王晓辉
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国农业大学食品科学与营养工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 增强型绿色荧光蛋白在DH5α大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2010年
- 采用PCR技术从pEGFPpA-CAN克隆载体中扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP),插入到pGEM-Teasy载体中,构建pGT-EGFP重组质粒,其中的SP6启动子可用来表达EGFP蛋白。携带pGT-EGFP重组载体的DH5α大肠杆菌较普通DH5α大肠杆菌菌液略带淡绿色,在荧光显微镜下能够清晰观察该大肠杆菌的形态,带有绿色荧光。同时超声裂解携带pGT-EGFP重组载体的DH5α大肠杆菌,提取菌体总蛋白,SDS-PAGE显示EGFP蛋白是以可溶性蛋白形式存在的,分子质量大约为30kD,与其理论值大小一致。
- 王晓辉
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白EASY
- ABA处理不同成熟时期番茄果实中ACS和ACO家族基因的表达
- 2009年
- 番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程。其中作为重要的植物激素,乙烯和ABA又与成熟过程密切相关。在乙烯合成途径中,ACS和ACO两个基因家族起着非常重要的作用。而ABA与乙烯在植物成熟衰老过程中的相互作用也开始成为研究热点。采用真空渗透技术对不同时期的番茄果实(未熟、绿熟、破色)进行ABA渗透处理。然后根据处理4h(4hpi)和24h(24hpi)后的果实乙烯生成情况,确定处理后4h为基因表达测定时间。最后利用实时定量PCR技术,对3个不同成熟时期番茄果实中的ACS(LeACS1A,LeACS2,LeACS4和LeACS6)和ACO(LeACO1,LeACO3,LeACO4和LeACO6)进行基因表达测定。
- 王晓光李玲王晓辉马远征朱本忠
- 关键词：ACSACO乙烯
- 破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库的构建和功能基因筛选模型的初步建立被引量：7
- 2009年
- 番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程.利用破色期番茄果实,根据复性动力学原理在mRNA水平进行均一化操作使高丰度和低丰度的mRNA丰度接近.然后把均一化之后mRNA反转录得到cDNA,再与基因沉默载体pTRV重组,最后把构建好的载体通过电转化的方法转入到GV3101农杆菌中,从而建立起破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库.通过番茄果实中病毒诱导基因沉默技术,对cDNA沉默文库进行初步筛选,从而确定功能基因筛选模型.在模型建立阶段,以番茄红素合成途径相关的PDS基因作为内标基因,在100个混合农杆菌样中,成功筛选到了PDS基因.
- 王晓光马远征王晓辉李玲罗云波朱本忠
- 关键词：CDNA文库功能基因VIGS
- 番茄中维生素E合成相关基因的VIGS载体构建及侵染被引量：7
- 2011年
- 以番茄为材料,采用RT-PCR技术从番茄果实中克隆了其体内维生素E合成相关基因—生育酚环化酶(Tocopherol cyclase VTE1)的部分序列,片段长420bp,序列分析表明,该基因片段与番茄中生育酚环化酶cDNA序列同源性为95%,然后通过XhoI、KpnI 2个酶切位点连接VTE1片段和含PDS的pTRV2质粒,获得了重组载体pTRV2-PDS-VTE1,将该重组载体转化农杆菌GV3101,并侵染番茄。该研究为下一步分析基因沉默后的番茄中维生素E含量的变化提供试验材料;为今后通过转基因技术调节番茄果实的维生素E的合成奠定了基础。
- 芦亮亮傅达奇刘海萍王晓辉罗云波朱本忠左进华
- 关键词：番茄维生素EVIGS基因沉默
