- 抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2001年
- 为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb)。采用重组HCMV(rhCMV)gp5 2蛋白片段免疫Balb/c小鼠 ,将免疫鼠脾细胞与Sp2 /0细胞融合 ,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价 ,用免疫印迹法进行特异性鉴定。最终获得 4株 (3E9,5A6,4G12 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。其培养上清的ELISA效价分别为 :1∶2 0 48,1∶10 2 4,1∶10 2 4,1∶5 12 ;腹水效价分别为 :1× 10 -7,1× 10 -7,1× 10 -6,2× 10 -6。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同的抗原表位 ,2H2 识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G12 识别另一个表位。
- 郑纪山周宗安邓小昭李越希何亮高健王永山李鹤龄
- 关键词：人巨细胞病毒单克隆抗体抗原表位
- 绿色荧光蛋白基因与乙肝病毒e抗原基因在家蚕细胞中的表达被引量：1
- 1997年
- 用绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｅ抗原基因融合，构建了家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）重组转移载体ｐＢｍＧＨｅ，使融合基因处于多角体基因（ｐｌｈ）启动子控制之下。共转染后得到的重组病毒ｒＢｍＧＨｅ能在家蚕细胞中表达约５０ｋＤａ的ＧＦＰ／ＨＢＶｅ融合蛋白。被感染的细胞在紫外光下发射出美丽的绿色荧光。用ＥＬＩＳＡ检测，ＨＢｅＡｇ抗原活性滴度达到１１２８００。这种既能发射绿色荧光又具有抗原活性的双功能融合蛋白为研制一种新型的发光免疫诊断试剂开辟了一条新路。
- 邓小昭刁振宇吴鸿银何亮张林元李光富胡建红黄永秀
- 关键词：GFPBMNPV融合蛋白
- 甲型肝炎病毒在3株细胞中的增殖和连续传代被引量：1
- 2001年
- 目的 :观察甲型肝炎病毒 (HAV )在 3个不同的细胞株中连续传代时的增殖特点。 方法 :将 HAV NJ- 3株先以常规传代方式适应不同的细胞株 :FRh K4细胞、PL C/ PRF/ 5细胞、2 BS,然后将适应病毒接种于细胞 ,并随细胞传代。用 EIA、IFA和激光扫描共聚焦显微镜观察带毒细胞连续传代中的病毒增殖。 结果 :1NJ- 3株 / K4细胞于第 5代 HAAg出现阳性 ,第 17、18代时达到高峰 ,2 4代直至 35代均为阴性。 2 NJ- 3株 / 2 BS细胞仅在第 6代出现一次弱阳性 ,传至 35代均呈阴性。 3NJ- 3株 / PL C则在第 3代即可测得 HAAg,第 7代 A值达 0 .80 2 ,P/ N值13.9,并保持此水平至少 70代以上。病毒产量稳定 ,细胞形态良好。冻存 10年的 HAV/ PL C株复苏后 ,仍保持良好的产毒性能。HAV/ PL C传代或收获的最佳周期为 5天。 结论 :HAV NJ- 3株能适应三种不同的传代细胞株 ,但只能在 PL C/ PRF/ 5细胞中长期随细胞传代 。
- 郑纪山何亮王宏周宗安邓小昭乔仁良
- 关键词：甲型肝炎病毒细胞培养连续传代
- 抗人巨细胞病毒重组抗原gp52单克隆抗体的研制及应用研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb) ,并将其用于人HCMV感染后的抗体检测。方法 :采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp 5 2蛋白的McAb。并用抗人 μ链抗体包被、rhCMVgp5 2蛋白作抗原和HRP -McAb作标记抗体 ,建立了检测抗HCMV抗体的捕获ELISA。用该法检测献血员、病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合征患者血清共计 939份。结果 :最终获得 4株 (3E9,5A6 ,4G1 2 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同抗原表位 ,2H2识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G1 2则共同识别另一个表位。用其建立的捕获ELISA ,gp5 2蛋白抗原最佳浓度为1 μg·mL- 1,酶标单抗的工作浓度为 1 :1 6 0 0 ,批内平均变异系数 3.7% ,批间平均变异系数 7.9%。6 34例献血员IgM抗体阳性 1 7例 (2 .7% ) ;2 88例病毒性肝炎患者 ,阳性 1 0例 (3.5 % ) ;1 7例肝炎综合征患者 ,阳性 1 1例 (6 4.7% )。均经免疫印迹法证实。结论 :用gp5 2蛋白及其单抗建立的捕获ELISA ,特异性强 ,灵敏度高 ,不受类风湿因子的影响 ,结果可靠 ,优于全病毒抗原构成的检测试剂 。
- 周宗安郑纪山邓小昭李越希何亮李鹤林王延茹
- 关键词：人巨细胞病毒感染抗体检测单克隆抗体
- 用连续长片段RT-PCR扩增HCV结构基因被引量：1
- 2001年
- 目的与方法 :使用连续长片段 RT- PCR,扩增 HCV的结构基因。 结果 :利用连续长片段 RT- PCR技术 ,结合热启动和两段 PCR一次扩增出长 2 .3kb的 HCV结构基因和部分调控序列 ,并用测量分子质量和限制性酶切的方法进行了鉴定。 结论 :利用长片段 RT- PCR可一次扩增出 C、E1、E2基因和部分 5 - N TR。
- 高健邓小昭王永山刁振宇周宗安何亮
- 关键词：丙肝病毒结构基因限制性内切酶
- 用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因被引量：8
- 1998年
- 以ＰＣＲ技术扩增含有ＰｒｅＣ信号肽序列及完整的ＨＢｅＡｇ基因的序列（即ＨＢｃＡｇ基因５′端４４７ｂｐ），在５′端加上合适的酶切位点，克隆到家蚕核多角体病毒转移载体ｐＢｍ０３０上，与野生型ＢｍＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕ＢｍＮ细胞，空斑纯化后得到多角体基因失活的重组病毒。ＥＬＩＳＡ法测定表明培养液上清中ＨＢｅＡｇ效价达１∶３２０００，细胞内ＨＢｅＡｇ效价为１∶２０００，培养液及细胞内的ＨＢｃＡｇ含量极低（＜１∶１６０）。研究结果表明，ＢｍＮ细胞能正确识别与切割ＨＢｅＡｇ信号肽序列，所表达的ＨＢｅＡｇ效价高，纯度好。
- 邓小昭刁振宇何亮乔仁良张林元
- 关键词：E抗原家蚕乙型肝炎病毒
- 乙型肝炎病毒adr亚型X蛋白在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 1998年
- 将ａｄｒ亚型ＨＢＶ的完整Ｘ基因克隆到表达质粒ｐＰｒｏＥＸＨＴｂ中，实现了Ｘ蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达。表达产物全长１７９个氨基酸残基（其中Ｘ蛋白部分１５４个氨基酸残基），分子量约１９．７ｋＤ，约占细菌总蛋白的３４％。其氨基端融合部分含有６组氨酸肽段，经ＨｉｓＴｒａｐＴＭ亲和层析纯化，一步可达纯度９３％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明，该表达产物可与ＨＢＶ感染患者体内的抗Ｘ抗体特异性结合。
- 房德兴周宗安翟春生顾志香王元伦何亮
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因
- 广谱高特异性重组丙型肝炎病毒抗原的制备纯化及鉴定
- 1996年
- 利用逆转录PCR技术克隆了中国株HCV的核心蛋白基因和非结构3区蛋白基因,DNA序列无分析显示克隆的基因片段属HCV-Ⅰ型。将二个基因片段分别克隆至质粒表达载体内,构建了多株表达融合和非融合核心蛋白的工程菌及表达非结构3区蛋白的工程菌。建立了二种重组蛋白的纯化方法,
- 李越希唐家琪乔仁良陶开华何亮潘秀珍李先富郭恒彬于明明
- 关键词：基因片段重组蛋白特异性工程菌非结构中国株
- 重组病毒/家蚕细胞系统稳定高效表达HBeAg基因的研究被引量：3
- 1998年
- 以 HBe Ag(乙型肝炎病毒 e抗原 )基因置换家蚕核多角体病毒 (Bm NPV)中多角体蛋白基因编码序列 ,获得高效表达 HBe Ag的重组病毒 r Bm HBe。在重组病毒复制过程中 ,家蚕 Bm N细胞的病理变化与野生型病毒的感染相同 ,但不能形成多角体。重组病毒的复制为典型的一步生长曲线 ,感染后 2 4 h～ 36h,病毒效价递增并达到最高。感染后 2 4 h,培养液中可检测到表达产物HBe Ag,72 h达到高峰。病毒感染复数的改变对 HBe Ag表达的影响是时限性的。低感染复数时HBe Ag产量较高。细胞接种密度及病毒接种时间对 HBe Ag的表达有较大的影响 ,最适的细胞接种密度为 3.2～ 6.4× 1 0 5 细胞 /瓶 ,在细胞指数生长前期 (48h～ 60 h)接种重组病毒 ,对于获得较高的重组病毒复制效价和 HBe Ag的产量都是有利的。在采用最佳技术参数组合的条件下 ,ELISA法检测细胞培养液中 HBe Ag滴度可达 1∶ 32 0 0 0。以上研究结果有助于在生产中高效稳定地制备HBe Ag,以满足供应配套乙肝 HBe Ag/抗
- 邓小昭何亮刁振宇张林元李光富
- 关键词：核多角体病毒E抗原HBV
- 人巨细胞病毒重组抗原及单克隆抗体在ELISA中的应用
- 2002年
- 用重组人巨细胞病毒（rhCMV）gp52蛋白作抗原及相应的单克隆抗体酶标记物建立捕获ELISA,检测人血清中的HCMV特异性IgM抗体。其工作浓度均由方阵滴定法确定。并进行精密度、特异性和干扰实验。用该法检测体检献血员 病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合症患者血清共计939份。结果gp52蛋白抗原最佳浓度为1μg/ml,酶标单抗的工作浓度为1:1600,批内平均变异系数CV3.7％,批间CV7.9％。634例献血员IgM抗体阳性17例（2.7％）;288例病毒性肝炎患者,阳性10例（3.5％）;17例肝炎综合症患者,阳性11例（64.7％）。均经免疫印迹法证实。该组合特异性强,灵敏度高,不受类风湿因子的影响,结果可靠,优于全病毒抗原构成的检测试剂。适用于临床诊断和流行病学调查。
- 郑纪山周宗安邓小昭李越希何亮李鹤林
- 关键词：单克隆抗体ELISA
