袁敏敏
- 作品数：49 被引量：179H指数：9
- 供职机构：复旦大学附属妇产科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“985工程”上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 融合蛋白hCGβ-hC3d3增强人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性
- 2007年
- 目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B+T细胞、PBMC和Raji细胞8～12天,用3H-TdR掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞增殖情况;用ELISA检测培养上清中总免疫球蛋白(Ig)水平;而ELISPOT可测定各种抗原刺激后Ig分泌细胞数量.结果:用不同浓度hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM作用于B细胞、B+T细胞、PBMC、Raji细胞8～12天后,3H-TdR掺入法分析显示:与hCGβ处理组相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性;100 nmol/L hCGβ-hC3d3与前3组细胞共培养上清中总Ig的含量分别为hCGβ刺激组的4倍、10倍和10.85倍,且呈浓度依赖性.ELISPOT结果与培养上清液检测结果类似,经与hCGβ-hC3d3共培养后Ig生成细胞较hCGβ组明显增加.结论:融合蛋白hCGβ-hC3d3明显增强人免疫活性细胞抗hCGβ的免疫原性.
- 李华萍李大金贺晓菊袁敏敏
- 关键词：HCGΒ外周血单个核细胞免疫活性细胞
- 分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗免疫原性及其抗血清中和hCG生物学活性的作用被引量：4
- 2004年
- 本文观察分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白避孕疫苗体液免疫效力的能力。采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO 细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ+弗氏佐剂和单用hCGβ免疫生育期雌性BALB/c 小鼠,共免疫两次,间隔4周。ELISA 测定血清中抗hCGβ抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清中和hCG 生物学活性的能力进行比较。结果表明hCGβ单独免疫组在加强免疫后才见抗体生成,其抗体滴度比hCGβ-C3d3融合蛋白免疫组低1995倍,C3d3的佐剂能力是弗氏佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫),并且hCGβ-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的中和hCG 生物学活性的作用。实验证明通过分子佐剂C3d3可以大幅提高机体对hCGβ的体液免疫应答能力。
- 王秀丽李大金袁敏敏王明雁朱影孟毅
- 关键词：免疫避孕分子佐剂C3D3避孕疫苗抗血清
- 人源分子佐剂C3d3促进人免疫活性细胞抗绒毛膜促性腺激素β亚基的免疫效应
- 2007年
- 目的探讨3个拷贝人源分子佐剂C3d(hC3d3)与绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原免疫原性的影响。方法用L-亮氨酸甲基酯(L- LME)或B细胞磁珠阴性分离试剂盒对人PBMC进行细胞分离纯化;实验分成B细胞、B+T细胞、PBMC和Raji细胞4组。分别应用1、10及100 nmol／L不同浓度的hCGβ、hCGβ-hC3d3及美洲商陆(PWM)等抗原体外作用于以上细胞10～12 d,采用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞的增殖情况;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中抗hCGβ抗体的分泌水平;而酶联免疫斑点法(ELISpot)可测定各种抗原刺激后特异抗体分泌的细胞数量。结果与hCGβ相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性。应用100 nmol／L的不同抗原培养12 d后,取培养上清液进行ELISA检测,经hCGβ及PWM刺激后,上清液中均未检测到抗hCGβ特异性抗体;经hCGβ-hC3d3培养后则在B+T细胞及PBMC组中见低水平抗hCGβ抗体。采用ELISpot法分析抗hCGβ特异性抗体生成细胞,经hCGβ刺激的细胞仅有数个散在的阳性细胞;而经hCGβ-hC3d3刺激后,阳性细胞明显增多(P<0．05)。结论hC3d3明显促进人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性。
- 李华萍李大金贺晓菊袁敏敏
- 关键词：免疫活性细胞
- 补肾宁心方对去势雌兔免疫功能的影响被引量：2
- 2006年
- 为探讨补肾宁心方对去势雌兔免疫功能的影响。24只3月龄新西兰雌兔随机分为正常对照组、假手术组、去势组(卵巢切除)、中药组(卵巢切除并灌以补肾宁心中药复方),除正常对照组外均于卵巢切除2周后给予高脂饮食,中药组同时灌胃给药,其余各组均灌服等量的蒸馏水,连续3个月。采用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖反应;同时采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测动物脾脏IL-2、IL-10 mRNA的表达量。结果显示:雌兔去势后,动物外周血淋巴细胞增殖活性较正常对照组明显降低;补肾宁心方灌药后动物的外周血淋巴细胞增殖活性明显增强,补肾宁心方对动物脾脏的IL-2 mRNA表达水平有明显的上调作用,而对动物脾脏的IL-10mRNA表达水平有明显的下调作用。
- 郝群李大金周跃华袁敏敏孟毅
- 关键词：补肾宁心方绝经期免疫
- CD1332/AC141——一种滋养层细胞新的细胞内标志被引量：2
- 2004年
- 目的 了解CD133在滋养细胞的表达情况 ,为鉴定滋养细胞株及原代分离的滋养细胞提供新的细胞内标志。 方法 通过胰蛋白酶 /DNaseⅠ分步消化 ,Percoll密度梯度离心分离纯化滋养细胞 ,经抗角蛋白 (CK 7)、波形蛋白 (vimentin)单克隆抗体行免疫细胞化学和流式细胞仪 (FACS)鉴定 ,纯度达 95 %以上。采用三种不同的CD133荧光标记单克隆抗体在70 %的甲醇固定前后对原代分离的滋养细胞和绒毛膜上皮癌细胞株 (JAR)行FACS分析。 结果 70 %甲醇固定前 ,三种CD133单克隆抗体均不能与滋养细胞反应 ;固定后 ,抗CD133 1(AC133 1 APC)、抗CD133 2 (2 93C3 PE)仍不能与滋养细胞反应 ,而抗CD133 2 (AC14 1 PE)与滋养细胞胞内抗原结合。而且AC14 1阳性的细胞也是CK 7阳性的细胞。 结论 CD133 2 /AC14 1可作为滋养细胞纯度鉴定的一种有用标志 ,但应用时应选择合适的抗体。
- 杜美蓉李大金王明雁朱影袁敏敏孟毅
- 分子佐剂C3d3通过促进脾脏B细胞高表达趋化因子受体CXCR4增强hCGβ基因疫苗体液免疫效应
- 目的:探讨分子佐剂C3d3与hCGβ融合在基因免疫中增强抗hCGβ体液免疫效应的机制。本实验室既往构建了DNA避孕疫苗pCMV4-hCGβ-C3d3和pCMV4-hCGβ,分别免疫BALB／c小鼠,能够在外周产生高效价抗...
- 贺晓菊贺银燕李大金姚晓英袁敏敏
- 文献传递
- 人早孕期绒毛和绒毛外细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定被引量：27
- 2004年
- 目的:建立人早孕期绒毛细胞滋养细胞(villous cytotrophoblasts,VCT)及绒毛外细胞滋养细胞(extravillous cytotrophoblasts,EVCT)的分离、培养方法。 方法:利用不同的胰酶消化条件,收集人早孕期绒毛组织的VCT及EVCT并分别培养。倒置显微镜、扫描电镜观察VCT及EVCT的形态学特征;免疫细胞化学鉴定细胞来源及纯度。 结果:胰酶短期、温和消化获得的EVCT,可生长于Matrigel包被的培养器皿上,并表达特异性标志物c-crbB-2;延长消化时间、增加胰酶浓度获得的VCT,种植于塑料或玻璃培养器皿上可聚集并融合形成合体滋养细胞。VCT不表达c-crbB-2。结论:采用不同的胰酶消化及体外培养条件,可简单、快捷地分别获得高纯度人早孕期VCT及EVCT。
- 吴霞李大金袁敏敏王明雁
- 关键词：细胞培养
- 补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响
- 目的探讨补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附作用的影响及机理。方法以培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白(OXLDL)或在实验体系中加入灌服补肾宁心兔血清,以孟加拉玫瑰红...
- 郝群李大金朱影袁敏敏王明雁孟毅
- 文献传递
- phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较
- 2004年
- 目的 比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。 方法 利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1 6His hCGβ C3d3;脂质体法介导phCMV1 6His hCGβ C3d3和pcDNA3 hCGβ C3d3转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg/ml)筛选抗性克隆 ,G4 18(30 0 μg/ml)维持培养、扩增 ,待阳性克隆 95 % 汇片时换用无血清培养基培养。放射免疫法检测hCGβ表达量 ,Westernblot鉴定表达产物 ,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合。反复冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,比较表达效率的变化。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。 结果 酶切鉴定及测序证实 phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确 ,并成功地在CHO细胞中获得了 6His hCGβ C3d3融合蛋白的表达。无血清培液中 2 4、4 8、72h融合蛋白的表达量分别为 4 96、5 2 7、6 33mIU/ml/ 1× 10 6细胞 (以hCGβ含量计算 ) ,phCMV1比 pcDNA3载体的表达效率高 1.4倍。 3次冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,表达效率无明显变化。表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ C3d3?
- 王秀丽李大金袁敏敏朱影
- 关键词：PCDNA3C3D3蛋白表达
- hCGβ-C3d3融合蛋白在乳酸杆菌的表达及鉴定被引量：8
- 2006年
- 目的探讨融合基因人绒毛膜促性腺激素(hCG)-βC3d3在干酪乳酸杆菌有效表达,为研究携hCG-βC3d3融合基因的乳酸杆菌直接黏膜免疫奠定基础。方法用分子生物学技术构建质粒pIlac.hCG-βC3d3,电穿孔转化干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)CECT 5276,挑选转化后的耐药菌落,在含红霉素的MRS培养基中培养,0.5%乳糖诱导后,在不同时间取上清,化学发光法检测hCGβ,免疫细胞化学鉴定融合蛋白。结果经测序证实目的基因构建正确。免疫化学发光测定显示,转化成功的重组干酪乳酸杆菌在乳糖的诱导下可分泌hCGβ。免疫细胞化学鉴定显示hCGβ与C3d3融合成功。结论实现了重组乳酸杆菌Lb.hCG-βC3d3分泌性表达融合蛋白hCG-βC3d3。
- 姚晓英李大金袁敏敏
- 关键词：免疫避孕
