刘利娟 作品数:76 被引量:369 H指数:11 供职机构: 湖南中医药大学第一附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖南省中医药管理局资助项目 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
活血荣络方调控生物钟蛋白Bmal1改善bEnd.3细胞糖氧剥夺/复氧损伤后血管新生的机制研究 被引量:2 2022年 目的 基于阴阳理论及活血荣络方(Huoxue Rongluo Recipe,HXRL)对脑梗死后血管新生的影响,探讨HXRL调控生物钟蛋白脑和肌肉芳烃受体核转位蛋白1(brain and muscle Arnt-like 1,Bmal1)促内皮细胞血管新生的作用机制。方法采用Western blotting检测小鼠脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)受到糖氧剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤后各时间点生物钟蛋白Bmal1和Clock的表达;利用染色质免疫共沉淀-测序分析(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)明确Bmal1在全基因组中发挥的作用,以及对bEnd.3细胞生物进程、细胞组成及分子功能的影响。采用CCK-8法检测HXRL含药血清最佳干预浓度,敲降bEnd.3细胞Bmal1基因,设置对照组、模型组、HXRL含药血清组、si-Bmal1组和si-Bmal1+HXRL含药血清组,通过划痕、迁移、成管等实验检测细胞迁移及血管形成能力;采用免疫荧光检测各组血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和神经源性基因Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)表达;采用Western blotting检测VEGF、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、Notch1蛋白胞内结构域(notch1 intracellular domain,NICD)和δ样蛋白4(delta-like protein 4,DLL4)蛋白表达。结果 b End.3细胞受到OGD/R损伤后,Bmal1及Clock蛋白表达逐渐升高,造模8、12、16、20 h后具有显著差异(P<0.05、0.001)。ChIP-seq提示Bmal1在内皮细胞中参与细胞发育、分化、增殖等进程,靶向调节VEGF、Notch1启动子区域。CCK-8实验结果显示,bEnd.3细胞受到OGD/R损伤后,10%的HXRL含药血清可有效改善细胞活力(P<0.001)。划痕、迁移及成管实验证实HXRL含药血清可有效改善bEnd.3细胞OGD/R损伤后的迁移能力及血管生成能力(P<0.05、0.01、0.001),但在Bmal1敲降株中,该促进作用被抑制(P<0.05、0.01、0.001)。免疫荧光及Western blotting结果显示,HXRL含药血清可进一步升高OGD/R损伤的bE 张宇星 张瑛 曾富康 郭纯 高晓峰 李中 陈瑶 周德生 刘利娟关键词:氧糖剥夺 血管新生 复方丹参片对阿尔茨海默病转基因细胞模型AChE表达的影响 被引量:2 2014年 目的:研究复方丹参片对阿尔茨海默病(AD)转基因细胞模型乙酰胆碱酯酶(AChE)表达的影响。方法:将SD大鼠60只随机分成复方丹参片0.5、1、2、4倍剂量组,空白对照组及多奈哌齐对照组。各组大鼠分别灌服相应浓度药液,空白对照组给予等容积生理盐水,每天1次,连续7天。末次给药后1 h,取各组大鼠含药血清培养AD转基因细胞,于24、48、72 h采用Western Blot方法分析AD转基因细胞AChE的表达。结果:与空白对照组比较,24、48 h时2、4倍复方丹参片组AChE表达明显降低,差异有非常显著性意义(P<0.01),72h时差异无显著性意义(P>0.05);2、4倍复方丹参片组组内48h与24h比较,AChE表达降低,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:复方丹参片能在一定程度上减少AD转基因细胞模型AChE的表达。 周德生 刘利娟 胡华 陈瑶 孙晓鹏 覃仁安关键词:复方丹参片 乙酰胆碱酯酶 脑藏象理论解析及分形构建探讨 被引量:11 2018年 基于中医基础理论的逻辑框架,利用分形理论,将脑藏象理论分为脑髓脑室-脑脏腑系统、脑脉脑络-脑经脉系统、官窍神窍-脑窍系统、泥丸九宫-脑神机系统、脑气脑血脑脊液-脑精气系统等5个方面,不仅脑的局部功能相互区别又相互关联,脑的局部功能与脑的整体功能也是相互区别又相互关联的。脑奇恒府整体功能结构高度完备,不仅调控全身机能、精神心理、认知能力等等;并且,对全身脏腑功能也有调控作用,全身脏腑对脑有反馈调节作用。这种区别于功能神经学及神经生理学的脑藏象理论,从整体观和分形观角度阐释脑功能的复杂性和实用性,形成一个中医药一体化语言系统平台,能够为中医脑科临床应用提供中医特有的思维策略,开拓新的治疗思路。 周德生 刘利娟关键词:脑功能 脑结构 分形 活血荣络方调控PI3K/Akt通路减轻脑缺血再灌注损伤PC12细胞炎症反应 被引量:3 2022年 目的探讨活血荣络方对脑缺血再灌注损伤炎症反应的调控机制。方法通过体外实验,将PC12细胞分为空白组、模型组、活血荣络方组及阳性药物组(丁苯酞)。CCK8法检测细胞活力,探索最佳造模时间及含药血清浓度;Western blotting及RT-qPCR法检测PI3K/Akt通路相关蛋白及mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果体外实验表明,与对照组相比,OGD4h/R24h细胞活力下降超过50%(P<0.01);与模型组相比,10%活血荣络方血清组细胞活力恢复最佳(P<0.01);活血荣络方能上调PI3K/Akt通路相关蛋白及mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α炎症因子水平(P<0.01)。结论活血荣络方可能通过激活PI3K/Akt通路抑制脑缺血再灌注损伤炎症反应。 曾富康 张宇星 高晓峰 刘利娟 陈瑶 李中 周德生关键词:脑缺血再灌注损伤 PC12细胞 炎症反应 蜈蚣复方致周围神经损害1例 被引量:2 2013年 蜈蚣具有息风止痉、解毒散结、通络止痛的作用,主治中风、惊厥、破伤风、百日咳、烫伤、疮疡肿毒等;目前蜈蚣在临床中应用广泛,药方中多使用专业加工炮制之品,严格按照《中华人民共和国药典》规定用量,3—5g/次,很少引起神经损害症状。但是部分患者凭借传统经验自行炮制,连续服用后可导致周围神经损害的症状。笔者在临床中治疗蜈蚣复方致周围神经损害患者1例,现介绍如下。 刘利娟 周德生关键词:周围神经损害 Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-Ⅱ mRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA的影响 被引量:5 2017年 目的探讨Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达的影响。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、Salubrinal组(Sal组),各组又分为再灌6、12、24、72 h 4个亚组。各组于再灌相应时间点行神经功能缺损评分,并断头取脑行HE染色及Real time-PCR检测。结果神经功能缺损:与假手术组比较,模型组、Sal组各时间点均有神经功能缺损(P<0.01);与模型组比较,再灌24、72 h Sal组神经功能缺损评分降低(P<0.05)。HE染色:模型组神经元减少、缺失,细胞肿胀,部分破裂,细胞核固缩、偏移、深染,胶质细胞增生,经Salubrinal干预后,再灌各时间点神经元增多,胞膜较完整,核固缩现象较轻,水肿轻微。Real time-PCR检测:与假手术组比较,模型组、Sal组各指标于再灌各时间点均增高(P<0.01)。与模型组比,Sal组LC3-ⅡmRNA表达于再灌12、24、72 h下降明显(P<0.05);Sal组LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA于再灌后各时间点下降均明显(P<0.01)。结论 Salubrinal通过下调LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA比值,对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。 刘利娟 陈瑶 周德生 王洪海 周颖璨 李中 胡华关键词:MRNA 神经保护 安脑平冲片对大鼠脑出血模型NSE、S100b、BDNF的影响 目的:探讨安脑平冲片对大鼠脑出血模型的神经保护作用。 方法:在大鼠尾状核注入自体血制作脑出血模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、安脑平冲片组、吡拉西坦片组,每组24只,给予相应药物后,分别于脑出血24h、48h、72h、... 刘利娟关键词:脑出血 文献传递 脑藏象理论构建及中风病的辨治应用 周德生 胡华 刘利娟 陈瑶 刘春华 梅志刚 高晓峰 颜思阳 谭惠 藏象理论是中医的基石,但脑藏象理论零散无绪。该项目在中医药理论指导下,从理论探讨、动物实验、细胞实验、临床观察,从整体到微观、组织病理改变到分子机制等构建了脑藏象理论,系统探讨了脑结构、脑功能、脑生理、脑病临床的特征与脑...关键词:关键词:中风病 动物实验 中医药理论 脑出血中医特色诊疗康复临床方案 周德生 谭克理 刘利娟 胡华 陈瑶 高晓峰 彭勃 中医药是一个伟大宝库,要努力挖掘,加以提高。中医特色诊疗是祖国医学的精华,集中体现了中医药诊疗的优势,是历代医家经过长期临床实践,总结出临床诊疗的典范。脑出血作为中医优势病种,其中医特色诊疗康复是发掘、继承、弘扬、传播和...关键词:关键词:脑出血 国医大师熊继柏辨治臌胀的临床经验 被引量:3 2022年 介绍国医大师熊继柏辨治臌胀的临床经验。熊老认为本病以肝、脾、肾俱虚为本,以气、血、水互结于中焦为标,多因水湿内停、湿热聚集、瘀血内阻发为本病,强调与肝、脾、肾三脏关系密切。临证重视标本缓急,强调急则治其标、缓则治其本;分期辨证论治,初期行气,中期利水,后期祛瘀;明辨病情虚实;积极防治变证。常证多用胃苓汤、中满分消丸、五皮饮、茵陈四苓散、二金汤合三甲散治疗,变证多用甘露消毒丹、宣清导浊汤、犀角地黄汤治疗。附验案1则,以资临床借鉴。 肖楠 卓丹 文维农 臧秋迟 毛宇 刘利娟 姚欣艳关键词:臌胀 临证经验 名医经验