颜江华 作品数:141 被引量:321 H指数:9 供职机构: 厦门大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 福建省自然科学基金 厦门市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 轻工技术与工程 更多>>
诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定 被引量:3 2006年 目的:构建适于原核表达的人诱骗受体DcR3基因,并进行重组蛋白的表达纯化及特异性鉴定。方法:查得人DcR3cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得DcR3基因。构建pET-22b(+)/DcR3表达载体,转化大肠杆菌Rosseta-gami,IPTG诱导表达,Ni柱纯化。采用ELISA进行特异性鉴定。结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。ELISA结果表明所纯化的蛋白可与抗DcR3抗体发生特异结合。结论:诱骗受体DcR3基因的成功构建、表达及纯化,为进一步的功能研究奠定了基础。 李文珠 陶惠然 颜江华 张长弓 苏金华 王阶平 杨桂旺 庄国洪关键词:DCR3 基因构建 基因表达 MTT比法在细胞活性检测中的影响因素 本文应用微孔板培养细胞,利用水不溶性的tetrazolium.salt(MTT)在活细胞中能被还原成水不溶性的甲(?)产物,紫红色的甲(?)产物可被有机溶剂溶解,其光密度值的变化可做为测定的指标。结果表明溶解在DMSO中... 郑耘 杨善民 颜江华 陈瑞川文献传递 一种新型融合蛋白(RGD)3/tTF的基因表达与活性分析 被引量:6 2007年 为了发展一种新型的融合蛋白(RGD)3/tTF用于肿瘤血管的选择性栓塞治疗,利用PCR技术重组(RGD)3/tTF融合基因,克隆于pET22b(+)载体,表达于E.coliBL21(DE3)。用镍柱纯化融合蛋白。凝血实验与FⅩ活化实验检测融合蛋白tTF组分的活性。间接ELISA分析(RGD)3/tTF与αvβ3的特异结合能力。pET22b(+)/(RGD)3/tTF重组质粒成功获得并表达于E.coliBL21(DE3)。纯化蛋白(RGD)3/tTF能有效诱发血液凝固,活化FⅩ。(RGD)3/tTF与αvβ3的特异结合能力比RGD/tTF提高了32%。新型融合蛋白(RGD)3/tTF已在E.coli系统成功表达,表达蛋白保持tTF的活性并显示比RGD/tTF更高的与αvβ3的结合能力。 颜江华 杨桂旺 王阶平 吴娜 庄国洪关键词:TTF RGD 融合蛋白 凝血 一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法 一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法,涉及树突状细胞。胃癌细胞MGC-803总RNA的提取、鉴定;SOCS1拮抗剂pJAK2(1001-1013)多肽的合成;外周血单个核细胞的分离;单核细胞的获取;未成熟树突状细胞... 陈玉强 王勇军 颜江华 王生育文献传递 作为免疫相关性疾病靶点的DcR3的研究进展 被引量:2 2006年 诱骗受体3(decoy receptor 3,DeR3)是肿瘤坏死因子受体超家族的新成员。它通过拮抗Fas/FasL系统及LIGHT/ LTβR、LIGHT/HVEM/TR2系统的作用,在肿瘤及免疫性疾病中发挥重要作用。DcR3的基因位于20q13.3,在人肿瘤细胞中会发生基因扩增和重排;在多种肿瘤、自身免疫疾病中高表达;作用机制有LIGHT和配体FasL途径等;促肿瘤发生;可下调宿主免疫功能,能降低T细胞对同种抗原应答,有重大开发潜能。 李文珠 庄国洪 颜江华 陶惠然关键词:DCR3 肿瘤 自身免疫病 移植免疫 肺癌靶向血栓蛋白hu3D3V_H-tTF的表达及活性鉴定 被引量:2 2008年 目的制备一种用于肺癌血管靶向栓塞治疗的融合蛋白hu3D3VH-tTF,并鉴定其生物学活性。方法利用重叠PCR技术构建tTF与hu3D3VH的融合基因,克隆至表达载体pET22 b(+),在E.coliBL21(DE3)中表达,镍亲和色谱柱纯化目的蛋白。ELISA检测融合蛋白hu3D3VH组分与肺腺癌细胞A549选择性结合活性,凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白tTF组分的促凝血活性。结果获得序列正确的hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达。纯化后的融合蛋白与肺腺癌细胞A549具有选择性结合活性,并能活化FⅩ、有效促发血液凝固。结论成功构建hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,hu3D3VH/tTF融合蛋白具有hu3D3VH的选择性结合能力同时具有TF的促凝血活性,为开展选择性肺肿瘤血管血栓性栓塞研究奠定了基础。 颜江华 王生育 王阶平 王勇军 黄志平 王臻关键词:TTF 血栓 肺癌 抗人NRP-1单克隆抗体对肝癌HepG2细胞株的生长抑制作用及机制初探 被引量:1 2016年 目的研究抗人神经纤毛蛋白-1(Neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用及其机制。方法小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 m Ab)并用r Protein A亲和柱纯化抗体,间接ELISA检测抗体的滴度水平。Western blot检测NRP-1 m Ab对Hep G2细胞的特异性,细胞免疫荧光和流式细胞术检测NRP-1蛋白在肝癌细胞株Hep G2上的表达,MTT法检测NRP-1 m Ab对Hep G2的生长抑制作用,Western blot检测ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白的表达水平。结果 SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 m Ab纯度为95%以上,效价为1×10^(-6);Western blot检测结果显示NRP-1 m Ab可与Hep G2细胞膜上的NRP-1蛋白特异性结合。细胞免疫荧光染色结果显示NRP-1定位于Hep G2细胞膜,流式细胞术结果显示NRP-1蛋白在Hep G2细胞上表达水平较高;MTT法检测结果显示NRP-1 m Ab对Hep G2细胞有生长抑制作用。Western blot检测到在不同浓度NRP-1 m Ab作用下,Hep G2细胞裂解液P-ERK1/2、P-Akt蛋白的条带信号逐渐减弱。结论纯化的NRP-1m Ab能抑制Hep G2细胞的生长,其抑制作用是通过EGF和HGF信号通路实现的。 谈文娟 高春玲 颜江华 程小峰 张蓓蓓 王笑良关键词:肝癌 蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B催化活性区的原核表达及活性分析 被引量:2 2008年 从GenBank获得人PTP1B催化活性区(PTP1Bc)氨基酸序列(1~301aa),通过重叠PCR获得PTP1Bc基因。构建pET-22b(+)/PTP1Bc原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),阳性重组子IPTG诱导表达,Ni柱纯化蛋白。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。Western blotting结果表明所得的蛋白可与抗PTP1B抗体发生特异性结合;酶活实验证实复性的蛋白具有一定的磷酸酶活性。PTP1Bc基因的构建、表达纯化及活性分析,为进一步的功能研究奠定了基础。 王生育 颜江华 潘阳霖 李学军 陈忠关键词:基因表达 蛋白纯化 活性分析 九孔鲍鱼球状病毒病的诊断和防治报告 被引量:9 2000年 1999~ 2 0 0 0年冬春季节。福建省东山、漳浦养殖九孔鲍鱼暴发急性、毁灭性传染病流行。经过一系列实验室检验和病例复制试验 ,证实它是由一种大小 5 0~ 80 x12 0~ 15 0 nm球状病毒侵袭鲍体所引起的。该病采取隔离消毒、净水养殖、药浴和饲喂药物饲料 。 黄印尧 陈信忠 吴文忠 颜江华 倪子绵关键词:九孔鲍 球状病毒 症状 防制 双特异抗体CD3xAFP介导CIK细胞对AFP阳性肝癌细胞的杀伤应用 被引量:1 2010年 目的建立双特异抗体anti-CD3xanti-AFP介导CIK细胞对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤。方法利用anti-CD3抗体联合细胞因子IL-2活化人外周血淋巴细胞扩增CIK细胞,流式细胞仪分析细胞表型。柠檬酸三钠还原法制备金溶胶,物理吸附制备载荷anti-CD3和anti-AFP两种单抗的胶体金制剂,光镜检测抗体活性。AlarmaBlue法检测双特异抗体介导CIK细胞对肝癌细胞HepG-2和宫颈癌细胞Hela的杀伤活性。结果 14 d活化后的人外周血淋巴细胞鉴定为CIK细胞。抗体活性检测证实纳米金制剂保持了anti-CD3xanti-AFP的双特异抗体活性,在其介导下,CIK对特异靶细胞HepG-2杀伤效率为42%,提高11.4%(P<0.05),而对非特异靶细胞Hela杀伤无明显变化。结论金标双特异抗体anti-CD3xanti-AFP可以加强CIK细胞对AFP阳性肝癌细胞的杀伤作用。 支黎明 车莹 颜江华 张顺浪 王生育 马飞剑 张琼 许健关键词:CIK细胞 肝癌细胞 双特异抗体 胶体金 AFP