目的:应用反义锁核酸与拉米夫定作用HepG2.2.15细胞,对他们抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)效果进行比较.方法:设计针对HBV翻译起始区S基因mRNA的反义寡核苷酸,并进行锁核酸修饰,以阳离子脂质体介导反义锁核酸转染HepG2.2.15细胞;拉米夫定组直接作用HepG2.2.15细胞;分别于用药后第2、4、6、8、10天收集细胞培养上清液.用ELISA法和FQ-PCR法检测收集上清液HBsAg、HBeAg和HBVDNA的含量.MTT法分别检测反义锁核酸与拉米夫定对细胞存活率的影响.结果:拉米夫定对HBVDNA具有明显抑制作用,最高可达46.52%,但对HBsAg、HBeAg影响较小;反义锁核酸对HBsAg、HBeAg及HBVDNA均有较强抑制作用,对HBsAg、HBeAg和HBVDNA的最高抑制率分别达67.69%、59.71%和62.96%(P<0.05),且抑制随时间呈增高趋势.反义锁核酸与拉米夫定对细胞代谢均无明显影响.结论:反义锁核酸抗HBV作用机制与拉米夫定不同,反义锁核酸抗HBV作用明显优于拉米夫定.
目的:探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S基因的反义锁核酸(LNA)对乙型肝炎转基因小鼠HBV复制和表达的影响.方法:将30只HBV转基因小鼠随机分为5组,每组6只.第1组为5%GLU液对照组,第2组为空脂质体对照组,第3组为单LNA组,第4组为S-ASODN脂质体组,第5组LNA脂质体组.反义LNA经尾静脉注入小鼠体内,采用ELISA法检测血清HBsAg;PCR定量检测血清HBVDNA含量;免疫组织化学法检测肝细胞HBsAg的表达;自动生化分析仪检测ALB、ALT、BUN、CR、ApoA1、ApoB等指标;小鼠肝脏、肾脏做常规病理切片HE染色,观察反义LNA对小鼠脏器的影响.结果:注射反义LNA1d、3d、7d、14d后,LNA-脂质体组对血清HBsAg的表达抑制率分别为41.7%、52.8%、57.8%及30.5%.对HBVDNA的抑制率分别为18.5%、36.1%、52.9%和32.7%,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05);全自动生化分析仪检测血清中ALB、ALT、BUN、CR、ApoA1、ApoB等指标,各组结果与对照组比较均无显著性差异(P>0.05);小鼠肝细胞HBsAg的表达显著低于对照组.HE染色显示小鼠肝肾功能及组织学未见异常.结论:HBVS基因反义LNA对乙型肝炎病毒转基因鼠HBV复制和表达有显著抑制作用.
