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杨兴武: 作品数：35 被引量：104H指数：7; 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>; 发文基金：河南省科技攻关计划河南省基础与前沿技术研究计划项目河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程建筑科学更多>>

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猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与遗传进化分析被引量：13: 2016年; 为了解近几年河南地区猪圆环病毒2型（PCV2）的遗传进化情况,本研究对采自2011年-2015年河南省13个地区的28份疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）猪的病料样品进行PCR检测,并将检出的阳性病料样品接种无PCV的PK-15细胞,分离PCV2,进而用IPMA进行鉴定。最后对所获分离株进行全基因组克隆和序列分析。结果显示,28份样品中阳性率为75%（21/28）,并成功分离出21株PCV2,其全基因序列同源性为95.4%-99.9%;在遗传演化关系上,21株PCV2分离株分布于两个基因型（PCV2b和PCV2d）,16株属于PCV2d,而其余5株属于PCV2b基因型,这也说明PCV2d逐渐成为河南地区的优势流行株。此外,通过对其Cap蛋白氨基酸序列的预测与分析,发现其主要抗原区存在12处位点明显变异,这可能影响其抗原性及免疫原性。本研究为河南地区PCV2的防控提供了依据。; 徐朋丽张宇韩昊莹乔涵杨兴武郭官鹏王晓星刘起涛陈红英; 关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征

猪博卡病毒1/2型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 2016年; 为了建立一种快速和高通量检测猪博卡病毒(PBoV)的方法,本研究根据GenBank中登录的PBoV 1/2型NS1基因高度同源保守序列设计并合成一对特异性引物,建立了检测PBoV1/2的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。结果表明,该方法对常见的其它病毒均未检测到荧光信号,而仅对PBoV1/2检测为阳性;其灵敏度为45拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;组内和组间变异系数均小于5%。本实验建立的荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,为PBoV的早期诊断和定量分析PBoV感染程度提供参考。; 乔涵李辉张宇付朋飞徐朋丽杨兴武韩昊莹杨明凡陈红英; 关键词：SYBR PCR

2015年河南地区禽腺病毒4型Hexon基因遗传进化分析: 张宇陈红英乔涵杨兴武韩昊颖张鸿鑫

一种猪伪狂犬病毒株: 本发明公开了一种猪伪狂犬病毒株，其特征在于：猪伪狂犬病毒（Herpesviridae）毒株，CCTCC NO：V201314。本发明将PRV/HN2012株传至第7代，并对第7代病毒进行了病毒滴度TCID<Sub>50<...; 陈红英杨明凡高晓云崔保安杨兴武张宇徐朋丽; 文献传递

共表达PCV2 ORF2和猪IL-18基因的重组猪伪狂犬病毒对小鼠的免疫原性被引量：2: 2016年; 【目的】研制猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二联活疫苗,并用猪IL-18作为免疫佐剂。【方法】将猪IL-18基因插入到质粒p GO中,获得的重组转移质粒p GO18与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染ST细胞,并进行空斑筛选和纯化;RT-PCR和Western blot分别从转录和蛋白水平鉴定其表达情况。将重组病毒PGO18和PGO、PRV弱毒株HB98、PCV2灭活商品苗和1640细胞培养基分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后二次免疫,二免后4周用PCV2 DF强毒和PRV Min/A强毒接种小鼠。通过ELISA、血清中和试验和流式细胞术及攻毒保护试验评价重组病毒的免疫原性。【结果】获得了重组病毒PGO18,并且可在ST细胞内表达;PGO18可诱导小鼠机体产生PCV2的ELISA和PRV的中和抗体水平,刺激CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的增殖,且能有效抵抗PCV2和PRV强毒攻击。【结论】IL-18基因可增强重组病毒的免疫效果,使重组病毒具有良好的免疫原性,有望成为防治PCV2和PRV的候选疫苗株。; 郭晓庆朱前磊潘鑫龙杨兴武乔涵王淑娟陈红英; 关键词：PCV2 ORF2 重组伪狂犬病毒免疫效力

猪圆环病毒2型与猪支原体混合感染的诊断: 2015年; 2015年1月,河南某地猪场60日龄仔猪出现腹泻、呼吸困难并伴有后肢端坐状咳嗽为主要特征的疾病。PCR检测PCV2和MH均为阳性,结合发病情况、临床症状和剖检变化,诊断为猪圆环病毒2型与猪支原体混合感染。; 杨兴武焦显芹潘鑫龙张宇耕乔涵陈红英; 关键词：猪圆环病毒2型肺炎支原体

表达猪细小病毒VP2蛋白的重组猪伪狂犬病毒在小鼠体内的免疫反应被引量：10: 2016年; 为了研制出能够同时预防猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的二联活疫苗,本研究将PPV VP2基因克隆到伪狂犬病毒通用转移质粒pG中,构建重组伪狂犬转移质粒pGVP2。利用脂质体转染法将重组质粒pGVP2和PRV HB98弱毒株DNA共转染至猪睾丸(ST)细胞,使其在ST细胞内发生同源重组,经5次绿色荧光空斑纯化重组病毒rPRV-VP2。分别用重组病毒rPRV-VP2、亲本PRV HB98弱毒株、商品化PPV灭活苗和DMEM细胞培养液免疫6周龄雌性昆明小鼠,2周后进行二免。一免后第7周用PRV强毒NY株对小鼠进行攻毒。结果获得表达VP2基因的重组病毒rPRV-VP2,经ELISA试验、血清中和试验(SN)、血凝抑制试验(HI)和流式细胞检测发现,重组病毒rPRV-VP2株可有效刺激小鼠机体产生抗PPV和PRV抗体,同时具有增强小鼠机体细胞免疫反应的能力,且对PRV强毒攻击具有保护作用。结果表明,重组病毒rPRV-VP2可作为同时预防PPV和PRV感染的重组疫苗候选株。; 付朋飞潘鑫龙乔涵杨兴武朱前磊郭晓庆张宇陈红英; 关键词：猪细小病毒猪伪狂犬病毒 VP2蛋白重组病毒免疫效力

表达猪细小病毒VP2蛋白的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株的生物学特性被引量：8: 2017年; 探索重组PPV VP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究,并初步探索对小鼠安全性。结果显示:重组病毒rPRV-VP2株在VERO、ST、PK-15和IPEC细胞上的TCID50分别为104.375/0.1mL、106.5/0.1mL、103.75/0.1mL、105.625/0.1mL。重组毒与亲本毒PRV HB-98株在ST细胞中的毒力(106.125 TCID50/0.1mL)和细胞病变相当,重组病毒保持了PRV病毒的通性。连续传毒20代后的绿色荧光观察、RTPCR、Western blot试验结果均表明重组病毒中的VP2基因得到了有效表达,且遗传稳定性良好。安全性试验结果显示:重组毒对小鼠安全。本试验为后期对PPV VP2基因重组猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的开发利用奠定了基础。; 付朋飞乔涵张宇杨兴武徐朋丽陈红英; 关键词：猪细小病毒 VP2基因 PRV 生物学特性

重组猪细小病毒VP2基因的猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的构建及纯化被引量：2: 2016年; 参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本实验室构建的含绿色荧光蛋白标记基因的伪狂犬病毒(PRV)通用转移质粒pG和构建好的pMD-VP2质粒,用BamHⅠ对质粒pG和pMD-VP2进行酶切,然后用CIAP对酶切产物进行去磷酸化处理,纯化回收后将VP2基因插入pG质粒中获得重组伪狂犬病毒转移质粒pGVP2。用脂质体转染法将PRV HB-98株全基因组与质粒pGVP2共转染ST细胞,得到携带有PPV VP2外源抗原基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组伪狂犬病毒rPRV-VP2株。结合VP2基因PCR扩增和绿色荧光观察,经5轮病毒空斑纯化得到了纯化的重组病毒rPRV-VP2株。; 付朋飞乔涵杨兴武张宇王林青郭晓庆潘鑫龙陈红英; 关键词：PRV 猪细小病毒 VP2基因

鸡IL-18基因重组干酪乳酸杆菌及其分泌表达: 引言鸡白细胞介素-18 （IL-18）是一种由巨噬细胞产生且能增强机体细胞免疫的新型细胞因子,同时研究表明其在免疫佐剂及免疫增强剂方面潜力极大。而干酪乳酸杆菌作为一类益生菌,具有调节肠道微生态平衡、提高机体免疫的功能,其...; 徐朋丽陈红英杨兴武张宇乔涵韩昊莹张鸿鑫; 关键词：分泌表达基因重组 IL-18

杨兴武

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