刘怀田
- 作品数：16 被引量：58H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗大肠杆菌J5株人源噬菌体抗体重链可变区基因的序列分析
- 1997年
- 噬菌体抗体库技术是近年来发展起来的在体外制备人源抗体的新技术。我们曾用该项技术筛选出能与大肠杆菌Ｊ５株结合的人源噬菌体抗体（ＰｈＡｂ）。本文将两株能与大肠杆菌Ｊ５株结合的噬菌体抗体重链基因，经亚克隆Ｍ１３ｍｐ１８噬菌体载体后，测定其重组噬菌体中插入基因的ＤＮＡ序列。结果证实，Ｊ８和Ｂ１１两克隆重链可变区（ＶＨ）基因序列与已报道的人免疫球蛋白ＶＨ基因序列的同源性达９７％以上；且与人免疫球蛋白第Ⅲ家族的框架区基因序列同源性高达９９％，表明此两株能与大肠杆菌Ｊ５株结合的阳性克隆均含有人抗体ＶＨ基因片段。
- 俞晓峰黄策王海涛刘怀田
- 关键词：人源抗体基因克隆基因序列噬菌体大肠杆菌
- 微波和柠檬酸协同杀菌作用的研究
- 刘怀田丁兰英
- 关键词：微波频率消毒柠檬酸
- 构建轻链次级库提高人抗TNF-α抗体的亲和力被引量：2
- 2001年
- 目的使用构建轻链次级库的方法,对已经获得的人源抗TNFα单抗mAb的Fab进行轻链置换,并筛选具有更高亲和力的人源抗TNFαmAb的Fab。方法首先,采用RTPCR扩增正常人全套抗体轻链基因,并与已获得的人源抗TNFαmAb的重链基因配对,构建人源抗TNFα噬菌体抗体的轻链次级库。然后筛选与TNFα具有更高亲和力的克隆。结果经过3轮的生物淘筛biopanning,获得了较原来的人源抗TNFαmAbFab具有更高亲和力的人源抗体Fab。结论轻链次级库筛选法,能有效地提高抗体的亲和力,为解决噬菌体抗体库法制备的人源抗体亲和力较低这一难题,提供了一种有效的方法。
- 袁斌侯晓军王慧何君刘怀田俞晓峰黄策
- 关键词：肿瘤坏死因子
- 人源宋内痢疾杆菌脂多糖抗独特型抗体的筛选和基因结构特点分析被引量：2
- 1996年
- 将纯化的宋内痢疾杆菌脂多糖的鼠单克隆抗体（５Ｂ１２）固相化，然后对混合噬菌体抗体库（ＨＩＶ、ＨＡＶ、ＨＢＶ）进行５轮“吸附－洗脱－扩增”的淘筛，使特异性噬菌体抗体得到了富集，阳性率达５３．１３％。竞争抑制试验证明，其中６株与宋内痢疾杆菌脂多糖的竞争抑制率大于５０％。酶切电泳图谱显示，淘筛的阳性克隆均无轻链基因，重链基因约４００ｂｐ。对分离的两株阳性克隆进行序列分析研究，发现这两个克隆ＤＮＡ序列相同，均为人免疫球蛋白重链可变区序列，属人ＩｇＧ基因Ⅲ家族，长度为３８４ｂｐ，与期望的６６０ｂｐ相差２７６ｂｐ。但这种重链部分缺失和轻链完全缺失的抗体片段却有明确的与５Ｂ１２的结合活性。
- 刘怀田王海涛黄策俞晓峰王学
- 关键词：噬菌体抗体宋内志贺菌脂多糖类基因
- 人白血病细胞株中G_(sα)转录物的新型异常剪接被引量：1
- 1998年
- Gsα是与激活腺苷酸环化酶信号转导途径相关的蛋白质 .不同的Gsα mRNA是由不同形式的剪接或利用不同的启动子产生的 .报道人白血病细胞株中Gsα转录物的一种新型异常剪接 .以来自Jurkat细胞株的人白血病文库cDNA及人白血病细胞株HL_6 0mRNA反转录后的cDNA第一链为模板 ,PCR扩增出Gsα基因完整编码区 (命名为GsαLeu) .DNA序列分析表明 ,GsαLeu与正常Gsα相比有 2个区域发生不改变阅读框架的缺失 ,一个位于正常Gsα第 2 3个氨基酸与第 2 49个氨基酸之间 ,另一个位于第 2 5 4个氨基酸与第 2 6 0个氨基酸之间 ,GsαLeu的这种结构提示其在白血病中起着重要的作用 .将GsαLeu完整编码区插入pGEX_2T融合蛋白表达载体的凝血酶位点下游 ,高效表达了GST/GsαLeu融合蛋白 ,表达产物经亲和层析 ,一步获得了电泳纯的GST/GsαLeu,为进一步研究GsαLeu的功能打下了基础 .
- 叶棋浓姚潇王恒梁张述刘怀田苏国富黄翠芬周廷冲
- 关键词：剪接PCR白血病细胞株
- 噬菌体抗体库技术的研究进展被引量：4
- 1997年
- 噬菌体抗体库（ｐｈａｇｅａｎｔｉｂｏｄｙｌｉｂｒａｒｙ）是将人抗体基因与噬菌粒载体相连，在细菌体内表达而制备的人全套抗体（ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）。利用抗体库技术可制备人源单克隆抗体。这是目前生物技术领域中一项重要的新技术。该文综述了其产生、发展和前景。
- 刘怀田王海涛黄策
- 关键词：单克隆抗体噬菌体抗体亲和力
- 紫外线表面消毒应用研究的进展被引量：22
- 1994年
- 紫外线表面消毒应用研究的进展刘怀田，李荣芬（北京军事医学科学院微生物流行病研究所１０００７１）关键词紫外线消毒，表面消毒，协同杀菌作用，影响杀菌因素紫外线消毒法经济、安全、方便，已广泛用于空气、物体表面、水和其它液体的处理［１～３］。但因其穿透力弱，...
- 刘怀田李荣芬
- 关键词：紫外线消毒杀菌作用
- 通过构建轻链二级库对人源抗TNF-α抗体进行亲和力成熟
- 2000年
- 通过构建轻链二级库的方法 ,对人源抗 TNF-α单抗 Fab进行轻链置换 ,并筛选出具有更高亲和力的人源抗 TNF- α单抗的 Fab.首先用 RT- PCR技术扩增正常人全套抗体轻链基因 ,并与已获得的人源抗 TNF- α单抗的重链基因配对 ,构建人源抗 TNF- α噬菌体抗体轻链二级库 ,然后筛选与 TNF- α具有更高亲和力的克隆 .经过三轮的生物淘筛 ( biopanning) ,获得了比原来的人源抗 TNF-α单抗 Fab具有更高亲和力的人源抗体 Fab.轻链二级库筛选法能够有效使抗体的亲和力提高 ,为解决噬菌体抗体库法制备的人源抗体的亲和力较低这一难题提供了一种有效的方法 .
- 袁斌张广育王慧何君刘怀田俞晓峰黄策
- 关键词：人源抗体肿瘤坏死因子
- 从混合的噬菌体抗体库中直接筛选高亲和性的抗肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体被引量：1
- 1999年
- 采用噬菌体抗体库技术，从未经免疫的混合人噬菌体抗体库直接筛选抗ＴＮＦα的人源单克隆抗体，３种不同的检测手段表明，经过５轮的筛选，能够与ＴＮＦα结合的噬菌体抗体得到了有效的富集。对所获得的噬菌体抗体克隆进行的初步鉴定表明，７个噬菌体抗体克隆能有效地与人重组ＴＮＦα结合，并且这种结合具有特异性，由这７个噬菌体抗体克隆制备的抗体Ｆａｂ片段也能有效地与ＴＮＦα结合。由此，我们通过噬菌体抗体技术直接获得了ＴＮＦα的人源单克隆抗体，这为进一步制备具有临床应用前景的人源抗ＴＮＦα单克隆抗体打下了基础。
- 袁斌何君周育森刘怀田俞晓峰王慧黄策
- 关键词：肿瘤坏死因子噬菌体抗体库人源单克隆抗体
- 枯草杆菌黑色变种芽胞经微波与洗必泰协同作用后超微结构的变化被引量：4
- 1995年
- 电镜观察，经３２０Ｗ微波单独作用５分钟的芽胞，其外壳层次模糊，而经与１％洗必泰协同作用者，外壳皱缩，层次消失，核区出现透电子区。对繁殖体观察，结果与芽胞类似，程度较严重。
- 杨华明丁兰英刘怀田李豫川曹军田
- 关键词：微波洗必泰枯草杆菌细菌芽胞
