张亚兰
- 作品数：10 被引量：37H指数：6
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中法先进研究计划项目国际科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的表达与抗原性分析被引量：8
- 2005年
- 目的 对旋毛虫新生幼虫p460 0 0抗原基因进行原核表达并检测重组抗原的抗原性。 方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,克隆到原核表达载体 pET 2 8a ,构建重组表达质粒 ,经酶切及测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3 ) ,以异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、酶联免疫吸附测定 (ELISA)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)分析表达产物。 结果 SDS PAGE结果显示表达产物的分子量约为Mr 480 0 0 ,与理论值相符。ELISA和Westernblotting结果表明 ,重组蛋白可被旋毛虫感染的猪血清和兔抗重组蛋白血清识别 ;兔抗重组蛋白血清可识别旋毛虫新生幼虫抗原Mr 460 0 0蛋白。 结论 成功表达了旋毛虫新生幼虫p460 0 0抗原基因 ,重组抗原具有良好的抗原性。
- 原丽红付宝权刘明远高飞张亚兰吴秀萍林本夫李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：抗原基因旋毛虫重组抗原抗原性分析SDS-PAGE猪血清
- 旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2005年
- 应用旋毛虫感染猪血清 ,对旋毛虫新生幼虫 c DNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆 p BK- CMV- WN10的序列分析结果表明 ,c DNA全长为 135 2 bp,含有 1个 12 18bp的完整的开放阅读框架 (ORF) ,编码的多肽由 4 0 6个氨基酸残基组成 ,其相对分子质量理论推导值为 4 5 90 0 ,等电点为 5 .4 3,N末端的信号肽及糖基化位点 (NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白 ,氨基酸序列 19～ 15 6与 15 8～ 2 95为重复区域 ,相似性为 74 % ,C末端有 1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域 ,但旋毛虫 p4 6 0 0 0抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异 ,可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。 PCR结果显示 ,从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和 5日龄成虫 c DNA中均扩增出此基因 。
- 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫抑制蛋白半胱氨酸蛋白酶抗原基因分泌性肌幼虫
- 旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选被引量：18
- 2004年
- 目的 获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。 方法 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。 结果 从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8个阳性克隆。序列分析结果表明 ,其中有 3 6个新的cDNA序列 ,已报道的序列有 5个 ,有 12个序列无开放阅读框架 (ORF) ,与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。
- 吴秀萍付宝权刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强Pascal Boireau
- 关键词：旋毛虫感染免疫筛选CDNA文库开放阅读框架猪血清线粒体基因组
- 旋毛虫感染小鼠对p46000重组抗原的抗体应答被引量：1
- 2006年
- 分别以旋毛虫肌幼虫ES抗原和p46000重组蛋白作为抗原，对小鼠人工感染旋毛虫后的抗体应答进行了ELISA检测。结果表明，以肌幼虫200条／只经口感染小鼠后，肌幼虫ES抗原在感染后9d可检出抗体，并于感染后35～42d达到最高水平；应用重组抗原检测时，感染后10d可检出抗体，抗体水平略低于用ES抗原，但是其消长规律基本一致．而且与阴性血清相比差异明显；抗体在117d后仍维持于较高水平。
- 原丽红付宝权刘明远林本夫张亚兰吴秀萍卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫ELISA抗体应答
- 旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析被引量：7
- 2004年
- 用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。
- 付宝权原丽红张亚兰吴秀萍李莲瑞卢强刘明远陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫肌幼虫CDNA文库免疫筛选
- 旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选
- 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA 文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA 序列进行序列分析.结果从4×10个重组噬菌体中共获得33个阳性克隆.序列分析结果显示:...
- 张亚兰付宝权刘明远原丽红吴秀萍李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫成虫免疫筛选
- 文献传递
- 旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选
- 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA序列进行序列分析.结果从4×10<'5>个重组噬菌体中共获得33个阳性克隆.序列分析结果显...
- 张亚兰付宝权刘明远原丽红吴秀萍李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫成虫CDNA文库免疫筛选
- 文献传递
- 旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析
- 用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1.6×10<'5>个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆.阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛...
- 付宝权原丽红张亚兰吴秀萍李莲瑞卢强刘明远陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫肌幼虫CDNA文库免疫筛选
- 文献传递
- 旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选被引量：8
- 2004年
- 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫 3日龄成虫 c DNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序 ,用分子生物学软件对所得 c DNA序列进行序列分析。结果从 4× 10 5个重组噬菌体中共获得 33个阳性克隆。序列分析结果显示 :共发现新 c DNA序列 16个 ,已知 c DNA序列 4个。其中阳性克隆 Zh8,9,10 ,12 ,13,14 ,2 0 ,2 6 ,2 8,2 9,36 ,5 4 ,6 8,70编码丝氨酸蛋白酶。通过免疫学筛选直接获得了具有免疫反应原性的阳性 c DNA克隆 。
- 张亚兰付宝权刘明远原丽红吴秀萍李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫成虫CDNA文库免疫筛选猪血清
- 旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白对小鼠的免疫保护性研究被引量：14
- 2005年
- 目的 探讨旋毛虫编码新生幼虫p4 6kDa抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。 方法 将纯化的重组融合蛋白WN10以 2 0 μg/只的剂量分 3次免疫小鼠后 ,攻击感染旋毛虫肌幼虫 2 0 0条 /只 ,检查旋毛虫 7日龄成虫数、雌虫体外产生新生幼虫数、感染 35d的肌幼虫数并计算减虫率 ,同时用ELISA法检测血清中抗WN10抗体IgG滴度。结果 WN10免疫小鼠后获得旋毛虫 7日龄成虫、肌幼虫的减虫率分别为 6 4 .2 8%和 6 1.2 1% ,均与感染对照组和佐剂对照组差异显著 ;获得雌虫产新生幼虫的减虫率为 16 .4 6 % ,与感染对照组和佐剂对照组差异不显著 ;WN10免疫组小鼠在第 3次免疫后 1周可检测到高滴度的抗WN10抗体IgG ,在攻击感染旋毛虫 9周后仍维持在较高水平。 结论 编码旋毛虫新生幼虫 p4
- 原丽红付宝权刘明远张亚兰高飞吴秀萍李莲瑞林本夫卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫重组融合蛋白保护性免疫
