郭鹏
- 作品数：23 被引量：7H指数：2
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- 腺病毒介导CREG基因转染抑制兔颈动脉球囊拉伤后新生内膜形成
- 目的以兔颈动脉球囊损伤模型为研究对象,应用腺病毒载体介导使CREG基因在损伤血管中大量表达,观察CREG对血管平滑肌细胞(SMC)表型转换的调控及对新生内膜增生的影响,以期深入探讨CREG基因在PCI术后再狭窄防治中的作...
- 郭亮韩雅玲闫承慧郭鹏邓捷麦晓燕李少华
- 文献传递
- 腺病毒介导CREG基因转染抑制兔颈动脉球囊拉伤后新生内膜形成
- 目的以免颈动脉球囊损伤模型为研究对象,应用腺病毒载体介导使CREG基因在损伤血管中大量表达,观察CREG对血管平滑肌细胞(SMC)表型转换的调控及对新生内膜增生的影响,以期深入探讨CREG基因在PCI术后再狭窄防治中的作...
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- 腺病毒介导CREG基因转染抑制兔颈动脉球囊拉伤后新生内膜形成
- 目的以兔颈动脉球囊损伤模型为研究对象,应用腺病毒载体介导使CREG基因在损伤血管中大量表达,观察CREG对血管平滑肌细胞(SMC)表型转换的调控及对新生内膜增生的影响,以期深入探讨CREG基因在PCI术后再狭窄防治中的作...
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- 重组人E1A激活基因阻遏子/myc-His融合糖蛋白的纯化及功能鉴定
- 2010年
- 目的:纯化重组人E1A激活基因阻遏子(hCREG)糖蛋白,验证重组hCREG糖蛋白具有抑制体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖的生物学功能。方法:根据6×His亲和层析原理,应用Ni-NTA柱纯化重组hCREG蛋白,纯化后蛋白通过HiTrap脱盐柱脱盐。用流式细胞周期分析研究添加0.5μg/ml、1μg/ml及2μg/ml重组hCREG/myc-His融合糖蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。用BrdU掺入方法研究重组蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。结果:根据6×His亲和层析原理用Ni-NTA纯化重组hCREG蛋白,浓缩并脱盐后的重组hCREG蛋白浓度为1.6mg/ml,纯度为92%,此蛋白仍保留了糖基化形式。流式细胞仪细胞周期分析结果提示重组hCREG蛋白可抑制体外培养的HITASY细胞增殖,且低浓度组的抑制效应要高于高浓度组。BrdU掺入实验结果提示,添加2μg/ml重组hCREG蛋白组与对照组相比可显著抑制体外培养的HITASY细胞增殖,组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:具有生物学功能的重组hCREG/myc-His糖蛋白的成功纯化,为hCREG蛋白的功能研究及生物工程制备提供了实验平台。
- 孙鸣宇韩雅玲郭鹏康建闫承慧
- 关键词：糖蛋白蛋白纯化
- 重组分泌型人CREG/myc-His融合糖蛋白的表达及功能分析
- 目的构建人E1A激活基因阻遏子(hCREG)基因的真核表达载体并转染人293F细胞株,筛选稳定转染细胞克隆,鉴定重组的分泌型hCREG/myc-His融合蛋白的糖基修饰和生物学功能。方法用RT- PCR技术扩增终止密码突...
- 韩雅玲孙鸣宇郭亮郭鹏栾波康建闫承慧
- 文献传递
- 小鼠E1A激活基因阻遏子RNA干扰表达载体的构建及鉴定
- 目的构建小鼠E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1 A-stimulated gene,CREG)小分子干扰RNA (RNA interference,RNAi)真核表达载体,下调小鼠细胞...
- 郭鹏闫承慧郭亮康建韩雅玲
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- M6P/IGF2R11-15结构域介导了CREG对VSMC的生物学功能
- 2011年
- 目的本室前期研究提示M6P/IGF2R参与了CREG生物学效应的调控。本研究将着重阐明M6P/IGF2R各结构域在介导CREG对VSMC生物学功能中的作用,以及CREG蛋白分子中糖基化结构对其生物学效应的影响。方法 (1)构建真核表达载体,利用NTA-Ni柱亲和层析方法制备获得野生型wtCREG和去糖基化型mCREG蛋白,糖酐酶切和Western鉴定;(2)观察wt/mCREG蛋白对VSMC增殖、迁移、分化的影响;应用抗体阻断实验、免疫荧光双染色和免疫共沉淀法分析CREG蛋白是否与M6P/IGF2R直接结合;(3)构建原核表达载体,制备获得M6P/IGF2R结构域蛋白。Ellisa分析M6P/IGF2R各结构域与wt/mCREG的亲和力。应用竞争结合实验分析各结构域介导wt/mCREG蛋白生物学功能。结果 (1)wtCREG是糖基化蛋白,糖酐酶切后分子量由30KD变为25KD,而mCREG为去糖基化蛋白,糖酐酶切后分子量无变化,为25KD;(2)wt/mCREG蛋白均抑制VSMC迁移、增殖和分泌细胞外基质,促进其分化;wtCREG效应强于mCREG:wt/mCREG蛋白与M6P/IGF2R存在直接结合。(3)wtCREG蛋白与M6P/IGF2R7～10、11～15结构域具有高结合力,mCREG蛋白与11～15结构域存在高亲和力。wtCREG与第7～10结构域结合可以被M6P阻断。第11～15结构域片段阻断wtCREG和mCREG生物学效应,第7～10结构域仅阻断wtCREG蛋白的生物学效应。结论 CREG通过细胞膜表面M6P/IGF2R蛋白抑制VSMC的增殖、迁移、分泌细胞外基质,促进其分化。其作用与其分子中糖基化结构无关,糖基化可以增强CREG的生物学功能,M6P/IGF2R第11～15号结构域是CREG功能结构域。
- 栾波韩雅玲郭鹏闫承慧郭亮康建
- 关键词：功能结构域生物学功能生物学效应去糖基化酶切
- 重组分泌型人CREG/myc-His融合糖蛋白的表达及功能分析
- 目的构建人E1A激活基因阻遏子（human cellularrepressor of E1A-stimulated gene,hCREG）基因的真核表达载体并转染人293F细胞株,筛选稳定转染细胞克隆,鉴定重组的分泌型h...
- 韩雅玲孙鸣宇郭亮郭鹏栾波康建闫承慧
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- M6P/IGF2R受体介导糖基化突变的重组E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞分化
- 目的探讨介导人E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)蛋白诱导和维持血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的受体分子及生物学的机制。方法(1)构建野...
- 栾波韩雅玲孙鸣宇郭鹏陶杰邓捷
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- 小鼠E1A激活基因阻遏子RNA干扰表达载体的构建及鉴定
- 目的构建小鼠E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of ElA-stimulated gene,CREG)小分子干扰RNA(RNA interference,RNAi)真核表达载体,下调小鼠细胞中C...
- 郭鹏闫承慧郭亮康建韩雅玲
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