程浩
- 作品数：13 被引量：82H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 永生化人前软骨干细胞株的构建被引量：2
- 2010年
- 背景:前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus40large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。目的:以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株。方法:采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞。利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照。阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线。以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达。结果与结论:贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别。传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P<0.01)。与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P<0.01)。第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性,成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560bp处有一特异形扩增条带,未转染的原代细胞未见条带。提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株。
- 尹德龙陈安民郭风劲王俊芳程浩
- 关键词：永生化软骨组织工程
- 脉冲电磁场对免疫磁性分选人前软骨干细胞增殖功能的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究脉冲电磁场对免疫磁性分选人前软骨干细胞（PSCs）增殖功能的影响。方法采用酶消化法从流产胎儿下肢股骨干骺端中收集细胞，选用免疫磁性分选技术分离出PSCs；经体外扩增培养后采用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、RT—PCR等技术鉴定纯化后的PSCs。采用50Hz 1mT脉冲电磁场间断刺激纯化后的PSCs，并绘制细胞生长曲线，采用MTT法测定细胞增殖活性，采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果从流产胎儿干骺端中成功培养出细胞表面表达成纤维生长因子受体-3（FGFR-3）标记物的人PSCs；免疫磁性分选系统能有效分离纯化PSCs；PSCs经脉冲电磁场刺激4d和6d后，发现能明显促进细胞增殖功能（P〈0．05），其S期细胞数量百分比较对照组显著增高（P〈0．01），细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均较对照组明显降低（P〈0．05）。结论免疫磁性分选系统能有效分离、纯化PSCs，脉冲电磁场刺激能显著提高体外培养人PSCs增殖功能并抑制细胞凋亡。
- 王俊芳夏仁云方煌陈安民尹德龙程浩
- 关键词：前软骨干细胞细胞培养脉冲电磁场
- 免疫磁性细胞分选技术分离纯化新生大鼠骨骺前软骨干细胞被引量：25
- 2004年
- 目的 探讨前软骨干细胞 ( precartilaginousstemcells,PSCs)的分离纯化方法。 方法 用免疫磁性分选技术分离有成纤维细胞生长因子受体 - 3(fibroblastgrowthfactorreceptor -3,FGFR - 3)表面标志的PSCs。用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光鉴定纯化后的PSCs。 结果免疫磁性分选技术获得高度纯化、高成活率的PSCs( >95 % )。 结论 免疫磁性分选技术能有效分离纯化PSCs。
- 游洪波陈安民程浩
- 关键词：软骨免疫干细胞细胞分选骨骺新生大鼠分选技术
- 不同手术入路治疗外伤性下颈椎骨折脱位的疗效比较被引量：6
- 2014年
- 目的探讨下颈椎脱位手术入路疗效。方法回顾分析2005年1月至2013年6月收治的下颈椎脱位患者191例,分别采用前路、后路或前后联合入路的方式进行手术治疗,比较手术时间、出血量、术后3个月颈髓损伤日本骨科协会评估治疗分数（JOA）评分和肺部感染发生率。结果术后随访3-9个月,平均5个月,前路、后路或前后联合入路之间比较或是两两之间比较,手术时间、出血量差异均有统计学意义,而术后3个月颈髓损伤JOA评分和肺部感染发生率差异无统计学意义,同组之间术前、术后JOA评分比较差异具有统计学意义。结论下颈椎脱位治疗选择合适的手术方式获得相同的疗效,并可缩短手术时间和减少组织损伤。
- 李兴艳程浩李锋陈安民郭风劲
- 关键词：颈椎脱位
- 平衡苯酚新方法
- 2002年
- 陈超陈安民程浩
- 关键词：实验室分子克隆
- 前软骨干细胞的分离培养及其鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :探讨体外分离、培养及鉴定前软骨干细胞 (PCSC) ,为相关的实验研究奠定基础。方法 :采用酶消化法从新生大鼠干骺端中收集细胞 ,用免疫磁珠法分选出前软骨干细胞 ,用DMEM F12培养基进行体外培养 ,用免疫组化方法鉴定 ,对分离出的前软骨干细胞进行相关分子生物学研究。结果 :从新生大鼠干骺端中成功培养出前软骨干细胞 ,培养条件下贴壁生长 ,成团块状 ,细胞表面有FGFR 3的标记物 ;细胞生长迅速。结论
- 程浩陈安民游洪波
- 关键词：前软骨干细胞细胞培养
- 胫骨平台骨折的现代治疗探讨被引量：6
- 2008年
- 目的总结近年来治疗胫骨平台骨折的经验教训，为临床选择更好的治疗方法、提高胫骨平台骨折手术疗效提供参考。方法回顾分析自2001-2007年收治的胫骨平台骨折89例，其中按照Schatzker分型复杂胫骨平台骨折（Ⅴ型，Ⅵ型）67例，男性75例，女性14例。均行切开复位，严格按照内固定原则分别采用螺丝钉和／或外固定架、钢板、微创内固定系统固定骨折进行治疗，必要时辅以关节镜探查镜下手术。结果75例得到随访，最短6个月，最长6年，平均31个月。骨折均愈合，疗效评定参照Merchant标准，术后6个月优良率为81．6％，术后1年优良率为89．3％。结论胫骨平台骨折应当考虑手术治疗，周密的术前计划、妥善处理软组织损伤、正确选择切口、灵活应用内外固定物及关节镜辅助均是手术成功的重要因素。
- 徐卫国易成腊陈安民李锋王体沛方煌郭风劲游洪波程浩印卫锋
- 关键词：胫骨平台骨折内固定关节镜
- 新生大鼠骨骺前软骨干细胞培养及细胞库建立被引量：7
- 2005年
- 目的 建立新生大鼠骨骺前软骨干细胞 (precartilagious stem cells,PSCs)库 ,为 PSCs作为组织工程种子细胞修复骨骺损伤的研究奠定基础。 方法 利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体 3(fibroblast growth factor receptor3,FGFR- 3)表面标志的骨骺 PSCs。将纯化后的 PSCs体外扩增至第 3代 ,采用液氮深低温保存细胞 ,应用 RT- PCR、免疫组织化学及免疫荧光等技术定期 (2、4周 )对复苏 PSCs行生物学特性鉴定。 结果 复苏后 PSCs存活率高 (>95 % ) ,细胞生长周期稍滞后。RT- PCR、免疫组织化学及免疫荧光检测均有较强的 FGFR- 3表达。经液氮冻存的 PSCs在细胞增殖、表型特征方面无显著变化 ,基本保持了原代 PSCs的生物学特性。 结论 成功建立了新生大鼠 PSCs细胞库 ,为应用组织工程技术修复骨骺损伤的研究提供良好的种子细胞。
- 游洪波陈安民程浩
- 关键词：成纤维细胞生长因子受体3新生大鼠细胞库骨骺损伤
- 猿肾病毒40介导的人前软骨干细胞永生化的实验研究
- 2009年
- 目的构建猿肾病毒40大T抗原基因（SV40Tag）介导的永生化人前软骨干细胞株，为下一步基因打靶研究其分化分子机制提供稳定的细胞来源。方法采用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T／PUR转染人前软骨干细胞（PSCs），经嘌呤霉素筛选，阳性克隆扩大培养并连续传代。用免疫组化、RT—PCR、Southern印迹杂交法对转染细胞进行鉴定，并检测SV40Tag在转染细胞中的表达及其与基因组的整合情况。结果筛选获得的阳性克隆扩大培养，命名为永生化前软骨干细胞（IPSCs），能连续传代培养，细胞生长迅速。免疫组化和RT-PCR证实IPSCs成纤维生长因子受体-3阳性，并可检测到SV40Tag mRNA及其蛋白的表达。Southern印迹杂交显示IPSCs基因组中存在SV40Tag cDNA。结论成功构建了SV40Tag介导的永生化人前软骨干细胞株。
- 王俊芳夏仁云方煌陈安民尹德龙程浩
- 关键词：干细胞永生化
- 人前软骨干细胞体外分离培养及鉴定的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨体外分离、培养人前软骨干细胞(PSCs)的可行性,分析其表型特点,为相关的实验研究奠定基础。方法采用酶消化法从流产胎儿干骺端中收集细胞,用免疫磁性分选技术分离出前软骨干细胞,体外扩增培养,用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定纯化后的PSCs。结果从流产胎儿干骺端中成功培养出人前软骨干细胞,细胞表面表达成纤维生长因子受体-3(FGFR-3)标记物,细胞生长迅速。结论在体外培养条件下可以从流产胎儿干骺端中分离培养出较高丰度的前软骨干细胞。
- 王俊芳夏仁云方煌陈安民李锋尹德龙程浩
- 关键词：前软骨干细胞细胞培养
