魏中锋
- 作品数：9 被引量：48H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定被引量：5
- 2005年
- 从陕西省榆林市某蛋用种鸡场疑似肾型传染性支气管炎病鸡中分离到了1 株肾型IBV(定名为YL 04),并对分离病毒进行了血凝性、血凝抑制性、致病性、鸡胚矮小化、电镜特征等生物学特性鉴定及S1基因5′端的RT PCR鉴定。结果表明,该分离株经10 g/L胰酶处理后的各代病毒尿囊收集液均可凝集鸡红细胞;标准阳性血清可特异性地抑制其凝集性;可复制出与自然发病相同的病例;病毒传代物有明显的致鸡胚矮小化作用;透射电镜下可见有近似球形、直径100 nm左右的冠状病毒粒子;用RT PCR方法扩增到1 条373 bp的目的片段,其核苷酸序列与IBV CQ/01/2004株序列的同源性达98%。
- 倪斌张彦明孙裴王晶钰穆杨张永国魏中锋徐浩
- 关键词：肾型传染性支气管炎病毒S1基因
- 鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离与鉴定被引量：7
- 2005年
- 对陕北(榆林)、关中(宝鸡市、扶风县)、陕南(洋县)等地鸡场疑似肾型传染性支气管炎病鸡,进行了病毒分离和鉴定。结果分离到4株IBV(定名为YL-04、BJ-04、FF-04、YX-04),并对分离病毒进行了血凝性、血凝抑制性、致病性、鸡胚矮小化等生物学特性鉴定。结果发现,分离的4株病毒经1%胰酶处理后的各代病毒尿囊收集液均可凝集鸡红细胞;IBV标准阳性血清可特异性的抑制其凝集性;回归试验可复制出与自然发病相同的病例;病毒传代物有明显的致鸡胚矮小化作用。以上研究结果表明,我们分离到的是鸡传染性支气管炎病毒,临床表现为致肾脏病变的组织嗜性,证明以上地区鸡群发病与肾型传染性支气管炎病毒感染有关。
- 倪斌张彦明王晶钰张永国苏正元魏中锋孙裴
- 关键词：肾型传染性支气管炎病毒传染性支气管炎
- 猪瘟病毒石门株动物传代脾毒与组织培养细胞毒E2基因序列的分析
- 2005年
- 根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒主要囊膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株核苷酸序列的同源性为99.4%,氨基酸序列的同源性为99.0%;细胞毒与标准石门株核苷酸序列的同源性为98.3%,氨基酸序列的同源性为96.7%。由此说明,猪瘟病毒经猪体多次传代和组织培养致细胞病变后,均能保持遗传的稳定性。
- 魏中锋张彦明孙裴张永国洪海霞倪斌郭抗抗
- 关键词：猪瘟病毒E2基因序列同源性
- 多次传代和致细胞病变猪瘟E2基因序列分析及病变细胞中DI颗粒的检测
- 本文利用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)技术，对多次动物传代和致血管内皮细胞病变的猪瘟病毒石门株E2基因的核苷酸序列进行了测定，并与标准石门株的核苷酸及氨基酸序列的同源性进行比较及分析，以期了解猪瘟主...
- 魏中锋
- 关键词：细胞病变猪血管内皮细胞序列同源性脐静脉血管内皮细胞抗原决定簇
- 文献传递
- 猪瘟病毒E2基因的哺乳动物细胞表达被引量：2
- 2005年
- 利用PCR技术扩增出猪瘟病毒主要结构蛋白E2基因的全序列,将其克隆到真核表达载体PEGPF-C1中,获得重组质粒PEGPF-E2,经PCR,酶切鉴定和序列分析证明目的基因的大小、插入位置和读码框完全正确。利用脂质体将阳性质粒PEGFP-E2转染入猪肾来源的细胞PK-15中,G418筛选出阳性的细胞克隆,通过PCR证明E2基因存在于筛选出的阳性细胞克隆中。利用荧光倒置显微观察阳性细胞发现有融合蛋白的表达,利用夹心ELISA猪瘟病毒抗原检测试剂盒检测证明表达的融合蛋白为猪瘟病毒E2基因编码蛋白。
- 张永国张彦明孙裴郭抗抗魏中锋王晶钰倪斌
- 关键词：阳性E2基因夹心ELISA哺乳动物细胞猪瘟病毒
- 多次传代和致细胞病变猪瘟病毒石门株E2基因序列分析被引量：4
- 2006年
- 根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(n PCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒的主要外膜糖蛋白E 2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNA star软件比较分析了E 2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株的核苷酸序列同源性为99.4%,氨基酸序列同源性为99.0%,细胞毒标准石门株的核苷酸序列同源性为98.3%,氨基酸同源性96.7%。由此说明猪瘟病毒经猪多次传代和致细胞病变后均保持遗传的稳定性。
- 魏中锋张彦明孙裴张永国洪海霞倪斌郭抗抗王晶钰
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
- 猪瘟病毒Shimen株p80基因的克隆及其真核表达质粒的构建被引量：3
- 2005年
- 根据已发表的猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)Alfort株和Brescia株的全基因组序列,设计2对引物P1/P2和B1/B2,在B1和B2的5'端分别加上XhoI和ApaI位点,以CSFVShimen株细胞毒为材料一步法提取总RNA,并以此为模板采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR),成功地扩增到约2.0kb的片段,将此PCR产物回收后与pMD18-T连接、转化,获得重组质粒,经PCR扩增,限制性酶切(BamhI/HindШ)和序列部分测定鉴定为阳性重组质粒P80-T。将P80-T分别经XhoI和ApaI酶切消化、回收后,与经XhoI/ApaI酶解的真核表达载体PEGPF-C1连接、转化,获得重组质粒,经PCR,XhoI和ApaI限制性酶切和序列测定鉴定为真核表达质粒P80-P,目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。为下一步在哺乳动物细胞中表达猪瘟病毒p80蛋白奠定了基础。
- 孙裴张彦明魏中锋倪斌洪海霞张永国郭抗抗王晶钰
- 关键词：真核表达质粒细胞毒套式PCR猪瘟病毒CSFV
- 猪瘟病毒4种检测方法的比较被引量：16
- 2007年
- 应用病毒分离鉴定、荧光抗体法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和夹心ELISA 4种方法,分别对23份猪瘟病料组织中的猪瘟病毒(CSFV)进行了检测,并比较4种检测方法的优缺点。结果显示,病毒分离鉴定法准确性较高,诊断比较容易,但存在试验步骤繁琐,所需时间长的缺点;荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果,特异性比较差;RT-PCR检测法具有快速、敏感等优点,特别是样品保存不理想时更有价值,利用套式PCR(nested-PCR)可以提高检测的特异性;夹心ELISA检测法具有快速、敏感等优点,但在样品保存不理想时会出现假阴性结果。
- 张朝红张彦明张永国郭抗抗魏中锋孙裴
- 关键词：猪瘟病毒分离鉴定荧光抗体反转录-聚合酶链式反应ELISA
- 猪脐静脉血管内皮细胞的分离与培养被引量：14
- 2004年
- 采用1g/L胶原酶灌注猪脐静脉,消化分离内皮细胞并在适宜条件下培养。对培养细胞的生长特性进行检测,并对细胞进行第 因子相关抗原(F- RAg)和扫描电镜形态学鉴定。结果表明,70%细胞在24h内贴壁,第3～5天生长迅速,第4～5天长成单层。培养的细胞呈单层贴壁生长,典型铺路石状,第 因子相关抗原(F- RAg)检测阳性,证明培养的细胞为血管内皮细胞。
- 洪海霞张彦明孙裴苏正元魏中锋张永国
- 关键词：脐静脉血管内皮细胞胶原酶猪瘟病毒发病机理
