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言慧: 作品数：15 被引量：49H指数：5; 供职机构：南方医科大学更多>>; 发文基金：广州市科技计划项目广东省重大科技攻关项目广东省科技攻关计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>

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抗弓形虫重组SAG1抗原单克隆抗体的制备与鉴定被引量：5: 2005年; 目的制备抗弓形虫SAG1单克隆抗体(McAb)。方法将pET32(a)-trSAG1重组质粒转化EscherichiacoliBL21(DE3),用0.1mmol/LIPTG诱导表达,超声破菌后获得可溶性表达产物,通过Ni-NTA一步法纯化,以纯化的rSAG1为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,Western blot分析其特异性。结果筛选出能稳定分泌抗rSAG1单克隆抗体的5株杂交瘤细胞株,抗体重链均为IgG1,轻链均为κ链;Western blot分析显示,5株单抗均能与弓形虫速殖子超声抗原中的天然SAG1发生特异性结合。结论制备的抗rSAG1杂交瘤细胞株能分泌识别SAG1的高特异性单抗,为进一步研究其在弓形虫病免疫诊断中的应用奠定了基础。; 言慧李华陈晓光吴锦雅; 关键词：弓形虫可溶性表达纯化单克隆抗体

截短形式弓形虫SAG1抗原在大肠杆菌中的可溶性高效表达、纯化及免疫反应性鉴定被引量：15: 2004年; 目的在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫SAG1基因的截短片段,并进行纯化及免疫反应性鉴定。方法利用NcoⅠ、HindⅢ双酶切,从本室建立的pET-30a(+)-SAG1重组质粒中获取SAG1基因的截短片段,并将目的片段连接到经同样双酶切的质粒pET32a中,构建表达重组质粒pET-32a(+)-trSAG1。将重组质粒转入E.coliBL21中并进行诱导表达。表达蛋白经Ni-NTA agarose纯化后, Western-blotting分析其免疫反应性。结果成功构建重组质粒pET-32a(+)-trSAG1 ,通过IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组SAG1蛋白,相对分子质量40 000,Western-blotting结果显示纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性,ELISA试验表明重组SAG1蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别。结论在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达了弓形虫SAG1基因的截短片段,表达蛋白能被弓形虫免疫兔血清及弓形虫感染人血清识别,有望成为一种有价值的诊断抗原。; 言慧李华周晓红吴昆陈晓光; 关键词：弓形虫大肠杆菌可溶性纯化

常用基因表达系统的特点及其在寄生虫抗原制备中的应用: ＜正＞寄生虫抗原构成复杂、多变,多数寄生虫不能体外培养,通过基因工程技术; 言慧陈晓光; 关键词：重组抗原疫苗; 文献传递

弓形虫SAG1基因截短片段的克隆、可溶性表达及活性鉴定: ＜正＞目的:获取弓形虫主要表面抗原SAG1的重组表达质粒及菌株,使SAG1基因片断在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,并对表达蛋白进行初步纯化和鉴定。方法:本室已建立了弓形虫主要表面抗原SAG1的pET-30a-SAG1重...; 言慧陈晓光李华周晓红吴昆; 关键词：弓形虫纯化; 文献传递

具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定被引量：4: 2005年; 目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性。结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物。经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上。免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别。结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值。; 杨培梁陈晓光王元占李华周晓红吴焜言慧; 关键词：弓形虫多表位大肠杆菌免疫反应性

包涵体的纯化、复性及其在寄生虫研究中的应用被引量：5: 2002年; 多种寄生虫基因已在原核表达系统中高水平表达 ,但多以包涵体的形式存在。本文介绍了包涵体分离纯化与复性技术的主要进展及其在寄生虫血清学诊断。; 言慧陈晓光; 关键词：寄生虫包涵体纯化复性血清学诊断

弓形虫SAG1基因截短片段植物表达载体的构建被引量：8: 2004年; 目的　将弓形虫SAG1基因截短片段 (t SAG1) ,分别用植物组成型E35S启动子和番茄果实特异性E8启动子驱动 ,构建t SAG1植物表达载体。方法　自本室构建的pET32a t SAG1载体中PCR扩增得到t SAG1基因 ,克隆进T载体为pMD T t SAG1,酶切鉴定后进行测序确认。用BamHⅠ单酶切连接方式将t SAG1分别亚克隆进 pB35MG、pB35E1MG、pBE2MG载体 ,分别构建中间载体 pB35 t SAG1、pB35E1 t SAG1、pBE2 t SAG1载体。其中 ,pB35 t SAG1以E35S驱动t SAG1,3′端携带NOS3′终止子序列 ,组成E35S/t SAG1/NOS3′操纵子结构单元。pB35E1 t SAG1含E35S和番茄果实特异性E8启动子核心序列E81.1双启动子驱动t SAG1,组成E35SE81.1/t SAG1/NOS3′操纵子结构单元。pBE2t SAG1以番茄果实特异性E8启动子全长E82 .2驱动t SAG1,组成E82 .2 /t SAG1/NOS3′操纵子结构单元。pB35 t SAG1、pB35E1 t SAG1、pBE2 t SAG1经酶切证实后 ,分别将其中E35S/t SAG1/NOS3′、E35S -E81.1/t SAG1/NOS3′、E82 .2 /t SAG1/NOS3′操纵子结构单元以HindⅢ单酶切连接方式亚克隆进pCAMBIA2 30 0质粒中 ,构建植物表达载体 pC35 t SAG1、pC35E1 t SAG1、pCE2 t SAG1,酶切鉴定。含三种启动子驱动t SAG1的植物表达载体转化根癌农杆菌LBA4 4 0 4感受态细胞后 ,; 周晓红陈晓光卢丽琴李林吴优咸鹏言慧吴琨; 关键词：刚地弓形虫植物表达载体

具有特异免疫反应活性的弓形虫重组SAG1抗原及其单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用: 该研究尝试在大肠杆菌中进一步以可溶性形式表达成熟SAG1蛋白片段,期待表达的重组蛋白无需复性即能具有良好的免疫活性,探讨重组蛋白作为新型诊断抗原的可能性;并且进一步筛选针对重组SAG1蛋白的单克隆抗体,探讨单克隆抗体检测...; 言慧; 关键词：弓形虫 SAG1 克隆蛋白纯化单克隆抗体免疫诊断; 文献传递

医学寄生虫学“五个一”教学多媒体体系的构建与初步应用被引量：3: 2003年; 如何培养高素质的创新型医学人才是当代高等医学教育所面临的重大课题.随着科学技术的飞速发展, 医学寄生虫学的内涵外延也日新月异[1],传统的媒体(粉笔、黑板、胶片等)已无法满足现代知识有效传播的需要,只有充分运用现代媒体,如计算机辅助教学、远程教学、网络教学等,才能适应时代的要求.; 李华陈晓光彭鸿娟言慧; 关键词：医学寄生虫学教学