何毅华
- 作品数：11 被引量：28H指数：3
- 供职机构：深圳大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 美洲大蠊变应原Cr PI的表达及纯化与免疫学特性鉴定
- 变态反应性疾病是一种临床上常见病和多发病,并有逐年增多的趋势,因此越来越受到世界各国卫生组织的关注。蟑螂能诱发机体产生特异性IgE抗体,导致哮喘及其他过敏性疾病(Bernton and Brown, 1964;Arrud...
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- 文献传递
- 蒿属花粉cDNA文库的构建和初步鉴定
- 花粉是过敏性疾病一种常见的过敏原,自从1889年英国医生John Bostock首次提出花粉症(Polinosis)以来,国内外学者在对当地致敏花粉进行众多的调查、抗原分析、纯化等工作的基础上,分别制备出主要致敏花粉变应...
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- 文献传递
- 蟑螂变应原Bla g2、Per a1和Per a7基因的克隆表达及免疫学特性研究
- 本研究中以蟑螂的三个主要变应原Blag2、Peral和Pera7基因为研究对象，通过RT-PCR方法分别扩增目的基因片段，克隆入T-载体，经测序表明它们与NCBI上公布的序列的同源性分别为100％、95.9％及99.6％...
- 何毅华
- 关键词：免疫学特性
- 文献传递
- 蒿属花粉cDNA文库的构建和初步鉴定被引量：14
- 2004年
- 目的构建蒿属花粉cDNA表达文库。方法应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5.6×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.3kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对蒿属花粉特异性重组变应原的进一步研究。
- 刘志刚吉坤美高波何毅华黄妩姣吴晓蔓
- 关键词：蒿属花粉重组变应原CDNA文库
- 德国小蠊主要变应原Bla g 2在毕赤酵母菌中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)中表达德国小蠊主要变应原Blag2,以获得其可溶性蛋白。方法根据已知的Bla g 2基因序列设计带有酶切位点的引物。PCR扩增德国小蠊变应原Blag2基因,经酶切后将该基因连接到毕赤酵母真核表达载体pGAPZaA,获重组质粒pGAPZaA-Blag2,该重组质粒线性化后,经电转化法转化毕赤酵母GS115,用PCR筛选出重组子并在YPD培养基中表达。用Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白Bla g2,用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫学活性。结果重组质粒pGAPZaA-Blag2转化毕赤酵母GS115后进行表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)分析显示,重组蛋白Blag2表达产物以可溶性分子形式存在,相对分子质量(Mr)为45 000。培养3 d的表达量占上清总蛋白的50％。表达产物重组蛋白Blag2经Ni2+亲和层析纯化后,Western blotting分析,在约Mr 45 000处有1条明最的特异性条带,该蛋白具有免疫学活性。结论获得了真核表达的德国小蠊主要变应原重组蛋白Blag2,该蛋白以可溶性蛋白的形式分泌到培养液中,避免了原核表达的变复性过程。
- 刘志刚何毅华
- 关键词：德国小蠊BLA变应原毕赤酵母免疫学鉴定
- 青蒿花粉变应原Art al基因的克隆与表达及鉴定
- 重组变应原疫苗具有纯度高、无杂蛋白,易标准化,无外源性抗原物质和病原微生物污染的优势。目前体外及皮肤试验结果显示,大部分重组变应原的免疫原性与天然变应原提取液相似。因此,构建变应原的cDNA文库或RT-PCR,获取其目的...
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- 文献传递
- 美洲大蠊变应原Cr-PII基因的克隆、表达及结构预测被引量：3
- 2006年
- 采用RT-PCR技术从美洲大蠊中扩增出变应原Cr-pII基因,并将其克隆至pMD18-T载体中。经序列测定和分析证实,所克隆的片段含有长度为1185bp的完整开放阅读框(ORF),与台湾株来源的Cr-pII(Per a1·0103)有95·9%的同源性。用NdeⅠ和NotⅠ将目的片段从T载体中切下,定向亚克隆入表达载体pET24a(+),然后成功转化大肠杆菌菌株BL21Star。经IPTG诱导得到45kDa的重组蛋白,Western-blot分析表明其具有良好的IgE结合活性。并通过生物信息学方法获得了目的蛋白的抗原表位和3D结构模型。
- 何毅华刘志刚邢苗杨豪
- 关键词：美洲大蠊变应原克隆
- 美洲大蠊Per a7基因的克隆、表达及免疫学鉴定被引量：4
- 2007年
- 根据原肌球蛋白基因序列设计引物,以我国南方地区美洲大蠊Periplaneta americanaRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出852bp的全长编码片段,经序列分析发现该基因与NCBI公布的Per a7有3个核苷酸发生改变。将目的片段克隆到pET24a(+)表达载体中,在大肠杆菌BL21Star获得表达,融合蛋白的分子量约为33kD。利用蟑螂过敏性患者血清对表达产物进行Western blotting检测,出现明显的识别条带,说明表达产物具有IgE结合活性。
- 刘志刚何毅华吴海强朱永峰
- 关键词：美洲大蠊变应原原肌球蛋白PER
- 青蒿花粉变应原Art a1基因的克隆、表达及特性鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的克隆、表达和鉴定青蒿花粉变应原Arta1。方法在成功构建青蒿花粉cDNA文库的基础上,用蒿属花粉过敏患者的阳性混合血清进行免疫学筛选,所获阳性克隆亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采用Westernblot和ELISA检测其IgE结合活性。结果选用阳性血清从青蒿花粉cDNA文库中筛选到1个阳性克隆,经序列测定,该基因与GenBank中已知基因无明显同源性,含有长度为609bp的开放阅读框,编码203个氨基酸,命名为Arta1;该重组变应原在大肠杆菌中高效表达为相对分子质量(Mr)为22.7×103蛋白,进一步在Ni2+亲和层析柱得到高度纯化;免疫学分析表明重组变应原有良好的IgE结合活性。结论本研究克隆和鉴定了一个青蒿花粉主要变应原Arta1(登录号为:CK700713),为花粉过敏性疾病的诊断和免疫治疗及进一步的实验研究奠定基础。
- 何毅华刘志刚高波吉坤美邢苗
- 关键词：重组变应原IGE花粉变应原ART亚克隆CDNA文库重组变应原
- 蟑螂过敏原诊断试剂的研制及临床应用研究
- 刘志刚冉丕鑫雷均平赖荷吴海强吉坤美于陆包莹李盟李国平高波王勤邹泽红许卓谦喻海琼周珍文胡川何毅华马慧朱健琦韩庆国李湘辉
- “蟑螂过敏原诊断试剂的研制及临床应用研究”项目在国家自然科学基金、广东省科技计划等项目的连续资助下，历经九年，极大的丰富了中国变态反应学过敏原的基础研究领域的内容，大大促进了临床上蟑螂过敏的免疫诊断水平和脱敏治疗水平的提...
- 关键词：
- 关键词：免疫诊断
