周永春
- 作品数：5 被引量：27H指数：3
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 人血小板生成素cDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达
- 1998年
- 目的：克隆人血小板生成素（ｈＴＰＯ）ｃＤＮＡ，并研究其在ＣＯＳ－７细胞中的表达。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法获得ｈＴＰＯｃＤＮＡ，测序后克隆到真核表达载体ｐＥＤ上，以ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，巨核细胞集落形成培养法测表达产物活性。结果和结论：获得的ｈＴＰＯｃＤＮＡ和文献报道的序列一致。转染细胞ＲＮＡ斑点杂交结果显示ＴＰＯｃＤＮＡ获得转录，转染后４８和７２ｈ的细胞上清均可测到ＴＰＯ活性。ｐＥＤ是一个表达较高的真核表达载体。
- 童涌戴建新陈蕊雯周永春孙树汉陆德如
- 关键词：人血小板生成素基因表达CDNACOS-7细胞
- 由大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化和鉴定被引量：3
- 1997年
- 由重组大肠杆菌表达的人粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (rh GM- CSF)通过包涵体抽提、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换层析获得纯度达到 97%的产品 ,比活为 3.2× 10 7IU/ mg,分子量为 14.84 k D.纯化获得的 rh GM- CSF为一酸性蛋白 ,等电点约为 5.2 ,NH2 ,-末端序列测定与文献报道一致 ,NH2 -末端不均一 ,其中带 Met的分子约占 59.5% ,成熟蛋白分子约占 2 5%。蛋白的纯化倍数为 3.9,生物活性回收率为 85.3%。
- 周永春贾林陆峰金永明林爱友
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子纯化
- 用微载体技术培养家蚕BmN细胞的实验研究被引量：5
- 1995年
- 观察了家蚕ＢｍＮ（从Ｓｉｌｋｗｏｒｍ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布，提出其分布符合Ｐｏｉｓｓｏｎ规律，并由此估计了不同细胞接种浓度时裸球的百分比，与实际观测结果基本符合；研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况，家蚕ＢｍＮ细胞在Ｃｙｔｏｄｅｘ ３上生长的临界接种数为一珠粒６．４个细胞。当微载体浓度为３ｇ／Ｌ时，最低的接种浓度为１．０×１０＾５／
- 邓小昭周永春张林元刁振宇陈宜峰
- 关键词：家蚕微载体昆虫细胞培养
- 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子包涵体提取、复性和纯化的研究被引量：15
- 1997年
- 由基因工程大肠杆菌表达的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）以包涵体的形式存在于细胞中，通过破菌、洗涤获得包涵体，再经过溶解、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换柱层析得到了均一的产品，经高压液相和ＳＤＳＰＡＧＥ电泳测定纯度均大于９８％，ｒｈＧＭＣＳＦ的比活为３２×１０７ＩＵ／ｍｇ，纯化获得的ｒｈＧＭＣＳＦ为一酸性蛋白，等电点约为５２，ＮＨ２末端前２０个氨基酸序列测定结果与文献报道一致。ｒｈＧＭＣＳＦ的ＮＨ２末端不均一，其中带Ｍｅｔ的分子约占５９５％，第一个氨基酸为Ａｌａ的分子约占２４６％，为Ｐｒｏ的分子约占１４６％。纯化过程中蛋白的纯化倍数为３９，生物活性总得率为６９１％，工艺重复性好。
- 周永春陆峰金永明贾林林爱友陆德如
- 关键词：包涵体复性纯化
- 人基因工程γ-干扰素发酵过程的研究被引量：4
- 1993年
- 分析大肠杆菌 K802(pLY-4)生产人γ-干扰素的发酵过程后发现,采用丰富培养基(改良 LB+M9),既适合于细菌生长,又适合于γ-干扰素的表达。采用逐步升温、控制不同发酵阶段的 pH 及保持高的溶解氧浓度,可提高重组质粒的稳定性和细胞的生长速率,使γ-干扰素的表达量达4.0×10~6IU/ml,表达水平约占菌体蛋白的55%。
- 周永春刘登奇浦兆伟陆德如刘新垣王子轩王启松
- 关键词：基因工程发酵干扰素
