。扩增19d后,TCRVα24+/Vβ11+细胞比率最高上升到25.5%±7.2%,NKT细胞最大扩增倍数达到(1.51±0.91)×104倍。体外扩增的NKT细胞高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56。在CD3单克隆抗体和IL-2刺激下,TCRVβ11+细胞分泌IL-4和IFN-γ的细胞比例均高于TCRVβ11-细胞(P<0.05)。去除CD4+和CD8+细胞后NKT细胞含量上升到80%。NKT细胞对肿瘤细胞株U937和HL60以及树突状细胞具有较强的细胞毒效应。NKT细胞可以通过α-Galcer直接从人外周血MNC扩增获得,从而简化实验步骤。
- 范华骅郑滨刘嬿高跞聂晓绚高峰陆华中
- 关键词：自然杀伤T细胞扩增细胞因子流式细胞术
- 抗白血病树突状细胞疫苗的制备被引量：3
- 2004年
- 目的 探索抗白血病异体树突状细胞疫苗的制备方法。方法 从健康者外周血中诱生DC ,用不同方法负载K5 6 2抗原(化学融合法 ,冻融抗原冲击法 ,肿瘤与DC共培养法 ) ,比较这些DC疫苗在递呈抗原激活T细胞增殖及杀伤功能方面的差异。结果 从健康者外周血中可诱生出具有正常免疫表型和抗原递呈功能的DC。不同抗原负载方法致敏的DC均能激活T细胞特异性杀伤K5 6 2细胞。冻融抗原负载的DC能有效刺激T细胞增殖 ,其活化的CTL对K5 6 2的杀伤毒性最强。结论 异体DC可有效递呈肿瘤抗原 ,激活T细胞杀伤肿瘤 ,冻融抗原负载的DC激活T细胞对肿瘤的杀伤最强 ,为今后临床DC疫苗的选择提供了实验依据。
- 王黎郑滨范华骅陆华中高跞沈志祥高峰
- 关键词：白血病树突状细胞抗肿瘤疫苗T细胞抗原负载
- CⅡTA反义RNA抑制皮肤成纤维细胞表面MHCⅡ类抗原表达
- 2003年
- 目的探讨用纳米载体介导主要组织相容性复合物(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)Ⅱ类抗原转录激活因子(MHCⅡtransactivator,CⅡTA)的反义RNA,抑制皮肤成纤维细胞表面MHCⅡ类抗原表达的可行性。方法将CⅡTA反义RNA(pDarⅡ质粒)稳定转染人类原代皮肤成纤维细胞(pDarⅡ-D),流式细胞仪检测pDarⅡ-D表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及经典的MHCⅡ类分子的mRNA水平。体外混合淋巴细胞反应检测pDarⅡ-D组刺激外周血T细胞反应的能力。结果与正义链组比较,在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,pDarⅡ-D组HLA-DR及-DP抗原诱导性表达分别降低了95.63%、87.89%;同时CⅡTA及经典的MHCⅡ类分子的mRNA含量明显减少(P<0.01);pDarⅡ-D组刺激T细胞分泌IL-2mRNA水平降低(P<0.05)。结论CⅡTA反义片段抑制了自身mRNA含量,从而阻止了其调控的MHCⅡ类分子的相应表达。
- 郭荣邹萍陆华中范华骅曹谊林崔磊刘伟商庆新郑滨高跞高峰
- 关键词：主要组织相容性复合物皮肤成纤维细胞反义RNA抗原表达
- 非程控-80℃冷冻保存自体外周血干细胞移植的临床研究
- 2001年
- 马庆范华骅范慧珠郑滨袁纪军
- 关键词：自体外周血干细胞移植冷冻保存程控
