金瑞良
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 结核分枝杆菌H37Rv高丝氨酸激酶基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：1
- 2008年
- 采用PCR方法克隆到结核分枝杆菌H37Rv的高丝氨酸激酶基因thrB,将其连接到pET-28a(+)表达载体中,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中经丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到高效表达.用Ni.NTA His.Bind亲和层析柱对表达的活性重组蛋白进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究.结果表明:重组结核分枝杆菌高丝氨酸激酶能以L-高丝氨酸和ATP为底物催化L-高丝氨酸生成O-磷酰-L-高丝氨酸,该酶的比活力为2.946 U/mg,对底物L-高丝氨酸和ATP的米氏常数分别为2.303 1 mmol/L和2.342 9 mmol/L.
- 王虹军刘瑞卿金瑞良曹健徐胜凤王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌ATPNADH
- 结核分枝杆菌H37Rv组氨醇脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：2
- 2007年
- 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增hisD基因,构建pET-28a-HDH重组质粒;转化重组质粒到E.coli BL21(DE3)并诱导表达,纯化可溶性的结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶(HDH),并对其性质进行研究,结果表明:重组结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶能以L-组氨醇和NAD+为底物催化L-组氨醇生成L-组氨酸;该酶的最适pH值为8.3,最适温度为45℃,比活力为1.788 U/mg;Mn2+,Ca2+,Zn2+,Co2+等对酶促反应有激活作用;底物NAD+和L-组氨醇的米氏常数分别为0.9765 mmol/L和2.755μmol/L;25℃时重组蛋白的二级结构中有20.5%的α-螺旋,40.9%β-折叠,4.2%β-转角,34.3%无规卷曲.
- 刘瑞卿金瑞良王虹军徐胜凤曹健淳于利娟许云敏王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌NADH
