阎淑滑
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 津田芜菁MYB77蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的:建立津田芜菁转录因子MYB77的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:RT-PCR获得MYB77的编码序列,将其克隆至pGEM-T载体中,在上下游引物中分别引入HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点,PCR获得带酶切位点的目的片段并将其连接到重组表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌DE3工程菌株,IPTG诱导重组质粒pGEX-KG-MYB77在大肠杆菌DE3中表达带有GST标签的融合蛋白,超声裂解大肠杆菌,用MagneGST ProteinPurification System纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE和Western印迹验证GST-MYB77融合蛋白的表达。结果:重组菌株可以表达GST-MYB77融合蛋白,用Western印迹鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为55.56×103处检测到目的条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-MYB77融合蛋白,为进一步研究津田芜菁MYB77蛋白的功能奠定了基础。
- 阎淑滑周波李玉花
- 关键词：津田芜菁融合蛋白原核表达纯化
- 以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建被引量：4
- 2010年
- 目的:构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。方法:克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因,利用载体中的多克隆位点将Gateway Binary Vector(pH7WG2D)中酶切位点XbaⅠ和HindⅢ之间包括P35S、T35S、attR1、attR2和CmR-ccdB的片段重组入表达载体pCAMBIA1301中,构建表达载体pCAMBIA1301-xylA-GW,利用含有津田芜菁HY5基因片段的BP反应产物与载体进行LR反应,获得含有目的基因的植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5,并导入根癌农杆菌LBA4404中。结果:抗生素筛选及酶切和PCR鉴定表明成功构建了以xylA为筛选标记的无抗生素标记植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5。结论:利用木糖异构酶基因xylA结合Gateway克隆技术构建无抗生素标记植物表达载体,可简化、方便植物转基因表达载体构建。
- 阎淑滑周波赵霞李玉花
- 关键词：GATEWAY技术木糖异构酶基因植物表达载体
- ‘津田’芜菁MYB类转录因子BrMYB77的克隆及遗传转化
- 转录因子对植物自身的生长发育及环境等因素的应答反应具有重要的调控作用。MYB类转录因子是最大的植物转录因子家族成员之一,参与了细胞分化、激素和环境因子应答等生物过程,并对植物次生代谢、花色素形成过程以及叶片等器官形态建成...
- 阎淑滑
- 关键词：津田芜菁亚细胞定位原核表达转基因番茄
- 文献传递
- 隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建被引量：5
- 2008年
- 隐花色素是植物向光反应的主要的光受体,介导蓝光/近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列设计并合成同源引物。通过RT-PCR方法从"津田"芜菁(Brassica rapa L.subsp.rapa"Tsuda")总RNA中扩增出CRY2基因的cDNA部分片段,采用gateway技术中的BP反应将其克隆到pDONR221中。测序表明,该片段与拟南芥具有87%的同源性,与油菜和中国大白菜的同源性达97%以上。采用gateway技术中的LR反应,以植物表达载体pH7GWIWG2(I)为基础,构建了由组成型启动子35S调控的CRY2基因的ihpRNAi植物表达载体。
- 周波孙梅阎淑滑李玉花
- 关键词：RNAI植物表达载体
