马家烈
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：上海市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 14株肿瘤细胞P53基因突变的检测被引量：6
- 2008年
- 目的：检测14株肿瘤细胞P53基因的突变情况。方法：根据P53基因5～8外显子之间的内含子序列设计引物,分别对人肺癌、脑胶质瘤、肝癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、脉络膜恶性黑素瘤、视网膜成细胞瘤等9种肿瘤14株细胞的P53基因5、6、7、8的外显子进行PCR扩增反应。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物;DNA测序,并与正常的DNA序列比较;抽提肿瘤细胞蛋白进行Western blotting检测P53蛋白的表达。结果：14株肿瘤细胞P53基因热变区5、6、7、8外显子的扩增产物经电泳鉴定与预期相同。DNA测序结果表明,14株肿瘤细胞中8株存在P53基因5～8外显子的突变,其中肺癌细胞H1299、肝癌细胞Hep3B、肝癌细胞SMMC7721、脉络膜恶性黑素瘤细胞OCM-1检测到以前未报道过的突变;突变主要发生在外显子的编码序列,多数为单个碱基替换导致的错义突变,也有部分表现为同义突变;2株正常细胞未检测到突变。Western blotting检测显示,有基因突变的8株肿瘤细胞中仅6株有P53蛋白表达;所有P53基因未突变的肿瘤细胞株和正常细胞株均未检测到P53蛋白。结论：检测的14株肿瘤细胞中有8株细胞P53基因热变区存在突变,其中4株检测到以前未报道过的突变;2株正常细胞未发现P53基因突变。
- 马家烈韦芳李惠明田毓华陈霞芳王丰黄倩
- 关键词：肿瘤细胞P53基因基因突变
- 靶向E2F1的shRNA抑制眼内视网膜母细胞瘤生长被引量：3
- 2009年
- 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中由于Rb基因缺失或失活,转录调控因子E2F1始终处于活化状态,细胞不断增殖,E2F1活性增加是恶性肿瘤的普遍现象.根据人E2F1基因设计了3段shRNA,构建RNA干扰表达载体pSilencer-shE2F1,瞬时转染人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-Rb-44和人肝癌细胞株SMMC-7721,通过荧光定量PCR检测E2F1表达水平的变化,PI(碘化丙锭)染色检测细胞周期各时相细胞数量以检测其对细胞周期的影响.根据筛选出的有效shRNA序列构建腺病毒载体并包装出腺病毒Ad-shE2F1,在裸鼠前房模型中,体外按50moi的感染系数感染稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人视网膜母细胞瘤细胞株48h后,收集细胞,将2×105细胞注射到裸鼠眼前房内,连续观察眼内肿瘤细胞生长情况并拍照记录.通过转染肿瘤细胞株检测E2F1转录水平,筛选到1个能明显抑制肿瘤细胞内E2F1表达的shRNA序列,并使细胞周期中S期细胞数减少.经Ad-shE2F1感染的RB肿瘤细胞与对照相比较,其在裸鼠眼前房内肿瘤生长减缓.结果说明,有效抑制hE2F1表达的shRNA具有抑制体内外人视网膜母细胞瘤生长的作用.
- 王丰马家烈李惠明陈霞芳王煜非黄倩
- 关键词：E2F1SHRNA视网膜母细胞瘤
- 人视网膜发育分化过程中基质金属蛋白酶9表达的变化
- 2008年
- 目的观察人视网膜发育和分化过程中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平与细胞分布特点,探讨其在人视网膜发育和分化过程中的可能作用。方法胚胎发育早期、中晚期及成人视网膜石蜡切片,抗MMP-9免疫组织化学染色,观察MMP-9表达水平和分布的变化。结果胚胎发育早期的视网膜仅在外成神经细胞层的外侧可见弱阳性细胞;胚胎发育中期外成神经细胞层的外侧,即将来要发育成盘膜处出现明显的特异性染色,而其他细胞染色仍然较弱;成人视网膜的外核层出现显著的特异性染色细胞,胞质明显着色,胞体轮廓清晰,并可观察到锥体的结构以及突触的特异染色,判断这些细胞主要是光感受器细胞中的视锥细胞。结论MMP-9在视网膜中的表达与视网膜的成熟和细胞分化关系密切,在光感受器中的视锥细胞高水平表达,提示MMP-9可能参与视觉信号的处理。
- 李惠明裘玮王丰马家烈易苗英王煜非黄倩
- 关键词：视网膜基质金属蛋白酶9细胞分布
- 人LYVE-1基因联合小鼠GMC-SF基因干预小鼠膀胱癌的生长和转移
- 2009年
- 目的:研究人淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1)联合小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GMC-SF)干预小鼠膀胱癌的生长和转移。方法:通过人和小鼠的肺组织扩增LYVE-1基因的cDNA,构建真核表达载体phLYVE-1和pmLYVE-1,采用脂质体转染体外培养的小鼠膀胱移行细胞癌BTT-T739细胞、小鼠成纤维细胞株NIH-3T3和人胚肾细胞株AD293,用电穿孔法转染小鼠肌肉组织。采用Western印迹法验证LYVE-1蛋白的表达。用电穿孔法将phLYVE-1联合pmGMC-SF导入T739小鼠肌肉内,1周后皮下接种膀胱移行细胞癌BTT-T739-gfp细胞,观察肿瘤生长、淋巴结转移及全身转移情况。结果:成功构建真核表达载体phLYVE-1和pmLYVE-1。经Western印迹法检测证实,phLYVE-1和pmLYVE-1能在被转染的细胞和小鼠肌肉组织中有效表达。预先接受了phLYVE-1和pmGMC-SF的小鼠,BTT-T739移植瘤的生长减慢,肿瘤体积小于对照组,且肿瘤肺转移明显减少,肿瘤附近和远处淋巴结增大并呈现明显的增生反应。结论:异种同源LYVE-1基因联合小鼠GMC-SF基因干预对小鼠膀胱移行细胞癌的生长和转移有抑制作用。
- 王丰李惠明王慧萍韦芳马家烈陈霞芳易苗英黄倩
- 关键词：膀胱肿瘤粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 重组腺病毒介导E2F-shRNA转移抑制人视网膜母细胞瘤肿瘤生长的实验研究
- 研究目的:观察腺病毒(Adenovirus,Ad)介导E2F-shRNA转移对人视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)眼前房移植瘤生长的抑制作用。 研究方法:利用脂质体介导编码E2F-shRNA的表达质粒体...
- 马家烈
- 关键词：腺病毒
- 文献传递
- 重组腺病毒介导E2F-shRNA转移抑制人视网膜母细胞肿瘤生长的实验研究
- 研究目的：观察腺病毒(Adenovirus，Ad)介导E2F—shRNA转移对人视网膜母细胞瘤(Retlnoblastoma，RB)眼前房移植瘤生长的抑制作用。
研究方法：利用脂质体介导编码E2F—shRNA的...
- 马家烈
- 关键词：视网膜母细胞瘤重组腺病毒脂质体介导
- 文献传递
