杨红霞
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北医科大学第四医院更多>>
- 发文基金：河北省普通高等学校强势特色学科基金河北省科学技术研究与发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CtBP1基因siRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定
- 目的构建CtBP1基因RNA干扰(RNAi)的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+),初步鉴定其干扰效果。方法以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBan...
- 艾军杨红霞李巧霞
- 关键词：RNA干扰真核表达载体转染
- 文献传递
- RNA干扰CtBP1基因真核表达载体的构建与鉴定
- 目的构建CtBP1基因RNA干扰(RNAi)的真核表达载体。方法以CtBP1基因为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则...
- 杨红霞艾军李巧霞单保恩
- 关键词：RNA干扰真核表达载体转染
- 文献传递
- CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的：构建C-末端结合蛋白-1（CtBP1）基因RNA干扰（RNAi）的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,初步鉴定其干扰效果。方法：以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,选择设计两条siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因、卡那霉素（Kanr）抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中,构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。确认载体构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计数转染细胞数,计算转染效率,RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果。结果：构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA（pGenesil-1-CtBP1-shRNA）,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞表达绿色荧光蛋白（EGFP）,证实重组质粒己转染入细胞,转染效率达到60%-70%;RT-PCR结果显示B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞中CtBP1基因被特异抑制,基因表达抑制率达40%以上,与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体,可以有效抑制B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞上CtBP1基因表达。为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础。
- 杨红霞艾军李巧霞单保恩
- 关键词：RNA干扰真核表达载体转染
- CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定
- ＜正＞目的本实验作为前期摸索实验,旨在验证利用RNAi技术,针对CtBP1基因干扰人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR+/+）的CtBP1基因表达是否有效,以期从中选择最有效的小干扰RNA为
- 杨红霞艾军李巧霞单保恩
- 关键词：RNA干扰真核表达载体转染
- 文献传递
- 沉默CtBP1基因逆转人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)多药耐药
- ＜正＞目的探讨shRNA干扰CtBP1基因表达是否逆转MDR1基因介导的人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR+/+）多药耐药。方法采用脂质体介导的质粒转染法,将以人CtBP1基因为靶基
- 杨红霞艾军李巧霞单保恩
- 关键词：多药耐药MDR1基因P-GP
- 文献传递
- 沉默CtBP1基因逆转人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR^(+/+))的多药耐药性被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨短发夹式RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰羧基末端结合蛋白1(C-terminal-binding proteins 1,CtBP1)基因表达是否可以逆转多药耐药基因1(multidrug resistant gene 1,MDR1)介导的人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性。方法:采用脂质体转染法将特异性的shRNA1和shRNA2及非特异性的shRNAHK质粒转染入人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中,RT-PCR法检测各组细胞MDR1基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,MTT法测定各组细胞对多柔比星的敏感性变化。结果:RT-PCR结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞中MDR1基因被抑制,基因表达抑制率约50%;Western印迹结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞P-gp蛋白的表达水平显著降低;MTT检测发现,shRNA转染48和72h时shRNA1组和shRNA2组细胞对多柔比星的敏感性增加(P<0.01)。结论:沉默CtBP1基因可抑制人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,降低细胞的耐药性。
- 杨红霞艾军李巧霞单保恩
