尚克刚
- 作品数：41 被引量：342H指数：15
- 供职机构：北京大学生命科学学院细胞生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系被引量：22
- 2000年
- 报道一种新的建立C57BL/ 6J小鼠ES细胞系的方法。采用大鼠心肌条件培养基 ,在不使用饲养层细胞和白血病抑制因子 (LIF)的情况下 ,从C57BL/ 6J品系小鼠中建成 1个ES细胞系即MESPU 4 1,成系率为 1 0 %。MESPU 4 1细胞为XX型 ,核型正常率高达 89% ,表现出XX型ES细胞系少有的稳定性。进行体内分化实验时MESPU 4 1细胞能发生广泛分化形成畸胎瘤。嵌合体制作实验证实MESPU 4 1细胞具有嵌合能力 ,能参与胚胎的发育。采用RT PCR方法 ,检测出大鼠心肌细胞有LIFmRNA的表达 ,这可能与其条件培养基保持ES细胞未分化状态并使X染色体稳定有关。同时 ,还对大鼠心肌细胞进行了永生化的尝试 ,共得到了 4个永生化克隆 ,这将进一步简化ES细胞建系和培养工作 ,为进一步研究ES细胞在体外培养过程中的稳定性开创了新的起点。
- 童英邹冀中尚克刚
- 关键词：ES细胞系小鼠品系
- 小鼠ES细胞种系嵌合体的获得被引量：35
- 1999年
- 种系嵌合体的获得是实现ＥＳ细胞介导的转基因途径的决定步骤。ＥＳ细胞种系分化能力的保持是决定种系嵌合的前提条件，而嵌合体的制作及种系嵌合体的获得则是判定ＥＳ细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法。为考察本室新近建立的３种小鼠ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１、ＭＥＳＰＵ２２和ＭＥＳＰＵ２９的种系分化能力，选用近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及远交系ＫＭＷ和ＩＣＲ为受体胚胎提供者，分别通过囊胚注射法和８细胞期桑椹胚注射法进行了嵌合体构建实验。共获得嵌合体８１只，经毛色分析确定在进行测交的４２只嵌合体中有１９只是种系传递者，为国内小鼠ＥＳ细胞种系嵌合体的首例报道。在所考察的３种ＥＳ细胞系中，ＭＥＳＰＵ２ｌ和ＭＥＳＰＵ２２均能以较高效率获得种系嵌合体，并且多数种系嵌合体（１４／１９）可高效传递ＥＳ细胞来源的毛色性状，确凿证明两细胞系均具有较强的种系分化能力，可作为优良的细胞载体介导小鼠基因组进行的基因改造。
- 陈伟胜韩嵘尚克刚
- 关键词：ES细胞小鼠
- 5个品系小鼠胚胎干细胞系建立的方法学比较(英文)被引量：17
- 2003年
- 以 70 %的大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为培养液 ,以小鼠胚胎成纤维细胞 (PMEF)为饲养层 ,采用添加 1%鸡血清的消化液和“连续离散法”作为小鼠ES细胞建系的改进方法 ,比较了 5个品系小鼠ES细胞系建立的特点。与常规方法相比 ,3个近交系小鼠 12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c的ES细胞建系率分别由 11 8%、3 7%和 2 9%提高到 33 3%、13 3%和 19 4 % ,差异十分显著 ;直接采用改进的方法建立KM和ICR小鼠ES细胞系 ,建系率分别达 12 %和 4 2 1%。讨论了ICM增殖的时间 ,即离散时机对ES集落形成及建系率的影响 ,结果显示 :12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c、KM和ICR小鼠品系ICM适宜的离散时机分别为增殖 4～ 6d、3～ 3 5d、4d、4～ 5d和 4～ 5d ;同时 ,讨论了不同ES细胞建系所需最适宜的消化液浓度 ,其中BALB c小鼠的ES细胞对高浓度的消化液十分敏感 ,0 0 5 %Trypsin 0 0 0 8%EDTA是其比较理想的离散浓度。设计了两种离散方法 ,即“一次离散法”和“连续离散法” ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落 ,结果表明 :后者在建系过程中的作用明显优于前者。RH CM与添加LIF的常规ES细胞培养基相比 ,不但具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型的作用 ,而且明显促进ES细胞的贴壁生长。
- 孟国良汤富酬尚克刚薛友纺
- 关键词：小鼠品系ES细胞系条件培养基
- 兔ES样细胞系的建立及其特性分析被引量：10
- 1997年
- 报道从２３７枚家兔胚胎中建成７个可连续传代的ＥＳ样细胞系。建系条件为，使用小鼠原始胚胎成纤维细胞（ＭＥ）作饲养层，以含１０％胎牛血清和１０％兔血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２为培养基，添加白血病抑制因子（ＬＩＦ）或上皮生长因子（ＥＧＦ），胚龄为９０，９６ｈ。该细胞系的细胞，在许多方面类似于小鼠ＥＳ细胞：具干细胞的形态特征，呈集落型生长，可连续传代并保持其形态特征，具一定的自发分化和诱导分化的能力，悬浮培养可形成简单类胚，但皮下接种同种乳兔未获肿瘤。用所建的兔ＥＳ样细胞进行卵母细胞核移植时。
- 童英刘爱民尚克刚刘林
- 关键词：家兔ES细胞细胞分化核移植
- 转基因动物的基因定位整合被引量：5
- 1991年
- 一导言对哺乳动物基因组进行人为的改造,从而得到人们所期望的具有目的性状的新的种系,这是哺乳动物遗传工程学界长期为之努力的目标。目前,转基因动物的构建工作已取得很大的进展,但是要得到进一步的发展,有待于在两个环节上的突破。 首先,是如何得到基因操作的稳定结果。因为无论采用哪种基因导入方式,人们都无法控制外源DNA在进入受体细胞以后的行为。
- 刘爱民尚克刚
- 关键词：转基因动物
- DNA指纹图在小鼠ES细胞嵌合体鉴定中的应用被引量：3
- 2000年
- 尝试应用多位点DNA指纹技术 ,检测经过胚胎干细胞 (ES细胞 )途径所获得的嵌合体小鼠中ES细胞在各种脏器中的嵌合情况、检测ES细胞在嵌合体小鼠中是否实现种系传递。结果表明 :采用新型的人工合成的寡核苷酸多聚体探针 (JL 0 2探针 )的多位点DNA指纹图谱 ,具有足够的多态性和很好的稳定性。适用于鉴定ES细胞在嵌合体小鼠各种组织器官中的嵌合情况 ,也适用于鉴定ES细胞是否具有种系嵌合能力 ,尤其适用于在嵌合体研究中 ,最适宜的品种组合具有相同的毛色或相同的酶型。
- 汤富酬薛友纺李美琴尚克刚
- 关键词：小鼠DNA指纹图胚胎干细胞嵌合体RFLP分析
- 大鼠心肌条件培养基对形成小鼠ES细胞集落的影响被引量：27
- 1997年
- 报道一种新的从小鼠囊胚中培养和分离出ＥＳ细胞集落的方法。取出生２～３周龄大鼠的心肌组织制备单层培养物，收集６代以内的条件培养基（ＲＨＣＭ）。以ＲＨＣＭ培养Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠的囊胚（无饲养层），对照组以小鼠胚胎原代成纤维细胞（ＭＥ）为饲养层，并补加ＬＩＦ因子。经过１９０个胚的实验证明，以ＲＨＣＭ为培养基培养小鼠囊胚时，胚胎贴壁率、ＩＣＭ增殖率和ＥＳ细胞集落的出现率与对照组没有显著性差异，分别为６７％、９３％和１３％。这种新的方法为简便而有效地建立与培养小鼠ＥＳ细胞系提供了有益的资料。
- 韩嵘柴桂萱尚克刚
- 关键词：心肌条件培养基小鼠胚胎ES细胞
- 转基因动物育种的EK细胞途径被引量：6
- 1989年
- 将外源基因导入动物体中的途径目前主要是使用向受精卵中注射DNA的方法,这是一种可重复的有用的方法,但其成功率很低,外源基因的整合、表达和稳定的筛选工作是在个体水平上进行的,这对许多大家畜来说是难以实现的工作。近年来,经过人们计多年的努力,综合了分子遗传学、发育遗传学和体细胞遗传学的当代成果,一种新的哺乳动物遗传工程的方法日益成熟,这就是转基因动物育种的EK细胞途径。
- 尚克刚
- 关键词：转基因动物育种
- 从早期胚胎多能干细胞生成的嵌合鼠被引量：26
- 1993年
- 本文利用囊胚注射法将小鼠胚胎多能干细胞——CCE细胞注射到发育3天半的昆明和C,_(57)BL/6J小鼠受体囊胚腔内,经假孕鼠借腹怀胎,获3只CCE细胞毛色嵌合鼠。实验共注射胚胎654个,经培养其恢复成活率73.8%,胚胎移植后,假母受孕率及产仔率分别为32.9%和53%。在所获3只嵌合鼠中,2只为CCE-昆明毛色嵌合鼠,1只为CCE-C_5,BL/6J毛色嵌合鼠,这是国内首次利用胚胎多能干细胞获得嵌合鼠。 为检测注入CCE细胞在嵌合鼠内部组织嵌合程度,经磷酸葡萄糖同分异构酶(GPI-1)分析,仅在1只雌性CCE-昆明毛色嵌合鼠心脏中检测到嵌入的CCE细胞。3只嵌合鼠做繁育实验证明均为可育,但在后代中未检测到CCE细胞特征,说明该嵌合鼠没有发生种系嵌合。
- 宋震涛李秋棠尚克刚吴鹤龄
- 关键词：胚胎干细胞胚胎移植嵌合鼠
- 灵芝原生质体的分离及其转化被引量：8
- 2001年
- 对灵芝 (赤芝 )进行了原生质体的形成和再生实验 ,研究了渗透压稳定剂、菌龄、酶解条件对原生质体分离的影响 ,以及渗透压稳定剂、培养基对原生质体再生的影响 ;另外还尝试用电穿孔法在灵芝原生质体中进行报告基因 (reportgene) β- gal的转化 ,结果 β - gal在菌丝体中有表达。
- 张新涛韩春吴立宇薛友纺尚克刚
- 关键词：灵芝原生质体
