沈孝宙
- 作品数：35 被引量：125H指数：6
- 供职机构：中国科学院动物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划美国洛克菲勒基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 转基因动物的研究及其发展被引量：6
- 1989年
- 最近10年来,蒋外源基因导入动物体内已成为一项重要的基因工程技术,为众多的生物医学领域的研究实验室所采用,获得了许多有价值的研究成果,同时也引起了许多生物工程公司的广泛兴趣,进行了开发研究,成为商业上的热点。以下就动物基因转移的方法学、转基因的表达、遗传规律以及应用和立法等问题作一些简要的介绍与评价。 1.转基因的概念;借助基因工程技术将确定的外源基因通过生殖细胞或早期胚胎导入动物个体的染色体上,这个过程称“transgenesis”。一般译作“转基因作用”。
- 沈孝宙
- 关键词：转基因动物基因工程
- 哺乳动物细胞表达系统被引量：2
- 1991年
- (一)重要性在基因工程领域,哺乳动物细胞表达系统日益受到人们重视。许多重要的具医疗价值的蛋白在大肠杆菌表达系统中无生物活性或活性很低。这是由于在此系统中许多真核蛋白不能完成转译后修饰,如糖基化、酰胺化、二硫键的正确连接和亚基的正确装配。而在哺乳动物细胞表达系统中,这些转译后修饰过程能正常进行,产生与天然蛋白完全相同的分子。因此,哺乳动物细胞表达系统正在逐渐形成产业。在理论研究上,哺乳动物细胞表达系统也十分重要,它是研究真核基因调控的必不可少的模型。这个系统不仅对检验基因的同域作用(cis-acting)序列(如启动子)非常有用,而且对研究跨域作用因子(如一些调控蛋白)也极有价值。
- 沈孝宙
- 关键词：哺乳动物细胞
- 绵羊SRY基因的分子克隆及序列分析被引量：11
- 1994年
- 本研究利用常规方法提取绵羊基因组ＤＮＡ，根据人的ＳＲＹ基因核心序列设计合成了一对引物Ｐ１、Ｐ２。用ＰＣＲ技术对公、母绵羊基因组ＤＮＡ进行体外扩增，将所扩增出的公绵羊特异性ＳＲＹ基因片段重组到质粒ＤＮＡｐＵＣ１９的ＳｍａＩ部位并转化到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０Ｂ中。挑选阳性克隆进行微溶分析，并用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ酶解。鉴定结果表明，插入片段长度与ＰＣＲ扩增带相符，约２０３ｂｐ。用Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧末端终止法测定绵羊ＳＲＹ基因核心序列的部分序列，结果表明，用ＰＣＲ分离并重组到质粒载体中的绵羊ＳＲＹ基因核心序列部分序列长度为２０３ｂｐ，这与设计完全相符。其中该序列的１５５个ｂｐ与人的ＳＲＹ基因相应序列的同源性为８２．５８％（１２８／１５５）。可见哺乳动物ＳＲＹ基因的核心序列具有高度保守性，种间差异很小。
- 葛宝生许罕华周鼎年朱裕鼎高军刘冬梅沈孝宙
- 关键词：绵羊SRY分子克隆DNA序列测定
- hCGβ真核表达载体的构建和瞬时表达筛选
- 2002年
- 为探讨人绒毛膜促性腺激素 β亚基 (hCGβ)基因避孕疫苗的可能性。利用DNA重组技术将hCGβ的基因片段连接到真核表达载体pCMV4上 ,酶切分析鉴定正确构建了质粒DNApCMV4 -hCGβ。将质粒DNApCMV4 -hCGβ通过脂质体转染的方法导入体外培养的Hela细胞 ,双抗夹心ELISA法检测质粒DNApCMV4 -hCGβ在Hela细胞瞬时表达系统中特异性的表达了hCGβ。结果表明hCGβ表达含量 2 4h为 6 78ng/ml,4 8h为 1 5 2 4ng/ml,说明在体外瞬时表达了特异性hCGβ的pCMV4 -hCGβ真核表达载体能够作为DNA疫苗使用 ,为pCMV4 -hCGβ质粒DNA免疫小鼠进行DNA避孕疫苗的研究奠定了基础。
- 张富春王妮陈幼珍沈孝宙曹咏清王宾
- 关键词：HCGΒ真核表达载体
- 转基因禽类生物反应器及利用其生产重组蛋白或多肽的方法
- 本发明涉及一种转基因禽类生物反应器及利用该生物反应器生产重组蛋白或多肽的方法，更具体地，本发明所涉及的转基因禽类生物反应器为转基因禽类输卵管，另外本发明还涉及专门在禽类输卵管特异表达和分泌的基因表达载体。本发明的特点是所...
- 沈孝宙粱志清李建凡王小珂杨绍清许罕华陈雪秀王瑛
- 文献传递
- BGH转基因小鼠的建立及其特性研究
- 1993年
- 把小鼠的金属疏基组氨酸三甲内盐基因(MT-I)的启动子与牛生长激素(bGH)基因组DNA重组,再以紧邻(pSVCATLBGH)和相差2.3kb的距离(pSV2LBGH)两种形式与猴空泡病毒(SV40)的增强子融合;还有一种是把免疫球蛋白的启动子和增强子与不含内含子的牛生长激素基因融合(pSLBlll).把上述3种结构的重组子显微注射到ICR、昆明白(KB)和C57BL 3种品系供体鼠受精卵中,接着移植到昆明白假孕受体鼠的输卵管,其培育出116只F_0代鼠和13只死胎,经Southern Blot检测,其中27只(pSV2LBGH:ICR 5只;KB7只;pSVCATLBGH:ICR5只;KB8只;C57BL 2只)鼠的基因组中整合有bGH基因;另由pSLBlll重组子做外源基因导入受精卵所得到的13只不同发育阶段的死胎中有9只整合有pSLBlll重组子.对27只阳性鼠于出生后30d开始在饮水中加75mmol/L ZnSO_4进行诱导.结果表明,3种结构形式的bGH基因重组子均以头尾相连的串联体形式,以单点整合于鼠染色体中;所育成的27只bGH转基因鼠有18只不同程度表达了bGH;表达水平与整合的bGH基因拷贝数成正比,其中在肝脏有较高表达的4只鼠呈现明显的促生长效应,它们比正常鼠大0.8～1.2倍,促生长效应与鼠体内bGH的表达水平无对应关系;另外14只表达了bGH的小鼠与正常小鼠大小类似.所有18只小鼠bGH的表达水平均受Zn^(2+)和Cd^(2+)?
- 李宝林苏成芝崔青山殷震陈苏民沈孝宙
- 关键词：生长激素转基因小鼠
- 基因工程树的现状、生态风险与对策被引量：11
- 2002年
- 应用基因工程技术改良树种 ,具有巨大的经济潜力和社会效益。林业生物工程将可能是继农业生物工程之后又一个热潮。目前 ,无论是阔叶树种还是针叶树种的转基因都已获得成功 ,已有几十种转基因树在北美、欧亚大陆、澳洲和非洲释放到野外进行田间试验。尽管当前转基因树木尚未大面积推广种植 ,人们却已对其生态安全性展开了广泛的争论。这是因为转基因树木可能是迄今所有转基因生物中最具生态风险的种类。其主要的生态风险表现在对周围环境中野生树种可能造成基因污染以及转基因树种作为一类新的外来种入侵 ,威胁现今已十分脆弱的地球森林生态系统。一些研究转基因树木的主要国家和实验室已开始注意到应从基因水平上采取防范对策 ,趋利避害 ,以防止或减少转基因树木对自然环境造成不可逆转的污染和破坏。
- 沈孝宙钱迎倩张树庸
- 关键词：基因工程生态风险生态安全树种改良
- 哺乳动物细胞中基因工程人生长激素的提纯和性质研究
- 1992年
- 在哺乳动物细胞中克隆表达的人生长激素,经等电点和乙醇沉淀后,再用亲和层析法,获得产品。经对该产品的各项生化指标分析鉴定和活力测定,所得结果都与天然人生长激素相符合,证明其性质相同。
- 李建民翟兰敏李建萍杨启伦马宝全沈孝宙杨卫民彭红
- 关键词：基因克隆人生长激素哺乳动物
- 转基因禽类生物反应器及利用其生产重组蛋白或多肽的方法
- 本发明涉及一种转基因禽类生物反应器及利用该生物反应器生产重组蛋白或多肽的方法,更具体地,本发明所涉及的转基因禽类生物反应器为转基因禽类输卵管,另外本发明还涉及专门在禽类输卵管特异表达和分泌的基因表达载体。本发明的特点是所...
- 沈孝宙粱志清李建凡王小珂杨绍清许罕华陈雪秀王瑛
- 文献传递
- 转基因禽蛋——新一代基因工程生物反应器被引量：5
- 2003年
- 利用转基因禽蛋作为生物反应器生产重组蛋白可能是未来基因工程最佳的表达系统之一 ,具有重要的经济价值 ,已引起越来越多的公司和研究人员的重视。由于禽类转基因的困难 ,尽管多年来人们在这个领域作过不懈的努力 ,但至今在其商业化进程方面仍未见有重要的突破。对该领域的研究进展和动向作出简要的评述。
- 王小珂张卉沈孝宙李建凡陈英庄延
- 关键词：禽蛋生物反应器
