尤隽丹
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中南民族大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省全球基金中央高校基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 鱼腥藻铁吸收调节蛋白基因(alr0957)的克隆和表达
- 2012年
- 依据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 furC基因(alr0957)的序列信息设计了一对特异性引物,用Touch-down PCR的方法从基因组DNA中扩增得到大小约450bp的目的片段.通过TA克隆的方法将该片段连接到pMD18-T载体上筛选出重组质粒pMD18-T-fur,然后进行双酶切,纯化furC基因,再连接到原核表达载体pET-28a(+)上,转化表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,对阳性菌株进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白.结果表明:在25℃条件下经1mmol/L IPTG诱导20h,融合蛋白被成功表达,其分子量约为19 000,为进一步纯化蛋白和对基因的调控功能方面研究奠定了基础.
- 尤隽丹陈思礼梅菊刘欣
- 关键词：鱼腥藻PCC7120原核表达
- 鱼腥藻PCC7120基因all3211和asl3212的克隆及其功能鉴定被引量：1
- 2012年
- 鱼腥藻PCC7120染色体上的开放阅读框all3211和asl3212具有与大肠杆菌细胞染色体上毒素-抗毒素系统(TA,toxin-antitoxin system)相同的遗传结构,该系统由位于同一操纵子中的两个分别编码毒素蛋白和抗毒素蛋白的基因组成,介导细胞程序性死亡.基因all3211的编码产物与MazEF毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白MazF同源.为证明这一对基因表达产物的毒素抗毒素作用,首先设计合适引物克隆了鱼腥藻PCC7120染色体上all3211和asl3212基因,并构建了含乳糖启动子和阿拉伯糖启动子的双启动子表达载体,将两个基因分别置于该载体的不同启动子下进行诱导表达,验证了各自表达产物对细胞的作用.结果显示:all3211基因的表达产物对细胞有一定的毒性作用,可抑制细胞生长;asl3212基因表达产物能减弱all3211表达产物对细胞的毒性作用,初步证明这一对基因构成了一个毒素-抗毒素系统,all3211为毒素基因,asl3212为抗毒素基因.
- 梅菊陈思礼刘欣尤隽丹
- 关键词：鱼腥藻PCC7120
- 鱼腥藻PCC7120铁摄取调节基因alr0957的克隆、体外表达和功能的初步研究
- 蓝藻是一类光合自养型浮游微生物,在合适的营养盐、温度和光照条件下即可大量繁殖,容易爆发赤潮或水华;另一方面,藻类做为可再生能源日益受到重视,在环境保护和资源开发领域有重要的研究价值。 本实验以水华优势藻鱼腥藻Anaba...
- 尤隽丹
- 关键词：原核表达基因克隆
- 文献传递
