秦刚
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院“百人计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 检测SortaseA酶催化蛋白质连接效率的新型报道系统被引量：1
- 2014年
- 利用分子进化技术对Sortase A酶的催化活性进行定向改造已经成为当前的研究热点和重点,为了高效筛选特定催化活性的Sortase A酶突变体,需要建立一种能够快速准确鉴定Sortase A酶活性的方法。为此,设计了由GFP-LPETG蛋白和GGGYK-Biotin组成的新型报道底物系统。利用重组基因工程技术,成功制备GFP-LPETG蛋白,野生型Sortase A酶及近期报道的一个高活性突变型Sortase A酶。以GFP-LPETG及GGGYK-Biotin为报道底物建立连接体系,结果显示,连接反应动力学可直接通过SDS-PAGE凝胶电泳法精确测定。用此连接体系比较野生型与突变型Sortase A酶催化的连接反应效率,证实高活性突变酶具有野生酶无法比拟的高催化活性。此报道系统简单快速灵敏,可应用于系统的筛选,为后续进一步定向优化Sortase A酶奠定了基础。
- 李健王鹏举崔云凤邹培建秦刚
- 肽类或蛋白质类药物体内稳定性控制策略被引量：6
- 2013年
- 肽类或蛋白质类药物具有生物活性和特异性较高、可溶性强、低毒性等优点,现已成为药物研发的热点领域;然而,肽类或蛋白质类药物由于消化系统和血液中蛋白酶的快速降解以及体内肾脏的快速清除,体内半衰期一般较短,严重限制了药效作用的发挥。为了延长肽类或蛋白质类药物的体内半衰期,改善其药代动力学和药效学特征,各药物研发机构已进行大量研究,并成功开发多种化学修饰或基因工程改造方法。该文将主要从提高对酶的稳定性、增大流体力学体积和FcRn介导的pH依赖的再生等方面探讨延长肽类或蛋白质类药物半衰期的策略,并对成功的药物研发实例进行归纳汇总。
- 谭焕波邹培建秦刚
- 关键词：半衰期FCRN
- 去泛素酶复合体Ubp3/Bre5的制备及与Cdc48作用（英文）
- 2015年
- 泛素化是一种存在于真核细胞中与生理功能密切相关的蛋白修饰,泛素化与去泛素化处于动态调节过程中.Ubp3是与人USP10同源的酵母去泛素化酶,结合辅引子Bre5在细胞内发挥广泛作用.为研究该复合体的工作机制,制备重组蛋白复合体,在大肠杆菌中成功表达并纯化重组Ubp3与Bre5单体及Ubp3/Bre5复合体,首次成功大规模制备重组Ubp3/Bre5复合体.通过一系列pulldown实验,检验Ubp3/Bre5与AAA家族中泛素选择性ATP酶Cdc48的相互作用模式,结果发现,Ubp3及Bre5无法单独与Cdc48结合,但Ubp3/Bre5复合体可以有效与Cdc48相互作用.提出了Ubp3/Bre5-Cdc48相互作用的新模式,制备了高质量重组Ubp3/Bre5复合体.该研究为通过生化及结构生物学进行分子机制探索奠定了基础.
- 苏文成吕操时丽丽景晓飞盖园明张洁谭焕波王鹏举夏立新邹培建秦刚
- 关键词：结合蛋白质
