张伟锋
- 作品数：32 被引量：15H指数：3
- 供职机构：陕西师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的新方法
- 本发明公开了一种基于慢病毒表达CRISPR/Cas9高效敲除低转染率细胞的新方法。该方法涉及两种慢病毒，一种是表达sgRNA及Cas9的慢病毒，另一种是表达Cre蛋白的慢病毒。将多基因的sgRNA及Cas9同时克隆至慢病...
- 夏海滨李雅张伟锋朱久玲李燕
- 一种抗肿瘤药物及其在脑胶质瘤治疗中的应用
- 本发明提供了一种抗肿瘤药物及其在脑胶质瘤治疗中的应用，该抗肿瘤药物是将AAV病毒基因组ITR之间序列去除后，插入Nfil3基因敲低元件和HBVc‑PEP3基因表达元件，并将6型腺相关病毒衣壳蛋白VP1编码框的第663位氨...
- 张伟锋赵婧伊柳玲玲李星
- Rescue the failed Half-ZFN by a sensitive mammalian Cell-Based luciferase reporter system
- ZFN technology is a powerful research tool and has been used for genome editing in cells lines,animals and pla...
- 张伟锋夏海滨孟文鹏赵静王顺娟
- 文献传递
- 一种基因打靶系统
- 一种基因打靶系统，由位点特异性切割核酸酶表达载体和打靶载体两部分组成，打靶载体包含2～10个供体DNA片段，每个供体DNA片段的5＇端和3＇端分别插入位点特异性切割核酸酶的识别序列，供体DNA由上游同源臂、下游同源臂和位...
- 夏海滨张伟锋刘思也
- 文献传递
- 快速检测锌指核酸酶介导基因定点整合的方法
- 一种快速检测锌指核酸酶介导基因定点整合的方法，在报告基因的读码框内插入了锌指核酸酶的靶序列，破坏了报告基因的读码框。将携带该报告基因的载体整合到细胞中建立稳定表达该突变的报告基因的细胞系。将表达锌指核酸酶的载体和用于纠正...
- 夏海滨张伟锋
- 锌指蛋白的快速筛选方法
- 一种锌指蛋白的快速筛选方法，通过在线锌指蛋白预测软件预测基因内潜在的锌指蛋白靶序列及相应的锌指，通过重叠聚合酶链式反应获得锌指蛋白库。将锌指蛋白与转录激活结构融合构建嵌合型转录因子，由锌指蛋白靶序列和启动子核心元件组成的...
- 夏海滨张伟锋
- 文献传递
- 携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒及其构建方法和应用
- 一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，缺失E1区和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA。构建方法由构建腺病毒骨架载体、构建携带锌指核酸酶表达元件的腺病毒E3区穿梭载体、构建携带供体DNA的腺病毒...
- 夏海滨张伟锋刘思也
- 文献传递
- 应用CRISPR/Cas9系统构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系被引量：5
- 2016年
- 目的利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系。方法通过单向导RNA(sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或非同源末端连接方式进行修复,以实现对Rev-erbβ基因进行敲入、敲除修饰操作的目的。首先,针对Rev-erbβ基因设计4个sgRNA,经筛选选择活性较高的sgRNA1及sgRNA2用于构建p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2串联载体。然后将p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2和p Ad-E1/hRev-erbβdonor质粒载体共转染至HEK293细胞,通过药物筛选、克隆化及序列测序获得整合有外源供体基因片段的一条链,另一条链为片段缺失的Rev-erbβ基因完全敲除的HEK293(Rev-erbβ-/-)细胞系。最后通过用Western blot法和实时定量PCR对敲除Rev-erbβHEK293细胞系(C3-6)进行检测。结果敲除Rev-erbβ基因的HEK293细胞系中均未检测到Rev-erbβmRNA和蛋白质的表达。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功构建了基因定点修饰和敲除的Rev-erbβ-/-HEK293细胞系,为Rev-erbβ的功能和作用机制研究提供有效工具。
- 陈芳张伟锋赵俊丽杨沛艳马锐夏海滨
- 关键词：293细胞基因敲入基因敲除
- 肿瘤特异嵌合启动子及其构建方法和应用
- 一种肿瘤特异嵌合启动子，由具有核苷酸序列表中NO1所示的碱基序列中1－233位的任何碱基的肿瘤特异启动子Survivin序列与具有核苷酸序列表中NO2所示的碱基序列中1－62位的任何碱基的miniCMV序列组成，其肿瘤特...
- 夏海滨张伟锋王东阳郑晓晶赵俊丽
- 文献传递
- 一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究被引量：2
- 2007年
- 目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白(greenfluo-rescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果:同目前常用的含polIII的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。
- 李慧瑾郑晓晶张伟锋边晔王东阳赵俊丽夏海滨
- 关键词：小干扰RNA基因沉默微小RNA
