李永海
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家攀登计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆被引量：6
- 2001年
- 目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果 对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。
- 李永海苏华何维崔莲仙越智宏伦
- 关键词：DDRT-PCR小鼠胸腺基因克隆
- 小鼠增龄相关性胸腺基因的克隆
- 2001年
- 目的 :用基因差异显示技术研究小鼠胸腺增龄相关基因。方法 :利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析 ,获得差异显示的表达序列标签 (ESTs)。选其 1个 1月龄高表达的EST为探针 ,从小鼠胸腺cDNA文库中筛选出一个 82 7bp的阳性克隆 ,并用PCR扩增延长为 140 6bp的cDNA片段 (mt2 2 140 6 )。结果 :同源性分析结果表明 ,mt2 2 140 6含一编码 438AA的开放阅读框 ,与人延伸因子 1γ(EF1γ)高度同源 ,其Genbank接收号为BE2 410 6 2。结论 :获得一个含完整开放阅读框与小鼠胸腺增龄相关的基因。
- 李永海苏华何维越智宏伦卢兴武崔莲仙
- 关键词：DDRT-PCR小鼠胸腺基因差异表达
- 人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达
- 2001年
- 目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析 ,差异显示的片段经过Northern杂交验证后 ,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选。将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX 5X 1中 ,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL 2 1,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针 ,经 3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为 15 14bp的cDNA克隆 (命名为BC 15 14)。重组的BC 15 14蛋白可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,其表达量约占细菌总蛋白量的 14.3%左右。BC 15 14cDNA的GenBank的登录号为AF30 44 42。结论 获得了 1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E .coliBL 2 1中得到了有效表达。
- 芦兴武殷际义李永海崔莲仙
- 关键词：B淋巴细胞CDNA
