周康凤
- 作品数：16 被引量：29H指数：3
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省重大科技专项资金浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肠道病毒71型灭活疫苗滴度的酶联免疫吸附检测方法被引量：5
- 2011年
- 目的 建立肠道病毒71型（EV71）灭活疫苗滴度的检测方法,用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的测定.方法 以兔抗EV71多克隆抗体为包被抗体,小鼠抗EV71单克隆抗体为检测抗体,以夹心ELISA方法测量我们制备的EV71疫苗抗原参照品,建立抗原标准曲线,确定定量限度及最佳定量范围,同时验证该方法的特异性和可重复性.结果 建立了检测EV71抗原含量的夹心ELISA方法,定量限度为3.9352log10TCID50/mL,最佳定量范围为3.9352～5.9686 log10TCID50/mL,相关系数为R2=0.9956;特异性好,除与EV71疫苗样品有反应外,与其他样品无交叉反应;稳定性和重复性好,变异系数小于7%.结论 本研究建立的检测EV71灭活疫苗滴度的夹心ELISA方法灵敏、特异,为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了快捷有效的检测手段.
- 高孟周康凤罗永能姜云水唐彩华陈柯达高丽美朱莲毛子旭毛江森
- 关键词：酶联免疫吸附测定肠道病毒71型灭活疫苗
- 甲醛和β-丙内酯灭活柯萨奇病毒A组16型效果比较被引量：2
- 2015年
- 柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）是人手足口病的主要病原体，尽管多数病毒引起的临床症状较轻，但最近一些研究表明CoxA16也像EV71一样能引发严重的疾病，
- 朱莲朱赟高丽美倪红霞姜云水唐彩华周康凤
- 关键词：甲醛柯萨奇病毒A组16型灭活
- 柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探索柯萨奇病毒A16型（CVA16） YY157株在非洲绿猴肾（Vero）细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变（CPE）,可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.
- 张锋朱莲陈军高孟唐彩华周康凤高丽美罗永能
- 关键词：病毒培养
- 肠道病毒71疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性研究被引量：2
- 2011年
- 目的了解肠道病毒71（E、，71）疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性。方法选取EV71疫苗候选株H3-TY种子库中的6个子代病毒，提取RNA，对其VPl基因进行RT-PCR扩增、克隆、序列测定，然后对所获基因序列进行同源性分析并计算同源率。结果H3．TY的6个子代病毒VPl基因之间核苷酸同源性介于99．6％～99．8％，氨基酸同源性为100．0％，主要抗原决定簇的氨基酸序列完全一致。结论H3．rIIY种子库中6代病毒的VP1基因之间高度同源，主要抗原决定簇稳定遗传。
- 唐彩华周康凤高丽美朱莲毛子旭毛江森
- 关键词：疫苗
- RT-PCR-ELISA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度的初步研究被引量：3
- 2004年
- 目的 应用核酸扩增产物测定的固相杂交酶联显色法 (RT PCR ELISA)检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法 应用RT PCR ELISA ,将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物 ,与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交 ,通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色 ,读取吸光度 (A值 ) ,判断结果。应用此法检测了 11批甲肝活疫苗滴度 ,并与常规细胞培养法(CCID50 )比较。结果 本方法与细胞培养法的敏感性相仿 ,具有简便、快速、特异的优点。结论 RT PCR ELISA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。
- 钱汶陈悦青洪艳唐彩华周康凤庄昉成陈勇
- 关键词：甲肝减毒活疫苗病毒滴度RT-PCR细胞培养法ELISA方法杂交
- 酶联免疫吸附试验和微粒子酶免疫分析法检测血清甲型肝炎总抗体的比较研究被引量：2
- 2007年
- 目的评估酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清甲型肝炎(甲肝)总抗体的检测性能,从而说明两种方法在各自实际应用中的区别。方法用ELISA和MEIA法检测血清甲肝总抗体,再进行两种方法的互相比较。结果检测同一批血清甲肝总抗体样品,定量检测时ELISA法试剂盒敏感度为57.57毫国际单位/毫升(mIU/ml),变异系数(C V)为10.65%,其结果比MEIA法高;两种方法抗体几何平均浓度(GMC)分别为125.8mIU/ml、58.8mIU/ml;定性检测时,41例标本中ELISA法检测39例阳性,MEIA法40例阳性,两法的符合率为97.56%(40/41)。结论定量检测时,MEIA法比ELISA法更精确;定性检测时,ELISA法试剂盒能客观反映疫苗的免疫原性和保护效果,与MEIA法结合能大大提高敏感性。
- 姜立民周康凤陈悦青庄成
- 关键词：酶联免疫吸附试验微粒子酶免疫分析甲型肝炎抗体
- 逆转录-荧光实时定量PCR法快速测定肠道病毒71型病毒滴度
- 2017年
- 目的 建立一种肠道病毒71型（EV71）病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对该检测法进行特异性、重复性验证.结果 所得检测方法可以用于EV71病毒滴度的快速检测.本测定法具有较好的线性,线性范围为lgTCID50 2.61-8.61,相关系数R2为0.9881;特异性和重复性较好,与TCID50法检测之间具有较好的一致性,变异系数（CV）＜5％.结论 所建立的逆转录-荧光实时定量PCR法线性范围广,具有较好的重复性和特异性,可用于EV71样品病毒滴度的快速测定.
- 李剑波吴洁高丽美周康凤毛卓玥高孟庄昉成
- 关键词：逆转录聚合酶链反应肠道病毒71型病毒滴度
- 利用Labworks凝胶成像分析系统判断甲肝减毒活疫苗RT-PCR滴度被引量：1
- 2004年
- 目的 利用Labworks凝胶成像分析系统判断甲肝减毒活疫苗RT PCR滴度 ,并比较此方法与常规组织培养法的相关性。方法 通过对RT PCR反应液的离子浓度、pH值等条件进行优化 ,建立了检测甲肝减毒活疫苗滴度的RT PCR一步法 ;利用Labworks凝胶成像分析系统的半定量功能判断结果 ,并与常规组织培养法比较。结果 利用Labworks凝胶成像分析系统判断结果的RT PCR一步法与常规组织培养法检测甲肝减毒活疫苗滴度灵敏度相仿 ,检测结果无显著差异。结论 此法与常规RT PCR法相比具有更简便 ,判断标准更客观的优点 ,可代替组织培养法检测甲肝减毒活疫苗滴度。
- 钱汶陈悦青唐彩华周康凤庄昉成
- 关键词：甲肝减毒活疫苗
- 含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响被引量：2
- 2004年
- 为提高乙型肝炎疫苗的免疫原性和机体对疫苗的免疫反应性,开发新型疫苗佐剂已成为国内外学者研究的热点。大量的研究表明,CpC基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂(CpC ODN)是很有前途的细胞免疫和体液免疫增强剂,与铝佐剂有协同作用,并可克服铝佐剂对细胞免疫的抑制;CpC ODN作为佐剂稳定性较好,对人体安全,尤其是与Al(OH)_3联合作为HBsAg疫苗佐剂时,双剂接种就可以获得很理想的免疫效果,并且价廉,有利于提高发展中国家的乙型肝炎疫苗接种率。本文着重对含有一个或数个非甲基化CpC ODN的研究进展作了综述。
- 周康凤毛子安钱汶
- 关键词：CPG基序寡聚脱氧核苷酸疫苗佐剂乙型肝炎疫苗
