李长江
- 作品数：13 被引量：65H指数：5
- 供职机构：北京林业大学林学院森林培育与保护教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 青杄PSAK的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2012年
- 目的:获取青杄的PSAK全长cDNA序列,对其进行生物信息学分析,并鉴定其在青杄各组织中相对表达量。方法:以多年生青杄(Picea wilsonii)的cDNA文库为模板,通过RACE PCR的方法获取PSAK的末端序列,经过与EST序列拼接得到PSAK基因的cDNA全长序列。通过特异引物将其克隆在pEASY-T1载体上,基于其氨基酸序列,利用DNAMAN、ExPASy、SWISS-MODEL等工具对其进行生物信息学分析,进行了半定量RT-PCR与RT-qPCR实验来检测其在mRNA水平的组织表达情况。结果:青杄PSAK基因编码140个氨基酸,蛋白分子量为14.23kDa,理论等电点为10.29。蛋白的C端有较为保守的结构域,与拟南芥、烟草等物种具有较高的相似性。PwPSAK主要在青杄的针叶与茎中进行表达。结论:成功获取了PwPSAK的单克隆并进行了生物信息学分析,为青杄中PSAK后续的功能研究提供理论依据。
- 李长江曹一博张凌云
- 关键词：RACE克隆生物信息学RT-PCR
- 青杄PsbO基因cDNA序列克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2012年
- 利用RACE技术从已有的青杄均一化cDNA文库中克隆得到青杄(Picea wilsonii)PsbO基因cDNA的全长,并用生物信息学的方法对该cDNA的核苷酸序列、氨基酸序列的相似性,及编码蛋白PwPsbO的理化性质、亲水性/疏水性、二级和三级结构,PwPsbO基因进化树等进行了预测和分析.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,测定了青杄不同组织中的PsbO基因的相对表达水平.结果发现:青杄PsbO基因编码346个氨基酸,预测相对分子质量为36.6 kD,理论pI值为5.29,属于可溶性蛋白.二级和三级结构预测表明其含有较多的α螺旋、β折叠和随机卷曲结构.RT-qPCR发现该基因在青杄针叶和茎中表达量最高.这些结果为青杄中PsbO基因的初步功能研究奠定了基础.
- 刘亚静李长江孙帆张凌云
- 关键词：RACE生物信息学
- 拟南芥转录因子NF-YC的原核表达及多克隆抗体制备被引量：7
- 2012年
- 采用PCR方法扩增NF-YC基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET-48b中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导出分子量约为45 kD的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,纯化后的目的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA检测抗体效价大于1 62 500,Western blotting结果显示,该抗体可特异性识别NF-YC蛋白。
- 卫静李长江刘亚静黄桂雪张凌云
- 关键词：拟南芥转录因子原核表达多克隆抗体
- 抗裂与易裂枣内源激素含量和细胞壁代谢相关酶活性比较被引量：30
- 2014年
- 以枣抗裂果品种‘圆铃枣’和易裂果品种‘俊枣’为材料,测定了果实生长发育曲线、果形指数及种子败育率,并对果皮、果肉、种子中内源激素含量及果皮、果肉中细胞壁代谢相关酶的活性进行了检测。结果表明,‘俊枣’果形指数和种子败育率均显著高于‘圆铃枣’。果实发育后期‘俊枣’果皮中的GA3含量、果肉中的IAA含量明显高于‘圆铃枣’,而‘圆铃枣’果肉及种子中的ABA含量高于‘俊枣’;‘俊枣’果肉及种子中(GA3+IAA+ZT)/ABA的比值在整个果实生长发育期均高于‘圆铃枣’。果实生长发育后期‘俊枣’果皮中的果胶酶及纤维素酶活性高于‘圆铃枣’,且‘俊枣’果肉中的POD及PPO活性也较高。以上结果显示,枣果实生长发育后期易裂品种‘俊枣’果肉中的IAA积累较多,而抗裂品种‘圆铃枣’果肉及种子中ABA含量显著高于易裂品种;易裂品种‘俊枣’果肉及种子中(GA3+IAA+ZT)/ABA的比值较高,果皮中的果胶酶、纤维素酶活性影响裂果的发生,其POD及PPO活性相对较高。
- 曹一博李长江孙帆张凌云
- 关键词：裂果内源激素酶活性
- 青杄FKBP23的克隆与组织特异性分析
- FKBP (FK506 binding protein)家族是一类免疫球蛋白,能特异与免疫抑制剂FK506结合。其家族普遍含有脯氨酸顺反异构酶活性(prolyl-isomerase activity),与亲环素(cycl...
- 李长江孙帆张凌云
- 关键词：克隆RT-PCR组织特异表达
- 青杆PwUSP1基因的克隆及表达模式分析被引量：2
- 2014年
- 广泛逆境胁迫蛋白(universal stress protein,USP)在非生物胁迫响应中起重要作用,但在植物中其功能还大部分未知。本研究通过BLAST分析青杆EST文库,得到USP基因的EST序列,通过RACE PCR方法获取USP基因的末端序列,经过与EST序列拼接得到USP基因的cDNA全长序列,命名为PwUSP1。分析发现PwUSP1全长cDNA为1 167 bp,编码区为519bp,编码172个氨基酸残基。生物信息学分析显示,PwUSP1编码的蛋白相对分子质量为19.07 kDa,理论等电点为6.38,为非跨膜的亲水性蛋白。PwUSP1具有USP家族典型的UspA结构域和ATP结合位点G-(2X)-G-(9X)-G(S/T)。半定量RT-PCR与RT-qPCR分析表明,PwUSP1在青杆的根、茎、针叶、花粉、种子中均有表达,在根和花粉中表达量较高。同时,PwUSP1受干旱和盐胁迫的诱导表达上调,均在处理6 h后表达量较高,推测该基因可能在青杆逆境胁迫响应中发挥作用。
- 崔晓燕李长江孙帆张世宏张凌云
- 关键词：青杆生物信息学分析胁迫响应
- 青杄PwPSAF基因的克隆与组织表达分析被引量：5
- 2013年
- PSAF是绿色植物光系统Ⅰ反应中心F亚基,在光合作用电子迁移过程中起着重要作用。以青杄cDNA文库为模板,根据PwPSAF的EST序列设计引物,进行5'-RACE和3'-RACE试验,以获得青杄PwPSAF的末端序列,经过与EST序列进行拼接获取青杄PwPSAF的全长cDNA序列。基于其氨基酸序列,利用Expasy tools、DNAMAN、ClustalX和MEGA等工具,进行理化性质、二级结构和三级结构的生物信息学分析。结果表明:PwPSAF是一个由253 aa组成的蛋白质,理论分子量为27.04 kDa,等电点为9.57,预测蛋白有2个跨膜区域,蛋白质的C端具有保守的结构。RT-qPCR试验显示PwPSAF主要在青杄的针叶中表达。在种子萌发过程中吸胀期(0～ 2天)表达量最高,在4天时表达量降低,随着子叶的不断长出,其表达量又逐渐增高。在干旱和盐胁迫下,针叶中的PwPSAF的表达量被大幅下调。研究结果显示PwPSAF在青杄种子萌发及非生物逆境胁迫下的光合过程中起着重要作用。
- 李长江孙帆张通张凌云
- 关键词：生物信息学分析胁迫响应
- 青杄干旱诱导基因PwWDS1的cDNA分离与表达分析被引量：2
- 2014年
- 植物干旱诱导蛋白是植物体在遭遇干旱胁迫或缺水胁迫时被诱导表达或者表达量被上调的一类蛋白,通过直接作用或者调节其他基因的表达来使植物适应干旱逆境（Desclos et al.,2008;Urao et al.,1994）。这类蛋白在功能上分为2类：其一为功能蛋白,在细胞内直接参与保护作用。
- 李长江崔晓燕孙帆张凌云
- 关键词：WDS生物信息学分析胁迫响应
- 一种基于植物cDNA文库的基因全长cDNA的批量分离方法
- 本发明公开了一种从生物中批量分离基因全长cDNA的方法。该方法包括如下步骤：1）提取生物总RNA；2）将总RNA反转录得到双链cDNA，将所述双链cDNA与文库载体连接，连接产物转化受体菌，得到全长cDNA文库；3）将c...
- 张凌云李长江孙帆罗朝兵
- 文献传递
- 青杄MYB转录因子基因PwMYB20的克隆及表达分析被引量：5
- 2017年
- 【目的】MYB转录因子家族是植物中最大的一类转录因子,在植物生长发育及抗逆调控网络中发挥重要作用。对青杄中MYB同源基因Pw MYB20的克隆与分析,有利于进一步探究Pw MYB20在植物生长发育及逆境响应中的功能,挖掘与利用青杄中的优质基因。【方法】采用RACE-PCR技术,从青杄c DNA文库中克隆得到Pw MYB20基因,并通过PCR技术克隆验证。利用Prot Param、Prot Scale、Fold Index等生物信息学软件对Pw MYB20理化性质进行分析预测。通过BLAST在线工具得到植物同源蛋白,并对其进行比对分析和进化树分析。采用实时荧光定量PCR技术分析Pw MYB20基因在不同组织中的表达性,以及干旱、低温、盐、ABA等非生物逆境胁迫处理后的表达变化。通过亚细胞定位及转录激活活性验证试验,揭示其生物学特性。【结果】通过RACE-PCR克隆得到Pw MYB20 c DNA全长966 bp,含675 bp的完整开放阅读框,编码225个氨基酸。Prot Param工具计算蛋白分子式为C1104H1740N340O330S8,分子质量为25.3 k Da,等电点为9.11;Protscale工具疏水性分析发现,Pw MYB20的疏水位点与亲水位点均匀分布,推测该蛋白为亲水蛋白;Signal P工具预测发现该蛋白没有信号肽结构域;利用Fold Index工具对蛋白质固有无序化进行分析,结果表明该蛋白固有无序化序列较多,推测在生理环境下蛋白的动态活性较大;TMHMM工具预测发现该蛋白没有跨膜结构域。通过对比分析发现Pw MYB20属于MYB家族基因,编码1个R2R3-MYB蛋白。进化树分析结果显示,青杄Pw MYB20与白云杉Pg MYB20聚为一簇。实时荧光定量PCR结果表明,Pw MYB20在种子中的表达量最高,其次是在针叶中,在花粉中的表达相对较少。Pw MYB20对干旱、4℃和ABA处理均有响应,而对Na Cl处理响应相对较弱。在干旱处理下,Pw MYB20表达量先上升后下降;4℃低温处理3 h和12 h时Pw MYB20的表达量上升,在4℃处理6 h时存在波动,呈现上升—�
- 游韩莉袁义杭李长江张凌云
- 关键词：MYB转录因子基因克隆胁迫响应基因表达
