钟琪
- 作品数：19 被引量：6H指数：2
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文学文化科学更多>>
- 赖型钩端螺旋体LipL32-HlyX融合基因真核表达载体的构建及在COS7细胞中融合表达的研究
- 2009年
- 从赖型钩端螺旋体017株全基因组中通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)分别扩增出脂蛋白32(LipL32)和溶血素-X(HlyX)基因,应用重叠延伸PCR技术(Gene splicing by overlap extension PCR,SOEPCR)获得LipL32-HlyX融合基因。以pcDNA3.1为载体,LipL32-HlyX为目的基因,双酶切构建重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经双酶切、PCR及测序鉴定证实重组质粒构建成功。脂质体转染法将构建成功的重组质粒转染COS7细胞,RT-PCR扩增出约2000bp的目的基因,Western blotting分析发现在75KD处出现特异性的阳性条带。结果证实赖型钩端螺旋体LipL32-HlyX融合基因真核表达载体能在哺乳动物细胞中表达,为钩体DNA疫苗的研究和开发奠定了基础。
- 黄毕鲍朗钟琪张会东张英
- 关键词：钩端螺旋体真核表达
- 赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因重组质粒的构建及其细胞毒性的研究
- 2008年
- 目的构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性。方法从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性。将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性。结果扩增出816bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功。经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带。经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高。结论成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应。
- 黄毕鲍朗钟琪商正玲张会东王中平
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白LIPL32细胞毒性
- 结核分枝杆菌Rv0901基因功能研究
- 结核病是由结核分枝杆菌引起的一种世界性传染病。世界卫生组织2004年的世界卫生报告指出结核病已经成为可治疗的感染性疾病当中的头号致死性疾病。WHO感染性疾病的死亡登记和监管记录表明：2004年全球新增结核病人890万，其...
- 钟琪
- 关键词：结核病结核分枝杆菌致病机制脂质体转染重组耻垢分枝杆菌
- 结核杆菌CFP-10／ESAT-6融合基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其抗原性的初步研究被引量：2
- 2006年
- 目的构建表达结核分枝杆菌CFP-10／ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌,并观察其对巨噬细胞的作用。方法采用SOE法构建CFP-10／ESAT-6融合基因,克隆人大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261中,将重组质粒电转化耻垢分枝杆菌,SDS-PAGE检测CFP-10／ESAT-6融合蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞一氧化氮合成酶的表达水平。结果经DNA测序证实CFP-10／ESAT-6融合基因序列正确。重组耻垢分枝杆菌经热诱导后可以表达相对分子质量(Mr)约为18×103的融合蛋白,与预期值一致。重组耻垢分枝杆菌能够诱导小鼠巨噬细胞表达一氧化氮合成酶。结论表达CFP-10／ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌构建成功,该重组耻垢分枝杆菌能够活化巨噬细胞,具有抗原性,为研制结核疫苗提供一定参考。
- 李岩鲍朗张会东商正玲钟琪李娅莎
- 关键词：CFP-10ESAT-6融合基因重组耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌Rv0901基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其细胞作用被引量：1
- 2007年
- 目的 对结核分枝杆菌Rv0901基因的功能进行研究。方法 以PCR扩增Rv0901基因编码序列，定向克隆人穿梭表达质粒pMV261获得重组穿梭表达质粒，将重组质粒电穿孔进入耻垢分枝杆菌，构建重组Rv0901基因的耻垢分枝杆菌，对重组耻垢分枝杆菌进行诱导表达，用SDS-PAGE检测表达结果。比较耻垢分枝杆菌和重组耻垢分枝杆菌对THP-1细胞的不同作用。结果 成功构建重组穿梭表达质粒及重组Rv0901基因的耻垢分枝杆菌，重组菌诱导THP-1细胞的凋亡率高于耻垢分枝杆菌，其感染THP-1细胞后细胞的存活率低于耻垢分枝杆菌的感染，重组菌感染THP-1细胞后细胞培养液中NO（一氧化氮）的产生高于耻垢分枝杆菌的感染。结论 Rv0901基因可能与结核毒力存在一定关系。
- 钟琪鲍朗吴悦涵李岩王晓樱商正玲张会东
- 关键词：结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌
- 钩端螺旋体LAg42膜蛋白基因的克隆及原核表达
- 2007年
- 分别以问号状赖型钩体017株,56601株及双曲钩体PatocI株基因组为模板,PCR扩增目的基因lag42与质粒pET32a(+)构建重组原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达.结果显示不同毒力赖型钩体均能扩增出约1100 bp的片段,而PatocI株则未能扩增出目的片段;不同赖型钩体的lag42基因的同源性很高.融合表达质粒pET-lag42转化大肠杆菌BL21后,经IPTG诱导,表达出约62kDa的重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗体.
- 刘鱼鲍朗商正玲钟琪
- 关键词：钩端螺旋体克隆
- 青羊区综合行政执法部门协同问题及对策研究
- 党的十八大以来，推进城市治理体系和治理能力现代化，提升城市治理能力被广泛提及。综合行政执法工作，作为城市治理的重要手段，在规范城市秩序、美化城市环境、提升城市品质、增强人民群众幸福感获得感等方面都发挥着不可替代的作用。青...
- 钟琪
- 关键词：综合行政执法
- 结核分枝杆菌毒力基因研究进展被引量：1
- 2004年
- 结核病是目前全球重点控制的传染病之一,结核分枝杆菌(简称结核杆菌)具有强大的致病性和传染力,而要彻底了解和控制结核杆菌,对其毒力基因的认识就显得非常重要。近年来世界各国投入了很大的人力物力研究结核杆菌的毒力基因。对毒力基因的认识将促进结核的疫苗研制、临床诊断与控制,具有十分重要的抗结核战略意义。
- 钟琪鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌毒力基因传染病细菌感染
- 结核分枝杆菌免疫相关蛋白PPE68的表达及免疫原性的研究
- 2005年
- 目的:克隆、表达结核分枝杆菌PPE家族蛋白PPE68的编码基因Rv3873,并初步探索PPE68诱导Balb/c小鼠脾淋巴细胞的增殖活性,为进一步研究PPE68的免疫功能提供实验依据。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv3873基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pET32a(+),获得重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,纯化表达产物,通过XTT比色法检测重组蛋白PPE68诱导脾淋巴细胞的增殖活性。结果:重组质粒pETRv3873构建成功,57kDa的His-PPE68融合蛋白在大肠杆菌中稳定表达,并具有刺激Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖的功能。结论:PPE68蛋白具有较强的免疫原性,其免疫学功能具有进一步研究的价值。
- 王晓琳鲍朗朱庆平龙洋张会东钟琪
- 关键词：PPE68免疫原性结核分枝杆菌
- 雅趣和诗意:欧阳修梅尧臣咏桂诗的意蕴比较
- 2020年
- 在记录和探究各类名物的自然特征和人文意蕴时,创作者的认知视角常与文本的主题相契合。对于辛判官所赠的两棵岩桂树,欧阳修从岩桂的自然环境出发,极力表现返璞归真的幽谷之趣。而梅尧臣则是从桂树的来源上进行分析,主要说明友人赠物的惠好之意。在"趣"和"意"的双重内涵中,岩桂的外观特征和人格象征更为多元化。从文学表达的角度来看,诗歌以特有的观察视角刻画名物的外观、状貌等形象特征,并蕴含创作者的思想认识和审美意蕴,促进诗歌吟咏的名物完成了从自然事物到文学意象的跨越和转变。
- 钟琪
- 关键词：文学比较
