徐亚林
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
- 供职机构：南京医科大学基础医学院动脉粥样硬化研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用被引量：3
- 2007年
- 根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400μg.mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre。利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达。结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419。将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293。S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失。测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去。以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合。
- 苏鑫铭徐亚林于春梅曹瑞兵周斌陈溥言
- 关键词：伪狂犬病病毒PCRCRE重组酶LOXP
- 修饰的单链DNA寡核苷酸靶向修复低密度脂蛋白受体基因点突变
- 2007年
- 徐亚林苏鑫铭张芳林朱含章许伟伟范乐明
- 关键词：病理学与病理生理学低密度脂蛋白受体基因点突变
- HHV-8 ORF50启动子区序列分离、鉴定及在293细胞中启动活性分析被引量：3
- 2003年
- 目的:分离和鉴定人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50基因上游启动子区序列,评价其在293细胞中启动活性。方法:以佛波酯(TPA)刺激的BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8 ORF50启动子区序列,克隆进pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因上游多克隆位点,分别构建含正反双向ORF50启动子重组报告质粒,并分别转染293细胞,作Lu-ciferase活性检测,计算相对Luciferase活性单位(RLU)。结果:①克隆的HHV-8 ORF50启动子区序列长655碱基(bp),含多个潜在推测AP1、SP1和ERE等转录因子结合序列;②ORF50启动子与正常pGL-3基本载体相比,其RLU增加了26.3倍;③TPA刺激后ORF50启动子与刺激前相比启动活性增加了4.1倍。结论:HHV-8 ORF50启动子区序列在293细胞中具有较强的启动活性;TPA可以作为一有效的阳性对照刺激物用于进一步鉴定ORF50启动子特性。
- 卢春黄丽曾怡徐亚林
- 关键词：人类疱疹病毒8型启动子活性
- RTP801缺氧反应性核心序列调控下血管生长因子165和成纤维细胞生长因子2的高效共表达
- 2007年
- 目的获取人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因,克隆基因损伤诱导转录物4基因启动子中的缺氧反应性核心序列,以含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体为骨架构建真核表达载体,转染人胚肾293细胞,观察在正常和缺氧下人血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。方法利用聚合酶链反应法从小鼠基因组中获取基因损伤诱导转录物4基因启动子的缺氧反应性核心序列337bp^511bp,替换含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体上的巨细胞病毒增强子(150bp^390bp)。通过聚合酶链反应法获取含有人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的片段,插入含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体中的多克隆位点中,构建重组质粒。利用生物性可降解的聚乙烯亚胺多分支树状聚合物将重组质粒体外转染人胚肾293细胞,在正常和缺氧条件下分别培养36h,Western印迹法检测细胞内血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养基中分泌性蛋白血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。结果真核表达载体经聚合酶链反应和酶切分析及测序证实构建成功,Western印迹法和酶联免疫吸附法检测证实重组质粒中血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因在基因损伤诱导转录物4基因缺氧反应性核心序列介导下在缺氧人胚肾293细胞有高效共表达。结论获取的基因损伤诱导转录物4基因的缺氧反应性核心序列在缺氧状态下有增强下游基因表达的功能,含有该增强子的真核质粒在缺氧下高效表达血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2。
- 朱含章王志广蒋玲琳苏鑫铭张芳林徐亚林徐州陈琪范乐明
- 关键词：病理学与病理生理学成纤维细胞生长因子2
- 载脂蛋白M基因启动子区-855T>C多态性与冠心病的关系被引量：3
- 2007年
- 许伟伟汤轶波朱含章徐亚林范乐明
- 关键词：病理学与病理生理学载脂蛋白M冠心病杂合子启动子
- 伪狂犬病病毒ul24基因表达蛋白的胞内定位研究被引量：2
- 2006年
- 根据GenBank已发表的PrVul24基因序列(NC006151),设计并合成一对引物,PCR扩增出ul24基因编码区,克隆于pEGFP-N1载体,得到重组质粒pUL24-GFP。酶切鉴定,测序及WesternBlot验证重组质粒。ul24基因序列测定结果已提交GenBank,登录号DQ226544。Westernblot分析结果表明UL24-GFP融合蛋白为45KD。将pUL24-GFP转染真核细胞,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞内定位,结果表明UL24-GFP融合蛋白定位于细胞核。
- 苏鑫铭徐亚林于春梅曹瑞兵周斌陈溥言
- 关键词：伪狂犬病病毒PCRGFP
