刘佳
- 作品数：35 被引量：60H指数：4
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 高产L-丙氨酸大肠杆菌细胞工厂的构建与发酵优化
- 2024年
- L-丙氨酸作为最小的手性化合物之一,被广泛应用于食品、医药和日化领域。目前,微生物法生产L-丙氨酸存在发酵周期长,生产强度低等问题。为此,通过强化前体供给、启动子工程和转运工程等代谢工程策略,构建高产L-丙氨酸的大肠杆菌细胞工厂。进一步通过生化工程策略优化L-丙氨酸生产工艺,提高L-丙氨酸大肠杆菌细胞工厂的生产性能。结果:过表达gapA(3-磷酸甘油醛脱氢酶基因)强化前体丙酮酸供给,使L-丙氨酸产量和转化率分别提高了5.1%和15.6%。启动子工程优化gapA表达,使L-丙氨酸产量和转化率进一步提高到18.3 g/L和0.55 g/g。过表达L-丙氨酸外运蛋白(AlaE),增加L-丙氨酸转运,使L-丙氨酸产量提高到20.4 g/L。生化工程策略优化培养基组分,得到最佳碳源为葡萄糖40 g/L,最佳氮源为(NH4)2SO425 g/L。最佳发酵条件为:接种量15%,10 h转厌氧发酵和变速补料发酵。5 L发酵罐发酵36 h,大肠杆菌菌株W-135 L-丙氨酸产量为127.2 g/L,转化率为0.83 g/g,生产强度为3.53 g/L/h,比优化前分别提高了64.3%,50.9%和64.2%。本研究利用系统代谢工程和生化工程策略,构建了发酵周期短和发酵工艺简单的L-丙氨酸高产菌株,为L-丙氨酸的工业化生产提供了理论基础。
- 聂玉朋郭亮刘立明刘佳徐慧姜国政田延军
- 关键词：L-丙氨酸大肠杆菌代谢工程生化工程
- 不透明红球菌生产谷氨酸氧化酶发酵过程优化被引量：4
- 2017年
- 优化了用不透明红球菌FMME1-41所产谷氨酸氧化酶(LGOX)转化L-谷氨酸产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件.结果表明,最佳发酵培养基为酵母粉6 g/L,大豆蛋白胨2 g/L,(NH_4)_2SO_4 0.8 g/L,葡萄糖25 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgSO_4 0.6 g/L,MnSO_4 0.3g/L,L-谷氨酸2.5 g/L,在其中发酵30 h,LGOX酶活达6.12 U/mL;在7.5 L发酵罐中优化发酵放大和补料策略,发酵40 h后LGOX酶活达21.5 U/mL;在2 L发酵罐中转化L-谷氨酸生产α-KG,产量达92.0 g/L,摩尔转化率为92.6%,生产强度为9.2 g/(L·h).
- 刘佳徐继嗣罗秋玲陈修来刘立明
- 关键词：Α-酮戊二酸
- 酶法制备大豆蛋白降血压肽的研究被引量：12
- 2008年
- 采用5种蛋白酶对中性蛋白酶A.S1398酶解大豆蛋白生成的相对分子质量高的组分(HMF)进行再次水解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。研究结果表明,Protease N为最适用酶,优化的水解条件为:底物质量分数5%,加酶量2.0%,pH7.0,温度55℃。在此条件下酶解120 min,水解物对ACE抑制作用最强,抑制率达到65.1%(此时水解度为11.1%);水解液经SephadexG-15分离,得到了对ACE具有较好抑制作用的组分,IC50值约为40μg/mL。
- 刘佳王兴国杨严俊
- 关键词：大豆蛋白ACE抑制肽水解度凝胶色谱
- 发酵法生产糖胺聚糖的研究进展被引量：1
- 2017年
- 糖胺聚糖是一种具有多种生理功能的直链酸性黏多糖,广泛应用于化妆品、保健品和药品等行业。为了满足环境友好、生产安全和可持续发展的社会要求,利用微生物发酵法生产糖胺聚糖越来越受到人们的关注。本文中,笔者在总结糖胺聚糖生物合成路径的基础上,分析归纳了发酵法生产糖胺聚糖的生化工程和代谢工程策略,并展望了糖胺聚糖进一步高效生产的发展方向。
- 张权陈修来刘佳刘佳刘立明
- 关键词：糖胺聚糖生化工程代谢工程
- 模块化工程改造大肠杆菌生产L-色氨酸被引量：1
- 2023年
- L-色氨酸作为一种必需氨基酸,广泛应用于食品、饲料和医药等领域。目前,微生物法生产L-色氨酸存在转化率低等问题。为此,本研究通过敲除L-色氨酸操纵子阻遏蛋白(L-tryptophan operon repressor protein,trpR)、替换L-色氨酸弱化子(trpL)、引入抗反馈调节的aroGfbr等,获得可积累11.80 g/L L-色氨酸的底盘菌株大肠杆菌(Escherichia coli)TRP3。在此基础上,将L-色氨酸合成途径分为中心代谢途径模块、莽草酸(shikimic acid,SA)途径至分支酸(chorismic acid,CHA)模块、分支酸至L-色氨酸模块,并借助启动子工程,通过平衡中心代谢途径模块、莽草酸途径至分支酸模块、分支酸至L-色氨酸模块,获得工程菌E.coli TRP9。在5 L发酵罐中,工程菌E.coli TRP9的L-色氨酸产量提升至36.08 g/L,糖酸转化率提升至18.55%,达到理论转化率的81.7%。本研究利用模块工程策略,构建了高产L-色氨酸生产菌株,为L-色氨酸的规模化生产奠定了良好的基础。
- 丁爽陈修来高聪宋伟吴静魏婉清刘佳刘佳
- 关键词：L-色氨酸大肠杆菌代谢工程
- 代谢工程改造大肠杆菌合成己二酸被引量：1
- 2023年
- 己二酸是一种具有重要应用价值的二元羧酸,是合成尼龙-66的关键前体。目前,生物法生产己二酸存在生产周期长、生产效率低的问题。本研究选择一株野生型高产琥珀酸菌株大肠杆菌(Escherichia coli)FMME N-2为底盘细胞,首先通过引入逆己二酸降解途径的关键酶,成功构建了可合成0.34 g/L己二酸的E.coli JL00菌株;接着,对合成路径限速酶进行表达优化,使E.coli JL01菌株在摇瓶发酵条件下产量达到0.87 g/L;随后,通过敲除sucD基因、过表达acs基因和突变lpd基因的组合策略平衡己二酸合成前体的供应,优化菌株E.coli JL12己二酸产量进一步提升至1.51 g/L;最后,在5 L发酵罐上对己二酸发酵工艺进行优化。工程菌株经72 h分批补料发酵,己二酸的产量达到22.3 g/L,转化率为0.25 g/g,生产强度为0.31 g/(L·h),具备了一定的应用潜力。本研究可为包括己二酸在内的多种二元羧酸细胞工厂的构建提供理论依据和技术基础。
- 刘洁高聪陈修来郭亮宋伟吴静魏婉清刘佳刘佳
- 关键词：大肠杆菌代谢工程己二酸发酵优化
- 谷氨酸氧化酶高产菌株的筛选鉴定及催化生产α-酮戊二酸被引量：1
- 2017年
- 采用简易的偶联终点显色反应(Trinder显色反应),从土壤中分离出高产谷氨酸氧化酶(LGOX)的菌株不透明红球菌Rhodococcus opacus FMME1-41,并对此菌株的产酶特性进行研究。结果表明:该菌株所产LGOX主要分泌在发酵液中,对L-谷氨酸具有较强的底物专一性,最适pH 6.5,最适温度为35℃,Mn^(2+)是该酶的激活剂。通过发酵培养基优化,培养30 h时LGOX活力达到6.4 U/m L。利用该酶转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸,在最佳转化条件下转化20 h,α-酮戊二酸产量达到91.2 g/L,转化率为91.8%,α-KG生产强度为4.56 g/(L·h)。
- 刘佳徐继嗣罗秋玲陈修来刘立明
- 关键词：Α-酮戊二酸酶法转化
- 细胞寿命在大肠杆菌细胞工厂构建中的应用被引量：2
- 2021年
- 微生物细胞工厂以可再生资源为原料,为工业化学品的可持续生产提供了一种有前景的替代方案。然而,不适的外界环境显著影响了微生物细胞的存活率,降低了微生物细胞工厂的生产性能。通过延长微生物细胞的时序寿命,可以显著提升微生物细胞工厂的生产性能。首先,基于存活率的变化建立了细胞时序寿命和半时序寿命的评价体系;然后,发现半胱氨酸、肌肽、氨基胍和氨基葡萄糖抗衰老药物可以使大肠杆菌Escherichiacoli细胞的时序寿命分别延长80%、80%、50%和120%;最后,延长E.coli时序寿命可以显著改善E.coli细胞工厂的生产性能,可以用于改善具有本源代谢合成路径的E.coli细胞工厂的生产性能,使乳酸和丙酮酸的得率分别提升30.0%和25.0%,也可以用于改善具有异源代谢合成路径的E. coli细胞工厂的生产性能,使苹果酸的得率提升27.0%。这些研究结果表明延长E. coli细胞寿命提供了一种潜在的改善细胞工厂的生产性能的方法。
- 刘佳郭亮罗秋玲罗秋玲陈修来宋伟刘立明
- 关键词：大肠杆菌抗衰老药物
- 氨基酸高值化的生物催化技术
- 作为构成蛋白质大分子的基础物质,氨基酸参与一切与生命密切相关的活动,因此广泛应用于食品、医药、农业、饲料、化妆品等工业领域.我国氨基酸工业逐步发展于20 世纪60 年代,目前产业规模以上的氨基酸生产厂家已达近百家,年产值...
- 宋伟刘佳刘立明
- 调控因子SlyA和RfaH在E.coli K4合成果糖软骨素中的生理作用
- 2015年
- 利用基因工程手段过量表达E.coli K4荚膜多糖(K4CPS)合成途径中相关代谢调控因子Sly A和Rfa H,以构建高效合成K4CPS的菌株。结果发现:sly A和rfa H基因的单独过量表达和共表达重组菌的K4CPS的产量较对照菌分别提高了81.8%、46.5%和153.8%;甘油比消耗速率较对照菌降低了12.5%、18.8%和31.3%,而乙酸含量则较对照菌降低了98.6%、39.7%和91.6%。因此,调控蛋白Sly A和Rfa H的过量表达能够大幅度提高E.coli K4的K4CPS合成,并增强菌体对甘油的利用率,而乙酸合成明显降低。而与单独表达策略相比,共表达策略能够更加有效地增强菌体合成K4CPS的能力。
- 杨爱华刘佳张震宇刘立明
- 关键词：硫酸软骨素E.COLIK4
