张旗
- 作品数：23 被引量：96H指数：6
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京大学人民医院研究与发展基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性(英文)被引量：6
- 2009年
- 目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果:提高退火温度12℃～14℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。
- 何湘君张旗刘玉京潘秀英
- 关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应DNA引物
- 肌球蛋白轻链激酶在非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用被引量：4
- 2015年
- 目的 研究肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用,探讨肠黏膜屏障在NASH发病中的作用机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常饮食对照组、单纯性脂肪肝（NAFL）组、NAFL加MLCK特异性抑制剂ML-7组（NAFL＋ ML-7组）,NASH组以及NASH＋ ML-7组,每组为10只小鼠.HE染色法观察各组肝组织病理改变,免疫组化法测定小肠上皮中MLCK的表达,透射电镜观察小肠上皮细胞间紧密连接形态并测量细胞间隙宽度,ELISA法检测门静脉中内毒素脂多糖（LPS）浓度,测定外周血中转氨酶水平,ELISA和实时定量PCR法检测肝脏组织中炎性因子的浓度和mRNA表达.结果 NASH组小肠上皮细胞中MLCK表达量明显高于正常饮食对照组（P＜0.01）.NASH组紧密连接结构紊乱,细胞间隙宽度显著大于正常饮食对照组[（26.60±1.20） nm比（14.90±0.33） nm,P＜0.05],给予MLCK抑制剂ML-7后（NASH＋ML-7组）,紧密连接结构恢复,细胞间隙宽度[（14.90 ±0.67）nm]较NASH组明显减小（P＜0.05）.NASH组小鼠门静脉中LPS浓度显著高于正常饮食对照组[（7.260 ±3.184） U/L比（2.962±0.845）U/L,P＜0.05],NASH＋ ML-7组门静脉中LPS浓度[（3.772±1.033） U/L]显著低于NASH组（P＜0.05）.NASH组外周血ALT及AST水平明显高于正常饮食对照组（P均＜0.05）,肝脏中炎性因子TNFα、IL-6浓度及TNFα、IFM、NF-κB的mRNA水平显著高于正常饮食对照组（P均＜0.05）;给予MLCK抑制剂后（NASH＋ ML-7组）,外周血ALT和AST水平、肝脏中TNFα和IL-6浓度、肝脏中TNFα和NF-κB的mRNA水平均显著低于正常饮食对照组（P均＜0.05）.结论 NASH阶段小鼠肠黏膜通透性增加,MLCK可能在其中具有十分重要的调节作用,抑制MLCK后可以有效降低实验动物肠黏膜通透性,从而防治NASH.
- 张媛媛李晶迟毓婧李玫潘秀英张旗何湘君刘玉兰
- 关键词：肌球蛋白轻链激酶脂肪性肝病非酒精性肠道黏膜屏障
- RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA被引量：32
- 2007年
- 目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBRGreen实时定量PCR扩增。结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3′末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别。对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性。另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs。
- 张旗何湘君潘秀英
- 关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应
- 老年性骨关节炎与类风湿关节炎滑膜细胞转化特性的比较研究
- 2013年
- 目的与骨关节炎比较,探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)胞外信号活化蛋白激酶(ERK)的活化状态和P53蛋白的异常表达。方法原代培养RA FLS和OA FLS,应用western blot检测二者ERK活化状态的差异;应用抗P53抗体(DO-1和PAb240)与抗PCNA抗体对RA和OA的滑膜组织和细胞进行免疫组织化学染色;并进一步应用western blots确定RA FLS P53的异常表达。结果与OA相比,RA滑膜衬里层P53蛋白表达增多,主要为与抗突变型P53抗体阳性反应细胞积聚,并进一步证实RA衬里层成纤维样滑膜细胞P53表达异常;而且RA FLS在低血清和非贴壁情况下ERK活化状态均明显高于骨关节炎。结论类风湿关节炎衬里层成纤维样滑膜细胞P53蛋白异常表达,而且ERK处于持续活化状态,这为RAFLS的转化特性提供了新的佐证。
- 张育军曹争明丁孝权黄越龙董建强张旗吕厚山孙铁铮
- 关键词：骨关节炎类风湿关节炎滑膜细胞
- 细胞周期抑制性基因ANA在唐氏综合征患者脑组织过量表达
- 2005年
- 目的分析唐氏综合征(Down syndrome,DS)胎儿脑组织21号染色体(Chr21)基因的表达,探讨DS脑病变的分子机制。方法采用优化的半定量RT-PCR法,以B2M为内参,检测了7个Chr21基因在DS胎儿及同龄对照胎儿大脑皮层及小脑组织中的表达。结果Chr21基因DYRK1A,SYNJ1,PCP4(purkinje cell protein4gene),C21orf5,C21orf2和C21orf106的表达在DS胎儿大脑皮层及小脑组织较正常对照均没有明显改变。ANA(abundantin neuroepithelium area)基因表达在DS胎儿小脑无明显改变,但在DS胎儿大脑皮层的表达显著升高。结论细胞周期抑制性基因ANA的过表达可能与DS患者脑组织神经元细胞密度低有关。
- 何湘君张旗马丽萍杨丽君沈浣郭静竹
- 关键词：唐氏综合征逆转录聚合酶链反应
- 水通道蛋白-4基因多态性与多发性硬化、视神经脊髓炎的相关性
- 目的:探讨水通道蛋白-4(AQP-4)基因的常见基因多态性与中国北方汉族多发性硬化(MS)、视神经脊髓炎(NMO)的相关性.方法:收集2002年～2013年北京大学人民医院、天坛医院和复兴医院神经内科住院和门诊MS(n=...
- 杨亭亭何洋方丽波贾玫何湘君张旗李珊珊向雅娟姜红敖冬慧张星虎高旭光刘广志
- 关键词：多发性硬化视神经脊髓炎水通道蛋白-4单核苷酸多态性
- 脂联素启动子基因多态性和脂联素水平与2型糖尿病相关性研究
- 裴林贾玫乔博明张旗刘井波
- 水通道蛋白-4基因多态性与多发性硬化、视神经脊髓炎的相关性
- 目的:探讨水通道蛋白-4(AQP-4)基因的常见基因多态性与中国北方汉族多发性硬化(MS)、视神经脊髓炎(NMO)的相关性。方法:收集2002年~2013年北京大学人民医院、天坛医院和复兴医院神经内科住院和门诊MS(n=...
- 杨亭亭何洋方丽波贾玫何湘君张旗李珊珊向雅娟姜红敖冬慧张星虎高旭光刘广志
- 关键词：多发性硬化视神经脊髓炎水通道蛋白-4单核苷酸多态性
- 文献传递
- 脂联素基因突变-11377C/G检测方法建立及与2型糖尿病关系的研究
- 目的：建立脂联素基因(aPM1)-11377C/G点突变的检测方法,探讨aPM1-11377C/G点突变单核苷酸多态性(SNP)与血清脂联素(APN)水平及2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法：构建含aPM1-11377...
- 裴林贾玫乔博明张旗
- 关键词：脂联素基因多态性糖尿病
- 文献传递
- 脂联素基因突变-11377C/G检测方法建立及与2型糖尿病关系的研究被引量：2
- 2011年
- 目的建立脂联素基因(aPM1)-11377C/G点突变的检测方法,探讨aPM1-11377C/G点突变单核苷酸多态性(SNP)与血清脂联素(APN)水平及2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法构建含aPM1-11377C/G点突变的野生型和突变型质粒标准品,采用等位基因特异性PCR(ARMS-PCR)方法,结合荧光探针(TaqMan Prob),通过对引物3′端正配与错配扩增效率差别的比较,建立ARMS-TaqMan检测aPM1-11377C/G点突变的方法。同时,分别对156例(男87/女69)糖尿病患者(T2DM组)和89例(男21/女68)健康对照者(NC组)的aPM1-11377C/G基因频率,以及APN、各种生化指标以及临床基本资料进行检测和调查。结果 T2DM组APN水平显著低于NC组(P<0.05)。aPM1-11377位点CC、CG、GG基因的APN水平呈趋势性降低(P<0.001)。T2DM组与对照组间的aPM1-11377位点CC、CG、GG基因频率差异有显著性(P<0.05)。T2DM组的aPM1-11377 G等位基因频率显著高于NC组(24.36%vs.19.11%,P>0.05)。结论 ARMS-TaqMan方法检测aPM1-11377C/G基因点突变具有准确、经济和适合高通量检测的特点。aPM1-11377C/G多态性与血清脂联素水平和T2DM相关。
- 裴林乔博明贾玫张旗
- 关键词：脂联素基因多态性糖尿病
