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PiggyBac（PB）转座子细胞永生化载体的构建及其在BMECs中的初步验证: 转座子（transposon）是宿主基因组DNA中一类具有移动性的特殊序列，作为遗传重组因子广泛存在于生物基因组中。piggyBac（PB）转座子是一种依赖于PB转座酶的DNA转座子，大量研究表明PB转座子能识别哺乳动物...; 黄惠; 关键词：转座子 HTERT 牛乳腺上皮细胞永生化; 文献传递

一种通用型piggyBac转座子诱导细胞永生化载体的构建及其基本功能验证被引量：5: 2014年; 为了构建一种高效、通用的细胞永生化载体pTP-hTERT,通过人工合成、PCR、酶切连接等方法,对传统piggyBac(PB)转座子系统进行改造。改造后的载体含有转座必需元件、PB转座酶(PBase)表达框、共表达筛选元件和人端粒逆转录酶(hTERT)基因表达框。其中筛选元件中绿色荧光蛋白(EGFP)基因和嘌呤霉素抗性(Puror)基因以猪捷申病毒2A自我剪切肽相连,以实现共表达。为验证载体元件功能,使用该载体转染HEK 293细胞,并对筛选出的阳性细胞进行RT-PCR、Western blotting(WB)、热不对称PCR(Tail-PCR)和细胞克隆亚甲蓝染色与统计分析。载体测序鉴定与细胞培养结果表明,通用型永生化载体pTP-hTERT构建成功,转染HEK293细胞后能筛选出抗嘌呤霉素细胞单克隆;WB结果显示P2A可高效切割EGFP和Puror融合蛋白,证明筛选标记基因功能正常;Tail-PCR结果表明该载体以转座整合插入宿主基因组;亚甲蓝染色统计结果显示由pTP-hTERT引发的细胞阳性克隆数与对照组相比显著提高(P<0.01)。PB转座子永生化载体pTP-hTERT的构建为永生化细胞系的建立提供了工具,同时也为其他真核载体的构建和改造提供了参考。; 黄惠胡广东康健卿素珠张涌; 关键词：HTERT

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黄惠