王瑛
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EBP50影响HeLa细胞微丝骨架的分布和定位被引量：4
- 2008年
- 目的:通过研究与膜-细胞骨架连接蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)家族相结合的磷酸化蛋白50(ERM-binding phospho-protein-50,EBP50)对HeLa细胞微丝骨架含量、分布的影响及受血小板源性生长因子PDGF(platelet-derived growth factor)刺激后,微丝骨架在细胞中定位的变化及微丝骨架定位变化与EBP50的关系,阐明EBP50蛋白影响肿瘤细胞生长迁移的分子机制。方法:将pBK-CMV-HA空载体和pBK-CMV-HA-EBP50wt重组质粒分别转染HeLa细胞系,G418进行稳定表达细胞系的筛选,并用Western免疫印迹方法进行蛋白表达的鉴定;利用Western免疫印迹、免疫荧光细胞化学染色等方法结合光镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观察和分析HA-HeLa与HA-EBP50-HeLa微丝骨架的含量及分布的异同;然后使用10ng/ml和20ng/mlPDGF37℃刺激细胞15min后,分别观察及分析两组细胞微丝骨架的分布情况及EBP50在细胞中定位的变化。结果:Western免疫印迹鉴定证实转染的外源性EBP50cDNA片段可在HeLa细胞系中成功表达EBP50蛋白,证明获得稳定表达EBP50蛋白的HeLa细胞系。Western免疫印迹及免疫荧光结果证实,转染空载pBK-CMV-HA的HeLa细胞微丝骨架粗大疏松,方向不一,交错排列;与其相比,EBP50虽然对HeLa细胞微丝骨架的含量没有明显影响,但能够促使细胞微丝骨架呈致密细丝状,平行规则排列,并沿细胞极性分布;并且在PDGF刺激下,EBP50能够与微丝骨架一起自胞浆迁移至膜上,并共定位。结论:EBP50能改变HeLa细胞微丝骨架的分布。在受到PDGF刺激时,EBP50还能使HeLa细胞系的微丝骨架定位于膜表面。EPB50可能通过影响微丝骨架的分布和定位来发挥其影响肿瘤细胞生长迁移的功能。
- 郑君芳王瑛陈鹏贺俊崎
- 关键词：微丝骨架HELA细胞EBP50
- 裸质粒与脂质体介导转染方法对大鼠平滑肌细胞CYP2J3基因表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率。方法将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液11,12-EET含量。实验分为裸质粒转染组(2J3)、脂质体介导转染组(L2J3)和对照组,转染后24h和48h收集细胞。结果转染后24h,2个转染组CYP2J3 mRNA表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);L2J3组蛋白含量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01),2J3组蛋白含量较L2J3组高,差异有统计学意义(P<0.05)。培养液11,12-EET含量在3组间差异无统计学意义。转染后48h2个转染组CYP2J3 mRNA表达较24h时弱,但仍较对照组高,脂质体转染组较裸质粒转染组CYP2J3 mRNA表达增强;2J3组及L2J3组蛋白含量均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);2个转染组培养液中11,12-EET浓度较对照组高,脂质体转染组表达高于裸质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论裸质粒直接转染能成功导入CYP2J3基因并表达产物。
- 常静曾翔俊王红霞穆晶刘琨王瑛李珊珊张立克
- 关键词：裸质粒基因转染
- 雌激素对乳腺癌细胞中PDZK1蛋白表达量的影响被引量：6
- 2009年
- 目的观察雌激素17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)及其抑制剂对雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌细胞株ER-MDA-MB-231、MCF-7中PDZK1(PDZ domain containing1)蛋白表达量的影响。方法应用Western blotting法观察E2及ICI182,780在不同时间、不同浓度作用下2种细胞内PDZK1蛋白表达量的变化。结果浓度为10-8mol/L的E2作用72h可以使MCF-7、ER-MDA-MB-2312株细胞内PDZK1蛋白表达量显著升高;而抑制剂ICI182,780则相反,以10-6mol/L的浓度作用36h即可明显抑制ER-MDA-MB-231细胞中PDZK1蛋白的表达,且以上变化表现出剂量、时间依赖关系。结论PDZK1是雌激素应答蛋白,它在ER阳性的乳腺癌细胞中的表达受雌激素信号转导通路的调节。雌激素及ICI182,780可能通过调节其蛋白表达量来影响肿瘤细胞的生长和耐药性。
- 王瑛杨晓梅郑君芳陈鹏赵晶晶贺俊崎
- 关键词：雌激素乳腺癌细胞
