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不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养被引量：4: 2003年; 目的 :对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞 (PGC)进行定位并比较其体外培养的差异。方法 :取 4～ 7周发育阶段的人胚胎 ,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶 (AP)以对其定位。体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养 ,第 1次传代后 ,用AP标记 ,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较。结果 :在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞 ,阳性信号位于胞质内。阳性细胞散在分布 ,在生殖嵴处聚集成团。不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现。统计学分析结果表明 ,4～ 7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P >0 .0 5 ) ;由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异。结论 :人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处。 4～ 7周发育阶段。; 刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏蒋正戚中田冯根生; 关键词：胚胎原始生殖细胞体外培养碱性磷酸酶组织化学法

人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)被引量：2: 2003年; 目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。; 刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇; 关键词：OCT4 克隆基因克隆基因表达

人胚胎生殖系细胞分离与体外培养的初步研究被引量：10: 2003年; 目的 :初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养。方法 :体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织 ,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为 5种不同的方式培养后 ,用碱性磷酸酶标记 ,计数阳性克隆并进行比较。结果 :酶消化法培养所获得的克隆较单纯机械分离方法多 ,原代培养时种植到饲养层上效果较好。将分离到的组织用0 .2 5 %胰酶消化 3min ,种植到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞上培养 3d ,挑取克隆传代 ,在第 1 0天形成 30 .7个阳性克隆 ,显著高于其他方法获得的阳性克隆数。用碱性磷酸酶标记的细胞 (克隆 )具有多样性 ,细胞胞体为圆形 ,分为有突起和无突起两种 ;阳性细胞克隆呈圆球形、条带形和块形 ,与周围细胞分界清楚。结论 :人胚胎体内的微环境限制生殖系细胞的体外扩增培养。; 刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏熊俊蒋正戚中田; 关键词：胚胎细胞分离体外培养碱性磷酸酶

人胚胎原始生殖细胞的定位与体外分离培养的初步研究: 2004年; 目的：对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞进行定位并比较其体外培养的差异，探讨不同分离方法对人胚胎生殖系细胞体外培养的影响。方法：取4～8周发育阶段的人胚胎，利用组织化学法通过检测原始生殖细胞内碱性磷酸酶及其定位。体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织培养，第一次传代后，用碱性磷酸酶标记。; 刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏蒋正戚中田冯根生; 关键词：原始生殖细胞体外分离组织化学法生殖系胎生

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蒋正